【正文】 學(xué)已成為生命科學(xué)的基礎(chǔ)學(xué)科之一，其基本理論和實驗技術(shù)已滲透到生物學(xué)的各個領(lǐng)域并促進(jìn)了一批新學(xué)科的興起和發(fā)展。 3 原理 質(zhì)粒的提取 質(zhì)粒是一種染色體外的穩(wěn)定遺產(chǎn)因子，大小從 1200kb不等，為雙鏈閉環(huán)的 DNA 分子，并以超螺旋狀態(tài)存在于宿主細(xì)胞中。電泳是帶電物質(zhì)在電場中向著與其相反的電極移動的現(xiàn)象。 限制性酶切及表達(dá)載體的構(gòu)建 限制性內(nèi)切酶是一種能夠識別和切割 DNA雙鏈內(nèi)特殊的核苷酸序列。 10 大腸桿菌轉(zhuǎn)化態(tài)細(xì)胞的制備以及重組質(zhì)粒的轉(zhuǎn)化 所謂感受態(tài)，即指受體細(xì)胞最容易接受外源基因并實現(xiàn)轉(zhuǎn)化的一種生理狀態(tài)，它是由受體菌的遺傳決定的，同時也受菌齡，外界環(huán)境因子等影響。沉淀中加入 TE 緩沖液，充分懸浮。加氯仿 /異戊醇，混勻，離心，取上清，加酚 / 11 氯仿 /異戊醇后，取上清。 質(zhì)粒 DNA的提取 取培養(yǎng)物離心 2min，棄上清，重復(fù)一次分別加溶液 Ⅰ ，溶液 Ⅱ ，溶液 Ⅲ 以及相關(guān)的操作結(jié)束后， 4 ℃ 8000rpm離心后取上清液，然后加入等體積的苯酚：氯仿：異 戊醇（ 25：24： 1），混勻， 12020rpm 離心。 12 大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞的制備與重組質(zhì)粒的轉(zhuǎn)化 取大腸桿菌培養(yǎng)液 2ml 至 Eppendorf 管中，冰浴使其停止生長， 4℃ 離心，棄去上清液。 外源基因的誘導(dǎo)表達(dá)及 SDSPAGE 將導(dǎo)入重組子的 BL21 菌落接種于 2ml含有 Amp和氯霉素的 LB培養(yǎng)基中，取培養(yǎng)液 100ul于 5ml含 Amp的 LB 培養(yǎng)基上培養(yǎng) 23h，然后加入四環(huán)素培養(yǎng)，取 1ml 樣品作為IPTG誘導(dǎo)前的樣品， 20℃ 保存。 5 結(jié)果 分析 13 中測得 A280 為 ， A260 為 。 A280/A260為 ，目前說明比較純凈，要證明是否純凈，還需進(jìn)一步電泳才能肯定。 Abstract: This paper mainly in animal transgenic technique application analysis of a concrete and overview, allows us to more deep knowledge and understanding of GM technology, and are used for example detailed, prehensive introduction to the traditional methods of transgenic animals and gradually developed in recent years to improve the efficiency of transgenic technology, such as: nonsitespecific integration of transgenic methods, Gene targeting, and so on. Comprehensive now, its on the application of transgenic technology, and social situation of transgenic technology. Keywords: The animal transfers the gene technology。 Prospect forecast. 1 15 轉(zhuǎn)基因動物技術(shù)的核心，是把遺傳的功能單位 ──基因轉(zhuǎn)移到動物體內(nèi)，使它成為動物體內(nèi)的一部分。人們常說的“遺傳工程 ”、 “基因工程 ”、 “遺傳轉(zhuǎn)化 ”均為轉(zhuǎn)基因的同義詞。是在顯微鏡下將外源基因注射到受精卵細(xì)胞的原核內(nèi)，注射的外源基因與胚胎基因組融合，然后進(jìn)行體外培養(yǎng)， 最后移植到受 16 體母畜子宮內(nèi)發(fā)育，這樣分娩的動物體內(nèi)的每一個細(xì)胞都含有新的 DNA片段。 Haskell等應(yīng)用該方法制作了轉(zhuǎn)基因牛。 Fujiwara 等建立了 210 kb YAC DNA轉(zhuǎn)基因小鼠 ,在乳腺獲得高水平表達(dá)人乳白蛋白 ,而未表現(xiàn)出普通轉(zhuǎn)基因鼠所出現(xiàn)的位置效應(yīng)。 Thomas and Capecch 首先對小鼠 ES 細(xì)胞進(jìn)行了基因打靶 , 然后將此打靶的 ES 細(xì)胞移植進(jìn)入小鼠囊胚 , 將此重組胚胎移植進(jìn)入代 18 孕母鼠 , 最后產(chǎn)出嵌合體仔鼠 ,通過相互交配獲得基因敲除的純合小鼠。一般在體細(xì)胞克隆研究中都是制備異體克隆。 同體重組胚胎移植后克隆動物出生率達(dá) 23%, 高于異體胚的 %。 3 自從 1980年以來，顯微注射仍然是常用的動物基因技術(shù)，但它的進(jìn)行卻需要昂貴的設(shè)備和訓(xùn)練有素的人員，而且效率低下。 [3] 轉(zhuǎn)基因動物技術(shù)在醫(yī)療領(lǐng)域的應(yīng)用 ——生長激素的合成（促進(jìn)動物生長） GH的表達(dá)水平在不同的轉(zhuǎn)基因?qū)嶒炛g和同一轉(zhuǎn)基因?qū)嶒灥牟煌瑒游飩€體之間差異很大。 [4] 動物轉(zhuǎn)基因技術(shù)在畜牧業(yè)領(lǐng)域的應(yīng)用 動物轉(zhuǎn)基因技術(shù)在改變畜禽的產(chǎn)乳性狀、肉用品質(zhì)、毛皮性狀以及抗藥性等方面有巨大的應(yīng)用價值。 轉(zhuǎn)基因動物技術(shù)在異種器官移植中的應(yīng)用 建立轉(zhuǎn)基因動物避免 HAR，已經(jīng)是移植外科學(xué)承認(rèn)的事實，目前用于轉(zhuǎn)基因豬的多數(shù)潛在性的病原已被清除，但豬內(nèi)源性反轉(zhuǎn)錄病毒（ PERV）由于整合于豬染色體中而不易被消除。目前已成功在山羊、豬和綿羊乳中生產(chǎn)出組織血纖維蛋白溶酶原激活因子和抗凝血因子 (tPA),血凝集因子 Ⅷ 和 Ⅸ 以及蛋白 C。 關(guān)鍵詞：生物多樣性 變異 基因工程 一、引言 迄今為止發(fā)現(xiàn)的最喜溫的微生物是延胡索酸熱球蛋白菌，它們生活在海洋噴 氣孔的巖壁里，那里的溫度高達(dá) 113攝氏度。我們馬上就 會明白，這是一件很好的事，因為我們所生活的世界，似乎并不完全希望我們待在這里。 二、論述生物多樣性的遺傳學(xué)原理 生物多樣性主要表現(xiàn)為三個層次：基因多樣性、物種多樣性和生態(tài)系統(tǒng)多樣 性。 在種群中，變異是不定向的，基因表現(xiàn)為生物的各種相對形狀，在長期的自 然選擇過程中，以 “優(yōu)勝劣汰 ”的方式，使某一基因達(dá)到 “相 24 對統(tǒng)一 ”或 “幾國鼎立 ”的狀態(tài)。而且，具有較高基因多樣性的種群，更能夠在惡劣環(huán)境的考驗下存活下來，并朝著若干不同方向衍化出新的物種。 根據(jù)現(xiàn)代遺傳學(xué)原理，這主要有三種方式： 。它是由于不同 DNA 鏈的斷裂和連接而產(chǎn)生DNA片段的交換和重 新組合，形成新 DNA分子的過程，包括同源重組、位點(diǎn)特異重組、轉(zhuǎn)座作用和異常重組四大類，是生物遺傳變異的 25 一種機(jī)制。它是可遺傳變異的一種。如今年，搭載 “神七 ”上過太空來的大紅袍蘿卜、彎腰青蘿卜、豇豆 3種太空蔬菜種子已投入批量生產(chǎn)。由于三倍體植株在減數(shù)分裂過程中，染色體聯(lián)會會發(fā)生紊亂，無法形成正常的生殖細(xì)胞，即無法產(chǎn)生種子。比如，通過對基因進(jìn)行改造和重新組合，讓禾本科的植物也能夠固定空氣中的氮，讓細(xì)菌 “吐出 ”蠶絲，讓微生物生產(chǎn)出人的胰島素、干擾素等珍貴的藥物。 其次，相比較于多（單）倍體育種，基因工程的育種周期短、遺傳性狀穩(wěn)定（如三倍體西瓜沒有后代，只能進(jìn)行營養(yǎng)繁殖）。大致的操作順序是：使用限制性內(nèi)切酶將帶有目的基因的 DNA鏈切成若干小段。如果獲取 28 了某生 物的基因組，也可以利用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（ PCR技術(shù)）[10]，簡便快速的獲得大量目的基因。 ② 將目的基因?qū)胼d體，形成重組 DNA分子： 利用堿基互補(bǔ)配對原則，運(yùn)用 DNA連接酶將目的基因?qū)胭|(zhì)粒或病毒中。遺傳工程透過分子選殖和轉(zhuǎn)化來直接改變基因的構(gòu)造與特性。它有 3個基本的步驟 :① 從合適材料分離或制備日的基因或 DNA片段。下面簡要介紹基因工程的技術(shù)程序 : 外源目標(biāo)基因的分離、克隆及功能結(jié)構(gòu)分析 30 獲得合乎人類某種需要的目標(biāo)基因是開展一項基因工程的前提和全部工作的核心 ,基因工程的第一步就是獲得目標(biāo)基因。接受外源基因的細(xì)胞稱為受體細(xì)胞。能由原生質(zhì)體再生出植株的植物細(xì)胞還可以用電穿孔導(dǎo)入法及脂質(zhì)體融合法 。鑒別和篩選轉(zhuǎn)基因生物一般在兩個層面上進(jìn)行 :一是檢測目標(biāo)基因是否表達(dá) ,二是檢測目標(biāo)基因是否整合到了宿主的染色體上和能否穩(wěn)定傳代。此外 ,人們還利用病毒的衛(wèi)星 RNA、反義 RNA、運(yùn)動蛋白基因及植物自身的抗病毒基因?qū)χ参镞M(jìn)行轉(zhuǎn)化 ,也取得了一定 32 的成效美 國科學(xué)家還最新發(fā)現(xiàn)了一種可以抗多種病毒的基因 ,將這種新基因?qū)藷煵?、黃瓜、首蓓和花生等作物后 ,植株都表現(xiàn)出不同的抗病能力。目前 ,我國轉(zhuǎn) 基因抗蟲棉經(jīng)過審定的有 11 個品種 ,田間試驗及室 內(nèi)喂飼試驗表明 ,轉(zhuǎn)基因抗蟲棉的抗蟲能力均在 80%以上 ,可減少化學(xué)用藥量 60%一70%。目前 ,已獲得的抗除草劑作物有大豆、棉花、玉米、水稻等 20 多種。澳大利亞科學(xué)家將豆類蛋白基因轉(zhuǎn)人牧草中 ,使奶牛吃了這種牧草后 所產(chǎn)生的牛奶中含有較多的人體必需氨基酸。美國伊諾斯大學(xué)的研究人員研究出一種帶基因的豬 ,這種豬生長快 ,個頭大 ,瘦肉率高 ,飼料利用率高 ,為養(yǎng)豬業(yè)帶來豐厚的經(jīng)濟(jì)利益。因此 ,基因工程藥 35 物也必將成為國際醫(yī)藥工業(yè)發(fā)展的新的增長點(diǎn)?；蛑委熓紫仍诩?xì)胞培養(yǎng)上和動物實驗中實現(xiàn)。對轉(zhuǎn)基因生物的控制措施有物理的方法和生物的方法 :物理的方法就是通過各種嚴(yán)格的管理措施和物理屏障盡量使轉(zhuǎn)基因生物不能從實驗室逃逸進(jìn)入到自然環(huán)境里去 。 ③ 使用的載體是否安全。 總結(jié) 基因工程作為 21 世紀(jì)的關(guān)鍵技術(shù) ,必將為解決世界各國面臨的重大問題發(fā)揮不可替代的作用 ,乃至使整個人類社會發(fā)生變革 ,進(jìn)入 “心想事成 ”的時