【正文】 物的纖溶酶用于溶血栓。第2章 酶學(xué)基礎(chǔ)1. 酶的化學(xué)本質(zhì)？酶與其他無機(jī)或者有機(jī)催化劑相比較，具有哪些催化特性？化學(xué)本質(zhì)：生物催化劑。絕對(duì)專一性：一種酶只能催化一種底物進(jìn)行一種反應(yīng)。酶與底物的結(jié)合如同一把鑰匙對(duì)一把鎖一樣。酸堿催化：指通過向反應(yīng)物提供質(zhì)子或從反應(yīng)物奪取質(zhì)子而穩(wěn)定過渡態(tài)、加速反應(yīng)的一類催化機(jī)制?；钚灾行牡臉?gòu)成：結(jié)合中心：與底物結(jié)合的部位，決定酶的專一性；催化中心：促進(jìn)底物發(fā)生化學(xué)反應(yīng)的部分，決定酶所催化反應(yīng)的性質(zhì)。是所有的酶必須具備的空間結(jié)構(gòu)，是維持酶活性部位所必需的構(gòu)象。如：乳酸脫氫酶LDH，可裝配成HH3M、H2MHMM4五種四聚體。2. 中間產(chǎn)物學(xué)說和過渡態(tài)理論？中間產(chǎn)物學(xué)說：酶的中間產(chǎn)物學(xué)說是由Brown（1902）和Henri（1903）提出的。反應(yīng)式為S+E=ES→E+P，這里S代表底物，E代表酶，ES為中間產(chǎn)物，P為反應(yīng)的產(chǎn)物過渡態(tài)理論：過渡態(tài)理論即活化絡(luò)合物理論，（transitionstate theory）。（3,4題合成一個(gè)大題）V=Vmax[S]/（Km+[S]）意義：（1）當(dāng)v=Vmax/2時(shí)，Km=[S]。（3）可用于判斷反應(yīng)級(jí)數(shù)：當(dāng)[S]＜，反應(yīng)為一級(jí)反應(yīng)；當(dāng)[S]＞100Km時(shí)，v=Vmax，反應(yīng)為零級(jí)反應(yīng)；＜[S]＜100Km時(shí)，為混合級(jí)反應(yīng)。4. 如何測(cè)定Km,Vmax ? LineweaverBurk雙倒數(shù)作圖法的動(dòng)力學(xué)表述形式。（2）中等大小的有機(jī)分子：某些還原劑，如半胱氨酸、巰基乙醇、抗壞血酸，作用機(jī)制是使酶中的二硫鍵還原成巰基，從而提高酶活性或與底物、酶或ES復(fù)合；EDTA（乙二胺四乙酸），作用機(jī)制是金屬螯合劑，解除重金屬離子對(duì)酶的抑制作用。由容器、攪拌器及保溫裝置組成，底物與酶一次性投入反應(yīng)器內(nèi)，產(chǎn)物一次性取出，反應(yīng)完成之后，酶（細(xì)胞）用過濾法或超濾法回收，再轉(zhuǎn)入下一批反應(yīng)的一類反應(yīng)器。即可用于處理黏度較大和含有固體顆粒的底物溶度，同時(shí)亦可用于需要供氣體或排放氣體（即固、液、氣三相反應(yīng)）的酶反應(yīng)器稱為流化床式反應(yīng)器混合均勻，傳質(zhì)和傳熱效果好，溫度和PH值的調(diào)節(jié)控制比較容易，不易堵塞，對(duì)粘度較大反應(yīng)液也可進(jìn)行催化反應(yīng)鼓泡式反應(yīng)器：是利用從反應(yīng)器底部通入的氣體產(chǎn)生的大量氣泡，在上升過程中起到提供反應(yīng)底物和混合兩種作用的一類反應(yīng)器。清洗比較困難噴射式反應(yīng)器通入高壓噴射蒸汽，實(shí)現(xiàn)酶與底物的混合，進(jìn)行高溫短時(shí)催化反應(yīng)，適用于某些耐高溫酶的一類反應(yīng)器稱為噴射式反應(yīng)器。傳質(zhì)是指底物和產(chǎn)物在反應(yīng)介質(zhì)中的傳遞。特點(diǎn)：優(yōu)點(diǎn)是設(shè)備簡(jiǎn)單、操作方便；缺點(diǎn)是易受影響、工藝路線復(fù)雜。2. 什么是組成型酶和調(diào)節(jié)型酶？組成型酶：生物細(xì)胞中合成的酶的量比較恒定，環(huán)境對(duì)這些酶的合成速率影響不大。3. 什么是酶的誘導(dǎo)？什么是酶的阻遏？什么實(shí)驗(yàn)證明了這兩種現(xiàn)象？酶的誘導(dǎo)：某些代謝物可以誘導(dǎo)某些酶的合成，是通過促進(jìn)為該酶編碼的基因的表達(dá)而進(jìn)行的，這種現(xiàn)象叫做酶合成的誘導(dǎo)。證明實(shí)驗(yàn)：（1）大腸桿菌生長(zhǎng)在無機(jī)鹽和葡萄糖的培養(yǎng)基上時(shí)，檢測(cè)到細(xì)胞內(nèi)有色氨酸合成酶的存在；（2）在上述培養(yǎng)基中加入色氨酸，檢測(cè)發(fā)現(xiàn)細(xì)胞內(nèi)色氨酸合成酶的活性降低，直至消失；（3）表明色氨酸的存在組織了色氨酸合成酶的合成，體現(xiàn)了菌生長(zhǎng)的經(jīng)濟(jì)原則：不需要就不合成。液體深層發(fā)酵：采用液體培養(yǎng)基，經(jīng)滅菌、冷卻后接種產(chǎn)酶菌，在一定條件下發(fā)酵產(chǎn)酶。采用添加誘導(dǎo)物、解除阻遏物、流加等技術(shù)提高產(chǎn)酶量。9. 設(shè)計(jì)一個(gè)實(shí)驗(yàn)方案從自然環(huán)境中篩選獲得一株產(chǎn)α淀粉酶的微生物，并獲取其編碼α淀粉酶的基因。填空機(jī)械破碎——通過機(jī)械運(yùn)動(dòng)產(chǎn)生的剪切力，使組織、細(xì)胞破碎?！匀芊?、外加酶制劑法。大題鹽析沉淀法、等電點(diǎn)沉淀法、有機(jī)溶劑沉淀法、復(fù)合沉淀法、選擇性變性沉淀法。5. 什么是膜分離？膜分離的基本類型和截留的主要物質(zhì)。（3）擴(kuò)散膜分離：透析。離子交換層析：利用離子交換劑上的可解離基團(tuán)（活性基團(tuán)）對(duì)各種離子的親和力不同而達(dá)到物質(zhì)分離。7. 對(duì)于某種酶制劑，如α淀粉酶，如何檢查其是否達(dá)到預(yù)期純化的精度要求？計(jì)算酶活力和比活力、回收率、提純倍數(shù)。第7章 固定化酶和細(xì)胞1. 酶固定化是為了克服游離酶應(yīng)用過程中的哪些缺點(diǎn)？（1） 酶的穩(wěn)定性較差：除了某些耐高溫的酶，以及胃蛋白酶等可以耐受較低的pH條件以外，大多數(shù)的酶在高溫、強(qiáng)酸、強(qiáng)堿和重金屬離子等外界因素影響下，都容易變性失活。2. 什么是固定化酶？固定化酶的優(yōu)點(diǎn)和缺點(diǎn)？ 固定化酶：在一定空間內(nèi)呈閉鎖狀態(tài)的酶，能連續(xù)的進(jìn)行反應(yīng)，反應(yīng)后的酶可以回收重復(fù)利用。優(yōu)點(diǎn)是操作簡(jiǎn)便，條件溫和，不會(huì)引起酶變性失活，載體廉價(jià)易得，而且可以反復(fù)使用。缺點(diǎn)是離子鍵結(jié)合力較弱，結(jié)合力不牢固，在pH和離子強(qiáng)度等條件改變時(shí)，酶容易脫落。共價(jià)結(jié)合法：通過共價(jià)鍵將酶蛋白分子上的反應(yīng)集團(tuán)與載體表面反應(yīng)基團(tuán)結(jié)合，從而使酶固定化的方法。優(yōu)點(diǎn)是不與酶蛋白氨基酸殘基結(jié)合，很少改變酶結(jié)構(gòu)，酶活回收率高。固定化原生質(zhì)體：細(xì)胞產(chǎn)生的許多代謝物不能分泌到胞外，細(xì)胞壁對(duì)物質(zhì)擴(kuò)散的障礙是其原因之一。意義：提高酶的活力；增強(qiáng)酶的穩(wěn)定性；降低或消除酶的抗原性；研究和了解酶分子中主鏈、側(cè)鏈、組成單位、金屬離子和各種物理因素對(duì)酶分子空間構(gòu)象的影響。各類失活因子的抵抗力：修飾酶對(duì)蛋白酶、抑制劑均有一定的抵抗能力，從而提高其穩(wěn)定性。，原理及一般流程。流程：1基因的選擇：選擇編碼所需蛋白質(zhì)的DNA序列 2突變或重組：通過易錯(cuò)PCR引入隨即突變或DNA Shuffling等方法增加基因序列的多樣性。6分離改良基因并重復(fù)上述過程，直至獲得所需性質(zhì)的蛋白質(zhì)。4. 有機(jī)介質(zhì)酶催化反應(yīng)的優(yōu)點(diǎn)。 3由于有機(jī)溶劑的存在，水量減少，大大降低了許多需要水參與的副反應(yīng)，如酸酐的水解，?；D(zhuǎn)移等。抑制作用指一些化合物能夠與酶的必需基團(tuán)結(jié)合，改變必需基團(tuán)的結(jié)構(gòu)和性質(zhì)，酶未發(fā)生變性，從而引起酶活性的下降，甚至使酶的活性完全喪失。不能用透析、超濾等物理方法解除抑制而使酶恢復(fù)活性。 2動(dòng)力學(xué)方法：在測(cè)定酶活力系統(tǒng)中加入一定量的抑制劑，測(cè)定酶反應(yīng)的初速度，以初速度和酶濃度作圖區(qū)別。由于這類物質(zhì)并不是與底物競(jìng)爭(zhēng)與活性中心的結(jié)合，所以稱為非競(jìng)爭(zhēng)性抑制。核酶的分類？什么是脫氧核酶？發(fā)現(xiàn)：核酶是美國(guó)科學(xué)家Cech和Altman發(fā)現(xiàn)的具有酶的特異性催化功能的一類RNA。脫氧核酶：具有酶活性的DNA分子稱為脫氧核酶。原理：用設(shè)計(jì)好的半抗原，通過與載體蛋白偶聯(lián)制成抗原。對(duì)抗抗體進(jìn)行篩選，獲得具有原來酶活性的抗體酶。3. 什么是模擬酶，其酶學(xué)基礎(chǔ)是什么？根據(jù)Kirby分類方法，模擬酶的分類？（大題）模擬酶：又稱人工合成酶，是一類利用有機(jī)化學(xué)方法合成的，比天然酶簡(jiǎn)單的非蛋白質(zhì)分子或蛋白質(zhì)分子，以這些分子作為模型來模擬酶對(duì)其作用底物的結(jié)合和催化過程。單純合成的酶樣化合物：化學(xué)合成的具有酶樣催化活性的簡(jiǎn)單分子。（名詞解釋）20