《基因工程載體》ppt課件 (2)-預(yù)覽頁
【正文】 征等，賦予細(xì)菌一些額外的特性（非必須）。 如： F質(zhì)粒（性質(zhì)粒、或 F因子）： 又叫 自我轉(zhuǎn)移型質(zhì)粒 。 符合基因工程的安全要求。 三、質(zhì)粒的不相容性 (inpatibility,又稱質(zhì)粒的不親和性 ) 在沒有選擇壓力的情況下，兩種親緣關(guān)系密切的不同質(zhì)粒，不能夠在同一個寄主細(xì)胞系中穩(wěn)定共存，這一現(xiàn)象稱為 質(zhì)粒的不相容性 ,又稱質(zhì)粒的不親和性。 三、質(zhì)粒載體的構(gòu)建 2. 質(zhì)粒的命名 用小寫字母 p代表質(zhì)粒（ plasmid），在 p字母后用兩個大寫字母代表發(fā)現(xiàn)這一質(zhì)粒的作者或?qū)嶒?yàn)室名稱，再加上質(zhì)粒編號。 （ 1） 具有復(fù)制起點(diǎn)（ ORI） 4. 質(zhì)粒載體必須具備的基本條件 （ 2）具有抗菌素抗性基因 （ 3）若干限制性內(nèi)切酶的單一位點(diǎn)： 是篩選的標(biāo)志。 （ 4）具有較小的分子量和較高的拷貝數(shù)。 （ 1）類型 天然質(zhì)粒，屬低拷貝型。 （ 4）克隆位點(diǎn) pSP2124質(zhì)粒的 Ampr基因 2. pBR322： （ 1）元件來源 F. Bolivar和 . Rodriguez人工構(gòu)建載體。 24個克隆位點(diǎn)。屬正選擇載體。 （ 2）長度 約 （ 3）克隆位點(diǎn) 10個連續(xù)的單一限制酶切位點(diǎn)，位于 lacZ’基因的 5’端。 lacZ只有在 4聚體的狀態(tài)下才有功能 . C端大部分 N端的 1141aa C端大部分 N端的 1141aa C端大部分 N端的 1141aa C端大部分 N端的 1141aa 4聚體 2）受體菌 lacZ突變（ lacZ?M15） 受體菌基因組的 ?半乳糖苷酶基因的氨基端有缺失（缺失 ?肽），不能形成 4聚體的活性酶，不能分解 Xgal 。 C端大部分 N端的 1141aa pUC lacZ’ 受體菌 lacZ? 3）載體 lacZ’與 ?互補(bǔ) 4） ?互補(bǔ)的插入失活 pUC載體上 LacZ’的 5‘端有一段多克隆位 點(diǎn) (MCS)區(qū)，本身雖不干擾 LacZ’的合成， 但插入外源基因就會阻止 LacZ’的合成。從而互補(bǔ)。 IPTG誘導(dǎo)的結(jié)果： 無質(zhì)粒的 受體菌 ?半乳糖苷酶部分缺失，不能分解 Xgal；無抗菌素抗性 在含抗菌素和 Xgal的培養(yǎng)基上培養(yǎng) 無菌斑生長 質(zhì)粒轉(zhuǎn)化的受體菌 ?半乳糖苷酶的缺失被載體產(chǎn)物?互補(bǔ)，能分解Xgal。 ③ 克隆便利 具有多克隆位點(diǎn)（ MCS），使有兩個不同粘性末端的外源 DNA方便地插入。大分子量的噬菌體生命周期比較復(fù)雜；對寄主的依賴性較低。 噬菌體的生命周期 噬菌體的溶菌生命周期 噬菌體的溶原生命周期 （ 1） 噬菌體的溶菌生命周期 噬菌體的生命周期分為溶菌周期和溶源周期 只具有溶菌生長周期的噬菌體顆粒叫 烈性噬菌體 。 1. ?DNA分子的特點(diǎn) cos位點(diǎn)（ cohensiveend site）： λ噬菌體線性 DNA分子的粘性末端及其環(huán)化作用 ?噬菌體和其 DNA 2. ?噬菌體的基因組特點(diǎn) ?噬菌體感染細(xì)菌的早期：雙鏈進(jìn)行 ?型復(fù)制。 三、單鏈?zhǔn)删w載體 M1 f fd 噬菌體 單鏈環(huán)狀 DNA的絲狀大腸桿菌噬菌體： M13 噬菌體 （ 2） 復(fù)制型（ RF）是雙鏈環(huán)狀 DNA。 （ 1） +DNA。 M13噬菌體只感染 雄性 大腸桿菌。 （ 1）克隆區(qū)域的選定 ① 基因間隔區(qū)（ intergenic region, IG區(qū)） IG區(qū)內(nèi)只有一個 BsuI 切點(diǎn)。 利用 ?肽序列中的三個單一酶切位點(diǎn)（ Bgl II、 Ava II 和 Pvu I）。 ?噬菌體屬 溫和噬菌體 。 ? 噬 菌 體 的 侵 染 ?噬菌體的 DNA分子 ?DNA的分子為 49kb, 大多數(shù)基因已經(jīng)測序和定位 。 上述通過粘性末端互補(bǔ)形成的雙鏈區(qū)被稱為 cos位點(diǎn) （ cohesive end site） .另外的作用是內(nèi)切核酸酶的識別序列 。 M13 噬 菌 體 的 侵 染
環(huán)評公示相關(guān)推薦
鄂ICP備17016276號-1