植物細胞工程課件 第一章 實驗室基本技術-預覽頁
【正文】 培 養(yǎng) 基 配 制 大量元素配制成 1020 的母液 微量元素配制成 100200 的母液 激素單獨配制成 mg/ml的母液 培養(yǎng)用培養(yǎng)基按需要按比例加入 動物細胞培養(yǎng)基及配制 ?動物細胞培養(yǎng)的營養(yǎng)需求特點 ?培養(yǎng)基配方及培養(yǎng)基選擇 ?培養(yǎng)基配制 動物細胞培養(yǎng)液的成分及性質(zhì) ? 氨基酸類 （ 1）必需氨基酸 Ile、 Leu、 Lys、 Met、 Phe、 Thr、Cys、 Ser等 （ 2）非必需氨基酸 ? 維生素類 ? 鹽類 ? 葡萄糖 ? 緩沖系統(tǒng) 大多數(shù)平衡液采用磷酸鹽緩沖系統(tǒng)。 ? 生長因子類 如血小板衍生出來的生長因子（ PDGF）、成纖維細胞生長因子（ FGF）、表皮生長因子（ EGF）、內(nèi)皮生長因子及增殖刺激活性因子（ MsA）等。 ? 基礎培養(yǎng)基：一般用人工合成的培養(yǎng)液，常用Ham F12和 DMEM， 1： 1混合，加含 15mmol/L HEPEs的 。 ? 200mmol/LGln ? 抗菌液 青霉素 、 鏈霉素 （ 雙抗 ） 液 卡那霉素液 、 制霉菌素液 ? 肝素抗凝劑 培養(yǎng)基配制 ? BSS配制方法 以 Hanks液為例： 1. 按配方表準確稱量試劑； 2. 將 CaCl2先溶解在 100ml 水中； 3. 其它成分依次溶解在 750ml水中； 4. 用數(shù)滴 %NaHCO3溶解酚紅； 5. 將 2緩慢倒入 3中，攪動； 6. 將 4加入 5中； 7. 將 6移入容量瓶中，補足水混勻； 8. 分裝鹽水瓶中，高壓滅菌， 40C冰箱保存。取血瓶內(nèi)預先放置 30ml生理鹽水，以便于血凝塊和瓶壁的分離。 天然培養(yǎng)基配制方法 ： 將 9－ 11d胚齡的雞胚磨碎和，加等量緩沖液，離心收集上清，即為雞胚浸出液，于－ 200C－－ 700C保存。 光質(zhì) 即是光的波長的影響 。 溫度控制 主要依據(jù)植物物種的起源和生態(tài)類型來決定 。 濕度條件：培養(yǎng)過程對濕度要求并不十分嚴格 ， 因為培養(yǎng)的小環(huán)境中相對濕度常達 110%。 pH在 正常生長 。 動物細胞培養(yǎng)環(huán)境控制 2. pH 動物細胞培養(yǎng)適宜的 pH一般在 ， 低于 ， 嚴重時會導致細胞死亡 。 4. 滲透壓 動物細胞培養(yǎng)滲透壓包括兩個方面的問題： ?一是培養(yǎng)基的滲透壓維持； ?二細胞體內(nèi)的滲透壓維持 。 ※ 用于外植體分離的母體植物材料一般有三種來源： ? 一是生長在自然環(huán)境下的植物； ? 二是有目的地培育在溫室控制環(huán)境條件下生長的植物； ? 三是無菌環(huán)境下已經(jīng)過離體培養(yǎng)的植物
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