【正文】 ode medulla. IgA and IgG in nasal secretion from infected sheep were significantly higher than uninfected one. CD4+ in retropharyngeal lymph nodes and nasal mucosa of infected sheep was the highest. CD8+ as same as CD4+. CD8+ in retropharyngeal lymph nodes were no obvious difference in infected and uninfected sheep. The ratio of CD4+/CD8+ in retropharyngeal lymph nodes and nasal mucosa of infected sheep were higher. Key words: Oestrus ovis。羊鼻蠅蛆病是羊鼻蠅的幼蟲寄生在羊的鼻腔及其附近腔竇中引起 羊 只 不安、呼吸困難、 慢性鼻炎 和額竇炎 癥狀為主的寄生蟲侵襲疾病 [2]。研究表明，患羊增重降低 %～ %，每只羊月均活重?fù)p失 ～ [4]，而胴體肉損失達(dá) ～ ，羊毛損失 200～ 500g，產(chǎn)奶量下降 10%[5]，嚴(yán)重影響羊只生長發(fā)育并給畜牧業(yè)帶來嚴(yán)重經(jīng)濟(jì)損失。 其不同齡期幼蟲間的形態(tài)學(xué)差異多采用 Capelle[8]與 Zumpt[3] 報道的分類鑒定方法。腹面的每個節(jié)片 上 有 3排刺，最后 2節(jié)有不完整的第 4排刺。 有兩個強(qiáng)大的黑色口前鉤，較發(fā)達(dá)，內(nèi)部連接于咽部骨架上。 Guitton[10]和 Dorchies[11] 還對幼蟲進(jìn)行了電鏡掃描觀察，他們發(fā)現(xiàn) Ⅰ 期 幼蟲體表有許多 小 刺，且口鉤 發(fā)達(dá) 強(qiáng)壯； Ⅱ 期 幼蟲刺較少； Ⅲ 期 幼蟲腹側(cè)有 很多 小刺。 2 羊鼻蠅蛆病病理學(xué)及鼻黏膜免疫學(xué)研究 有關(guān)報道稱 羊 狂 蛆 原是一 種 古 北區(qū)的物種，后隨人類 和 宿主動物遷移而被帶往各地 [6]； 現(xiàn)在普遍認(rèn)為羊 狂 蠅 蛆 為全球性 分布，由其幼蟲侵襲引起 羊的 狂 蠅蛆病亦在世界各國養(yǎng)羊區(qū) 廣泛 流行 [20]。羊 狂 蠅蛆病的致死率不高，偶而可由大量的蟲體阻塞呼吸道 致患 羊窒息或繼發(fā)病菌 感染死亡 [22]。 發(fā)育生物學(xué) 在羊 狂 蠅 蛆 各蟲態(tài)發(fā)育 期的研究中對 Ⅲ 期 幼蟲化蛹、羽化及成蟲的壽命研究報道 比 較多，如 Cobbett and Mitchell[24]觀察美國新墨西哥 和 德克薩斯羊 狂 蠅 Ⅲ 期 幼蟲化蛹需 13～ 72h，羽化需 17～ 70 天。 各國對羊 狂 蠅 各 期 幼蟲 寄生所需時間 這一 重要的報道 較 少，美國的 Cobbett[24]和 Mitchell[29]首先于 1933 年剖 檢 僅有 ～ 月齡春羔時發(fā)現(xiàn)， 并 有成熟的 Ⅲ 齡幼蟲寄生，從而斷定幼蟲從 Ⅰ 期 到 Ⅲ 期 僅用 ～ 。 Dorchies[11]等用同樣方法研究認(rèn)為夏季 Ⅰ 期 到 Ⅲ 期幼蟲的發(fā)育時間不到 20 天。這 恰 與南半球相反 [21]。 Breev等 [32]經(jīng)研究認(rèn) 定 ，持續(xù) 34℃ 高溫會促使蛹死亡，但日氣溫在 21～ 30℃ 之間波動的情況下卻不會影響 蛹的 死亡率，蛹的發(fā)育起點溫度為 12℃ ，雄蟲的有 效積溫為 243 日度，雌蟲為 279 日度。成蟲的羽化需要 達(dá)到 一定的溫度，但成蟲的繁殖與存活則在干燥環(huán)境比潮濕環(huán)境更為適宜，而干熱又優(yōu)于干涼氣候 [9]。而津巴布韋等冬季 暖和 的地區(qū)幼蟲 則不滯育 [ 9]。如 Deconinck等 [36] 用 Ⅱ 期 幼蟲做粗抗原，用 酶聯(lián)免疫吸附試驗（ ELISA） 測定 感染 羊抗體水平，發(fā)現(xiàn)陽性率為 88%，與剖檢調(diào)查所得感染率 96%相 接近，從而確定 酶聯(lián)免疫吸附試驗 的有效性。 Marchenko 等 [39]還通過用 ELISA 法 測定了宿主抗羊鼻蠅 蛆 特異性抗體動力學(xué)的方法，發(fā)現(xiàn)抗體水平與幼蟲齡期、寄生數(shù)量，以及宿主的年齡密切相關(guān)。 危害及臨床癥狀 羊鼻蠅蛆成蟲在襲 擊羊群產(chǎn)幼蟲（蛆）時，會造成羊只的恐慌， 騷動不安，互相擁擠。大量鼻液干涸后，在鼻腔及鼻孔周圍形成鼻痂，導(dǎo)致羊只呼吸困難。最后，病羊因食欲廢絕，衰竭而死 亡。羊狂蠅幼蟲侵害人體其他部位較少見，致鼻咽部蠅蛆病更為罕見，我國 1958年來共報道 10余例 [43～ 45]。但如何解決后續(xù)感染并打斷這種寄生蟲的生活史循環(huán)，尚無有效的 措施 。對于本病 醫(yī)治 的越早越好 ,應(yīng)引起臨床上的高度重視。 為防治成 蠅 產(chǎn)幼蟲，也可在羊只鼻腔周圍及鼻部涂 抹 敵敵畏軟膏 [52]。vish[56]研究了對昆蟲致病真菌的生理學(xué)特征。生物鐘表現(xiàn)為晝出型。由于共同黏膜 免疫系統(tǒng)的存在，鼻黏膜免疫可在遠(yuǎn)距離黏膜部位產(chǎn)生免疫反 應(yīng)。鼻黏膜呼吸部和嗅部黏膜固有層中除了 有分支管泡狀的鼻腺（混合 腺），還分布著大量淋巴細(xì)胞，淋巴細(xì)胞在有些部位密集形成淋巴小結(jié) ， 其中含有許多淋巴濾泡和毛細(xì)血管后微靜脈 ((high epithelialvenules， HEV)。這些結(jié)構(gòu)有利于鼻腔對外界的病原微生物進(jìn)行免疫防御以及同機(jī)體其他免疫部位相 互 聯(lián)系。鼻 黏膜 中的各類細(xì)胞執(zhí)行各自特殊功能，其中肥大細(xì)胞和嗜堿性粒細(xì)胞與 I 型變態(tài)反應(yīng)有關(guān) ； 嗜酸性粒細(xì)胞 具有 很強(qiáng)的 趨化性，能吞噬 病 原體復(fù)合物 ，它 的胞質(zhì)內(nèi)充滿嗜酸性顆粒，顆粒內(nèi)有特殊的芳香基 硫酸酶和過氧化物酶，具有對抗 I 型變態(tài)反應(yīng)和抗寄生蟲等作用 ； 巨噬細(xì)胞有吞噬及捕捉、加工、貯存抗原和向淋巴細(xì)胞 遞呈 抗原以引起免疫應(yīng)答的作用 ； 中性粒細(xì)胞 內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文 7 內(nèi)的顆粒含有溶酶體，細(xì)胞在吞噬和處理抗原抗體復(fù)合物和微生物后大量死亡 [62]。 鼻相關(guān)淋巴組織 鼻腔黏膜相關(guān)淋巴組織 (Nose associated lymphoid tissue， NALT)位于人和動物呼吸道和消化道的入口處， 出現(xiàn)在胚胎中 在出生后 迅速 發(fā)育，特別是在接觸抗原后 [63]。 NALT表面覆蓋特異 性 上 皮，由立方型纖毛上皮細(xì)胞、黏膜杯狀細(xì)胞 構(gòu)成。 鼻腔免疫研究進(jìn)展 鼻腔中生理環(huán)境溫和， 是機(jī)體首先接觸大量吸入抗原 (包括病毒、細(xì)胞等 )的部位。在誘導(dǎo)位點，幼稚 B 淋巴細(xì)胞和 T 淋巴細(xì)胞進(jìn)行克隆選擇并與吸入的抗原接觸后增殖。 NALT是鼻黏膜受到外界抗原刺激后誘導(dǎo)產(chǎn)生抗原特異性免疫反應(yīng)的的一個效應(yīng)8 羊鼻蠅蛆病病理學(xué)及鼻黏膜免疫學(xué)研究 位點 [70]。 NALT 是上呼吸道中唯一結(jié)構(gòu)完善的黏膜相關(guān)淋巴組織， NALT固有層中漿細(xì)胞在黏膜免疫系統(tǒng)應(yīng)答中，無論是通過黏膜抗原刺激后形成的 抗體分泌細(xì)胞（ ASC） 數(shù)量還是免疫球蛋白分泌的水平都 明顯高于全身體液免疫應(yīng)答 [73]。 T淋巴細(xì)胞被激活，促使未成熟的 B淋巴細(xì)胞被致敏，隨后， B淋巴細(xì)胞、 Th1或 Th2型細(xì)胞及 CD8+ T細(xì)胞離開鼻咽腔上的淋巴結(jié)，流經(jīng)淋巴管進(jìn)入體循環(huán)，最后大部分淋巴細(xì)胞歸巢至 鼻黏膜 固有層和其它黏膜效應(yīng)部位，不僅在上呼吸道有明顯的免疫反應(yīng)，在下呼吸道、胃腸道、泌尿生殖道等黏膜部位產(chǎn)生廣泛的黏膜免疫反應(yīng) [70]。 黏膜免疫系統(tǒng)的一個重要特點就是產(chǎn)生分泌性 lgA（ slgA）， slgA產(chǎn)量明顯高于其他免疫系統(tǒng)。分泌這些因子的細(xì)胞主要分布在整個固有層，與 IgA ASC 有著密切的空間關(guān)系。 slgA具有以下功能 :第一，免疫排除功能。第四，阻止某些細(xì)菌對生長因子的作用 [7 82]。研究還發(fā)現(xiàn)， IgG ASC 在 NALT 中數(shù)量較少，但在頸部引流淋巴結(jié)中數(shù)量較多，說明當(dāng)被激活的 IgG 轉(zhuǎn)換的 B 淋巴細(xì)胞經(jīng)過這些淋巴結(jié)時， IgG 系統(tǒng)免疫應(yīng)答才能被提高。 本課題研究的目的和意義 目前，羊鼻蠅蛆病在寄生蟲學(xué)方面研究比較多，而在蟲體寄生部位及相關(guān)組織的病理學(xué)方面的 研究較少。 2 實驗研究 實驗一 山西黃土高原地區(qū)羊鼻蠅蛆病流行病學(xué)調(diào)查及病理組織學(xué)觀察 材料 實驗動物 山西黃土高原地區(qū)的綿羊為實驗動物， 分 春 季和 秋 季 進(jìn)行流行病學(xué)調(diào)查 ，并對不同年齡、不同性別共計 307 例綿羊進(jìn)行羊頭剖檢，主要檢查羊鼻蠅蛆病的各齡幼蟲感染情況及病理變化等。在 15lbf/in2(1034179。 伊紅 95%酒精 100ml 將伊紅加入酒精，使充分溶解，此液為飽和伊紅溶液，最好提前配制，以使伊紅充分溶解，增強(qiáng)染色力。將所取材料按感染蟲體和未感染蟲體分開放入盛有中性福爾馬林溶液中固定 24小時 ，以待制片。 透明 組織脫水后，通過透明劑的作用而脫去酒精使組織透明，并使石蠟易滲入12 羊鼻蠅蛆病病理學(xué)及鼻黏膜免疫學(xué)研究 組織的過程。 包埋 器具用平皿，先用甘油將平皿涂抹內(nèi)壁，再倒入包埋蠟，其熔點同蠟Ⅱ，用 鑷子夾取組織塊放入平皿內(nèi)擺好，再用載玻片分割開，然后放入冷水中，待冷固后取出，切成立方形小塊，周圍留大約 2mm蠟邊，用火烤熱木塊底部再粘在木塊上，以待切片。其中鼻黏膜、咽后淋巴結(jié)組織塊至少三張切片，一張備免疫組化染色，另一張備免疫組化陰性對照染色，第三張備 。 依次入 蘇木素染液 ，12min→ 蒸餾水洗 ， 5min→ 鹽酸酒精分化 ， 3s→ 自來水洗 ， 20min，此時切片逐漸呈鮮艷藍(lán)色，這一步起反藍(lán)作用，細(xì)胞核更清晰。蘇木素 伊紅染色結(jié)果，細(xì)胞核呈藍(lán)色，細(xì)胞漿呈粉紅色，紅細(xì)胞橙紅色，軟骨組織深藍(lán)色。 將制作好的病理切片在顯微鏡下進(jìn)行觀察，按照低倍鏡到高倍鏡的順序。 數(shù)據(jù)處理 實驗結(jié)果采用 X 177?；佳蛄鞒龃罅勘且?，后期變?yōu)?黏 液 性和膿性，甚至血性鼻液；干涸鼻液在鼻周圍形成結(jié)痂，造成鼻塞，引起呼吸困難。 14 羊鼻蠅蛆病病理學(xué)及鼻黏膜免疫學(xué)研究 羊鼻蠅蛆的感染情況 由表 2 可 見 ，剖檢的 307 只綿羊中寄生有羊鼻蠅蛆幼蟲的共 104 只，平均感染率為 34%；其中流鼻液癥狀綿羊的感染率 顯著 高于無流鼻液癥狀綿羊。 由表 4 可 見 ，剖檢的 307 只綿羊中鼻蠅蛆感染率秋季比春季高，成年羊比幼齡羊高，其中秋季的幼齡羊比春季的高，春季和秋季的成羊感染率差異不顯著，春季的成羊比幼羊感染率高，秋季的成羊和幼齡感染率差異不顯著。 * 幼齡羊 成齡羊 調(diào)查數(shù) 149 158 感染數(shù) 30 74 感染率（ %）(X 177。 由表 5 可 見 ，剖檢的 307 只綿羊中鼻蠅蛆感染率母羊和公羊差異不顯著，其中幼齡公羊和幼齡母羊感染率差異不顯著，而成年母羊比成年公羊感染率高，成年公羊比幼齡公羊感染率高，成年母羊比幼 齡母羊感染率高。 b* 77 16 177。 b 159 61 177。鼻腔黏膜面呈 灰 紅色，附著較多黏液（圖 4） ；部分 患羊鼻腔內(nèi)發(fā)現(xiàn)羊鼻蠅蛆的 Ⅲ 期幼蟲。有的患羊鼻腔內(nèi)發(fā)現(xiàn)羊鼻蠅蛆的 Ⅱ、Ⅲ 期幼蟲 混合感染 。 年齡 春季 秋季 調(diào)查數(shù) 感染數(shù) 感染率（ %） (X 177。 * b 成年羊 81 34 177。 * 16 羊鼻蠅蛆病病理學(xué)及鼻黏膜免疫學(xué)研究 鏡檢病變 鼻黏膜：由于鼻蠅蛆寄生的數(shù)量不同，鼻黏膜的病變程度不同，病變可分為重度、中度和輕度。管腔內(nèi)有紫紅色的絮片或團(tuán)塊狀分泌物（圖 7）。毛細(xì)血管內(nèi)有較多 的中性粒細(xì)胞。 圖 4 鼻腔內(nèi)的 Ⅱ 期幼蟲 Fig4 Oestrus ovis L2 in nasal cavity Ⅱ期幼蟲附著于鼻 黏膜 上，鼻 黏 膜呈現(xiàn)灰紅色。黏膜的血管擴(kuò)張，管中充滿中性粒細(xì)胞。有些區(qū)域肺泡間隔增寬，間隙中有炎性細(xì)胞的滲出與增生。 咽后淋巴結(jié)：咽后淋巴結(jié)的皮質(zhì)部分，局灶性出血，淋巴小結(jié)的生發(fā)中心增大，出現(xiàn)分裂像小結(jié)邊緣有較多中性粒細(xì)胞的浸潤。 圖 7 重度鼻黏膜病變（ HE 100） Fig7 The histopathological change of nasal mucosa of Severe lesions 黏膜上皮細(xì)胞脫落、崩解，固有層見 大量淋巴細(xì)胞、單核細(xì)胞滲出和增生。臨床癥狀表現(xiàn)可因幼蟲在鼻腔及鼻竇內(nèi)的發(fā)育期不同而持續(xù)數(shù)月。又據(jù)崔貴文 [87]報道，甘肅省感染率達(dá) %。羊鼻蠅蛆感染特點：流鼻液癥狀綿羊比不流鼻液綿羊感染率高，其原因主要是 羊體內(nèi)狂蠅幼蟲由Ⅰ、Ⅱ期逐漸向Ⅲ期蛻變，同時由鼻腔表淺部向頜竇、角竇、篩骨葉管處等深部通道逆行， 蟲體機(jī)械性的 刺激引起嚴(yán)重的出血性、化膿性炎癥， 發(fā)炎初期，流出大量清鼻 液 ， 隨 后由于 病情惡化繼發(fā) 細(xì)菌感染，變成 膿性 鼻 液、 血 性鼻 液 ；感 染率秋季比春季高 ，幼齡羊感染率秋季比春季高。 剖解發(fā)現(xiàn)春季感染羊鼻腔或鼻竇內(nèi)多為 Ⅱ 期 或（ 和 ）Ⅲ 期幼蟲，而秋季的感染羊鼻腔內(nèi)基本上全為 Ⅰ 期幼蟲