有關(guān)人鼠嵌合抗體制備的可行性-預(yù)覽頁(yè)
【正文】 淋巴細(xì)胞CD3表面抗原單克隆抗體濟(jì)南天康生物制品公司CD3鼠源抗移植排斥臨床研究注射用抗腎病綜合癥出血熱病毒單克隆抗體（I型）武漢生物制品所，第四軍醫(yī)大學(xué)鼠源出血熱臨床Ⅲ期抗人肝癌單抗Hepama這是全球第一個(gè)用于治療原發(fā)性肝癌的藥物，也是我國(guó)第一個(gè)具有自主知識(shí)產(chǎn)權(quán)的抗體類藥物。2． 主要試劑氨芐西林鈉，限制性內(nèi)切酶，T4 DNA連接酶，Taq DNA酶，Trizol RNA提取試劑盒，反轉(zhuǎn)錄PCR試劑盒，瓊脂糖，嗅化乙錠(EB)，dNTPs，DNA Marker，DNA凝膠回收試劑盒，質(zhì)粒抽提試劑盒，胎牛血清，無(wú)血清培養(yǎng)液，二甲亞砜(DMSO)，轉(zhuǎn)染試劑盒LipofectamineTM 2000，MTX，抗原，羊抗人IgG Fc片段HRP酶標(biāo)抗體?；厥罩劓淰H（約360 bp）、輕鏈VL（約330 bp）片段，插入Teasy載體，各送3份樣品測(cè)序。2． 嵌合抗體表達(dá)載體構(gòu)建改造含信號(hào)肽及人Ig重鏈和輕鏈C區(qū)基因片段的單克隆位點(diǎn)設(shè)計(jì)含重鏈信號(hào)肽起始位點(diǎn)序列及酶切位點(diǎn)Nhe Ⅰ的上游引物HLF（KOZAK+4G，即GCCGCCATGG），和含Xho Ⅰ位點(diǎn)的下游引物HLR，以質(zhì)粒pAcκCH3為模板，擴(kuò)增出重鏈信號(hào)肽基因片段；設(shè)計(jì)含Xho Ⅰ和Kpn Ⅰ位點(diǎn)上游引物HCF，和含F(xiàn)urin（RKRR）序列及酶切位點(diǎn)Xba Ⅰ的下游引物HCR，以質(zhì)粒pAcκCH3為模板，擴(kuò)增出重鏈恒定區(qū)基因片段片段；用Xho Ⅰ連接上述片段得到含重鏈信號(hào)肽、MCS及重鏈恒定區(qū)的基因片段。 插入含鼠源Ig重鏈和輕鏈V區(qū)基因，經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳分離純化目的片段后,連接、轉(zhuǎn)化大腸桿菌， 陽(yáng)性克隆，富集培養(yǎng)后提取質(zhì)粒進(jìn)行酶切鑒定。轉(zhuǎn)染72 h 后，加含MTX的選擇性培養(yǎng)基進(jìn)行篩選。5． 抗體腹水生產(chǎn)腹腔種植轉(zhuǎn)染瘤細(xì)胞，5~7 天后抽
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