層析分離技術(shù)與設(shè)備-預(yù)覽頁
【正文】 ：磺酸基團(tuán) (RSO3H) ?—— 中酸性 ：磷酸根 (PO3H2)、亞磷酸根 (PO2H2) ?—— 弱酸性 ：羧基 (COOH)、酚羥基 (OH) （ 2）陰離子交換樹脂 ?—— 強(qiáng)堿性 ：季胺鹽 [N+(CH3)3] ?—— 中堿性 ：叔胺 [N(CH3)2]、仲胺 (NHCH3 ) 、伯胺 (NH2 ) ?—— 弱堿性 ：伯胺 (NH2)、二乙基氨基乙基 (DEAE) 離子交換劑的形狀 ?纖維狀、微粒狀、珠狀、無孔微球狀、大孔微球狀 第 5節(jié) 親和層析法 概念 ?親和層析是利用待分離的生物大分子和它的特異性配體間具有的特異親和力，使之與雜質(zhì)成分分離的一類特殊層析技術(shù)。 二、親和層析介質(zhì) 基質(zhì) （ 1）基質(zhì)的類型與性質(zhì) ?—— 常用的有：纖維素、交聯(lián)葡聚糖、瓊脂糖、聚丙烯酰胺、多孔玻璃珠 （ 2）基質(zhì)的活化 ?① 多糖基質(zhì)的活化 ?—— 溴化氰活化：溴化氰活化法是最常用的活化方法之一。 ?③ 多孔玻璃珠的活化：通常采用硅烷化試劑與玻璃反應(yīng)生成烷基胺－玻璃 （ 3）間隔臂分子 ?① 間隔臂的作用：將配體支撐到基質(zhì)骨架外，減少空間位阻效應(yīng)，增加配體對(duì)待分離的生物大分子的契合作用空間，提高契合效率。 配體 （ 1）配體的性質(zhì) ?—— 配體與待分離的物質(zhì)有適當(dāng)?shù)挠H和力，能夠可逆性結(jié)合。 第 6節(jié) 層析分離設(shè)備及操作 一、柱層析的基本裝置 系統(tǒng)組成 ?液相供應(yīng)單元、分離單元、監(jiān)測單元、收集單元、控制單元 液相供應(yīng)單元 （ 1）組成：泵、管路、閥門 （ 2）泵 ?常用蠕動(dòng)泵 ?要求：無死角、易拆洗、耐滅菌、脈沖小、耐腐蝕、運(yùn)行穩(wěn)定 （ 3）閥門 ?常用隔膜閥 ?控制方式：電磁式、壓縮空氣式、手動(dòng)控制 分離單元 —— 層析柱 ?柱材料：不銹鋼、玻璃、塑料、不銹鋼襯塑料 ?柱底板： 20um孔徑的篩網(wǎng)或篩板，支撐層析介質(zhì) ?液流分配器：大規(guī)模生產(chǎn)用。 ?電導(dǎo)檢測器用于監(jiān)測離子強(qiáng)度變化，以控制洗脫、清洗和平衡過程。 （ 3）介質(zhì)處理 將層析用的基質(zhì)（如吸附劑、樹脂、凝膠等）在適當(dāng)?shù)娜軇┗蚓彌_液中溶脹，并用適當(dāng)濃度的酸（ ~1N）、堿（ ~1N）、鹽（ ~1M）溶液洗滌處理，以除去其表面可能吸附的雜質(zhì)。注意不能干柱、分層，否則必須重新裝柱。 （ 2）平衡操作 ?柱子裝好后，用恒流泵在恒定壓力下以平衡緩沖液（有一定的 pH和離子強(qiáng)度）走柱子，平衡與洗脫時(shí)的壓力盡可能保持相同。 （ 2）進(jìn)料（上樣） ?加樣量：一般，加樣量盡量少些，分離效果比較好。 洗脫 ?洗脫的方式可分為簡單洗脫、分步洗脫和梯度洗脫三種。 ?每次用一種洗脫液將其中一種組分快速洗脫下來。最常用的是濃度梯度。 清洗和再生 ?清洗的作用：洗去牢固附著在層析介質(zhì)上
醫(yī)療健康相關(guān)推薦
鄂ICP備17016276號(hào)-1