植物細(xì)胞工程課件 第一章 實(shí)驗(yàn)室基本技術(shù)(文件)
【正文】 離體培養(yǎng)類(lèi)型： ※ 組織培養(yǎng) ※ 器官培養(yǎng) ※ 細(xì)胞培養(yǎng) ※ 原生質(zhì)體培養(yǎng) 植物材料的培養(yǎng)與外植體選取 外植體滅菌 接種培養(yǎng)及培養(yǎng)條件的控制 植物離體培養(yǎng)基本程序 外植體的來(lái)源 ※ 外植體 （ explant） 是指用于離體培養(yǎng)的活的植物組織 、 器官等材料 。 。 外植體取材 a. 根據(jù)培養(yǎng)需求選擇植物部位 b. 多年生植物注意樹(shù)齡和季節(jié) c. 在不影響培養(yǎng)目的的前提下盡可能選擇自然繁殖器官作外植體 外植體滅菌 外植體 清洗整理 殺菌劑滅菌 無(wú)菌水清洗 不同外植體 在滅菌劑濃度、 時(shí)間、程序上 應(yīng)有所區(qū)別 幾種常用消毒劑的效果比較 消 毒 劑 使用濃度 (%) 消毒時(shí)間 (min.) 效 果 殘液去除難易 次氯酸鈣 /納 10 5～ 30 好 易 新潔爾滅 10～ 20 5～ 30 好 易 氯化汞 ～ 1 2～ 10 最好 最難 過(guò)氧化氫 10～ 12 5～ 15 較好 最易 抗菌素 4～50mgl1 30～ 60 較好 較難 課后思考 ? 請(qǐng)思考細(xì)胞工程實(shí)驗(yàn)技術(shù)與其它生物技術(shù)實(shí)驗(yàn)不同之處。 大多數(shù)動(dòng)物細(xì)胞對(duì)滲透壓的忍耐程度較強(qiáng) ， 只要培養(yǎng)基的滲透壓變化不是很劇烈 ， 一般對(duì)培養(yǎng)物不會(huì)造成致命傷害 。 培養(yǎng)細(xì)胞對(duì) pH的要求因培養(yǎng)時(shí)間長(zhǎng)短有關(guān) ，一般原代細(xì)胞要求較嚴(yán)格 ， 而永久細(xì)胞系對(duì) pH具有較強(qiáng)的忍耐性 。 由于外植體的吸收 ， 引起培養(yǎng)過(guò)程中的 pH變化；高壓滅菌引起 pH 變化 。 周?chē)h(huán)境的相對(duì)濕度低于 60%時(shí) ， 培養(yǎng)基容易干涸 ， 會(huì)改變培養(yǎng)基的滲透壓；相反 ， 若周?chē)h(huán)境濕度過(guò)高時(shí) ， 培養(yǎng)室易滋生各種細(xì)菌和霉菌 。 依植物生活習(xí)性可將其分為喜溫性植物和冷涼性植物兩大類(lèi)型 。 離體培養(yǎng)下一般用白熾熒光燈進(jìn)行光照 ， 光譜成分主要是藍(lán)光 ， 光譜波長(zhǎng)為 419nm。 細(xì)胞培養(yǎng)環(huán)境控制 植物細(xì)胞培養(yǎng)環(huán)境控制 動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)環(huán)境控制 植物細(xì)胞培養(yǎng)環(huán)境控制 光照 溫度 pH 氣體 溫度 光照包括：光周期 、 光量和光質(zhì)三方面 。采血后，血瓶?jī)A斜放置 24h（室溫），待血液充分凝結(jié)后移入 40C冰箱過(guò)夜，讓血清析出。 ：選用生長(zhǎng) 1年左右的健康雄雞，從雞翼血管處抽取血液，在有肝素時(shí)離心（ 3000rpm,10min）。 ? 附加成分： ?培養(yǎng)基質(zhì) （纖維連結(jié)素、多聚物、膠原等。 培養(yǎng)基配方及培養(yǎng)基選擇 ? 平衡液溶液（ BSS） ? 天然培養(yǎng)液 ? 合成培養(yǎng)液 ? 無(wú)血清培養(yǎng)基 ? 其他常用液 Ringer PBS Tyrode Earle Hanks Dulbecco Dhanks
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