《氨基酸紙層析》ppt課件-預(yù)覽頁(yè)
【正文】 層析分離技術(shù)在 20世紀(jì)初就已得到應(yīng)用： ? 1903年用于植物色素的分離 ,各種色素以不同的速率流動(dòng)后形成不同的色帶而被分開(kāi) ， 由此得名為 “ 色譜法 ” ? 1931年用氧化鋁柱分離了胡蘿卜素的兩種同分異構(gòu)體； ? 1944年出現(xiàn)了以濾紙作為支持物的紙層析； ? 20世紀(jì)六十年代末出現(xiàn)了高效液相色譜 (HPLC)。 ? 流動(dòng)相 ：在層析過(guò)程中，推動(dòng)固定相上待分離的物質(zhì)移動(dòng)的液體、氣體等，都稱為流動(dòng)相。 濾紙纖維上羥基具有親水性，因此吸附水作為 固定相 ，通常把有機(jī)溶劑作為 流動(dòng)相 。 溶質(zhì)在 固定相 的濃度 (Cs) 分配系數(shù) α= 溶質(zhì)在 流動(dòng)相 的濃度（ Cl) 2022/5/29 9 溶劑系統(tǒng)： 正丁醇：甲酸：水 =15： 3： 2 固定相 ： 水和濾紙纖維素有較強(qiáng)的親和力 ，因而其擴(kuò)散作用降低形成 固定相 。由于在同一實(shí)驗(yàn)條件下，兩相體 積比是一常數(shù)，所以主要決定于分配系數(shù)。 其次 ， 溶劑系統(tǒng)選擇應(yīng)考慮被分離的物質(zhì)在溶劑系統(tǒng)中的Rf在 ～ 。 層 析必須在恒溫條件下進(jìn)行。 試劑： (1)氨基酸標(biāo)準(zhǔn)溶液：亮氨酸 、 脯氨酸 、 谷氨酸 、 組氨酸標(biāo)準(zhǔn)品 。 四、實(shí)驗(yàn)步驟： 2022/5/29 18 2022/5/29 19 點(diǎn)樣： 用毛細(xì)管點(diǎn)樣 ， 中間點(diǎn)混合氨基酸 ， 兩側(cè)點(diǎn)四種標(biāo)準(zhǔn)氨基酸；每個(gè) ， 每點(diǎn)一次用晾干后再點(diǎn)下次 ， 點(diǎn)樣點(diǎn)的直徑應(yīng)控制在 2mm左點(diǎn)樣點(diǎn)重復(fù)點(diǎn) 5次 右 ， 點(diǎn)樣完畢用大頭針將濾紙做成 筒形 ， 點(diǎn)樣面向外 。 分析混合樣品中未知氨基酸的組分 。被分離物質(zhì)在兩相中都能溶解，但分配比率不同，展層時(shí)就會(huì)形成以不同速度向前移動(dòng)的區(qū)帶。
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