【正文】 樹突狀細(xì)胞 DMSO（ dimethyl sulfoxide） 二甲基亞砜 FCA（ Flow cytometric analysis） 流式細(xì)胞儀 GALT（ gutassociated lymphoid tissue） 腸 黏膜 相關(guān)淋巴組織 ELISA（ enzyme linking immunosorbent assay） 酶聯(lián)免疫吸附試驗 HEV（ high epithelialvenules） 后微靜脈 IgA（ immunoglobulin A） 免疫球蛋白 A IgG（ immunoglobulin G） 免疫球蛋白 G IFN（ interferon） 干擾素 IL（ intierleukin） 白細(xì)胞介素 M c（ melnbranous cell） 微皺細(xì)胞 MALT（ mucosalassociated lymphoid tissue） 黏膜相關(guān)淋巴組織 NALT （ Nose associated lymphoid tissue） 鼻腔黏膜相關(guān)淋巴組織 slgA（ secretory lgA） 分泌性 lgA TNF（ tumor necrosis factor） 腫瘤壞死因子 內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文 1 1 引言 羊鼻蠅蛆概述 羊鼻蠅 (Oestrus ovis Linnaeus,1761)亦稱羊狂蠅，屬雙翅目 (Diptera)，狂蠅科 (Oestridae)，狂蠅屬 (Oestrus)[1]。羊鼻蠅蛆病是羊鼻蠅的幼蟲寄生在羊的鼻腔及其附近腔竇中引起 羊 只 不安、呼吸困難、 慢性鼻炎 和額竇炎 癥狀為主的寄生蟲侵襲疾病 [2]。羊狂蠅宿主呈 世界各地養(yǎng)羊區(qū)廣泛分布 ，感染率高，成蠅飛行距離長 [3]。該 病主要危害綿羊，山羊受害較輕 ，在歐洲有寄生于駱駝和人的報道。羊 狂 蠅蛆病在我國西北、內(nèi)蒙古、東北地區(qū) 感染較為嚴(yán)重，流行嚴(yán)重地區(qū)感染率可高達(dá) 80% [1]。研究表明，患羊增重降低 %～ %，每只羊月均活重?fù)p失 ～ [4]，而胴體肉損失達(dá) ～ ，羊毛損失 200～ 500g，產(chǎn)奶量下降 10%[5]，嚴(yán)重影響羊只生長發(fā)育并給畜牧業(yè)帶來嚴(yán)重經(jīng)濟(jì)損失。 病原體及 形態(tài)學(xué) 羊 狂 蠅成蟲的形態(tài)學(xué)特征的 描述開始 由 Linne在分類時即進(jìn)行了 論述 ， 將 成蟲翅脈的特征 用來 種的鑒定 [6]。 成蟲體長 10～ 12毫米，淡灰色，略帶金屬光澤體態(tài)似蜜蜂，頭大呈黃色，口器已退化 [1]，全身密生絨 毛，胸部結(jié)節(jié)上長有細(xì)長毛，腹部長有銀白色閃光點。產(chǎn)完幼蟲（蛆）后，雌蠅立即死亡；雄蠅與雌蠅交配后，雄蠅立即死亡 [7]。 其不同齡期幼蟲間的形態(tài)學(xué)差異多采用 Capelle[8]與 Zumpt[3] 報道的分類鑒定方法。即 Ⅰ 期 幼 為淺黃白色 ， 體 長約 1mm， 前方有兩個黑色強(qiáng)大的口鉤向后彎曲，口鉤高度角質(zhì)化 。 尾部末端突起上有 10個或 11個小刺 。 背部第 3節(jié)片 上 有 3排刺，其余節(jié)片 上 有 2排完整的刺和位于中間部分的 8～ 12個刺。腹面的每個節(jié)片 上 有 3排刺，最后 2節(jié)有不完整的第 4排刺。 Ⅱ 期 幼齡蟲 體 長 9～ 20mm。 體表的刺不明顯 。 Ⅲ 期 幼蟲體形似圓柱形， 前端尖， 強(qiáng)壯而彎曲， 體 長 25～ 30mm。 有兩個強(qiáng)大的黑色口前鉤，較發(fā)達(dá)，內(nèi)部連接于咽部骨架上。 蟲體背面無刺，成熟后各節(jié)上具有 顏色深淺不一的 帶斑 (隨成熟程度不同顏色深淺不同 )。 腹面各節(jié)前端具有小刺約 11列 。 蟲體后端平齊，凹處有兩個“ D”型氣門板，中央有鈕孔 ， 兩后氣門板明顯黑色且?guī)缀跸嘟?，封閉著氣門鈕 [8～ 9]。 Guitton[10]和 Dorchies[11] 還對幼蟲進(jìn)行了電鏡掃描觀察，他們發(fā)現(xiàn) Ⅰ 期 幼蟲體表有許多 小 刺，且口鉤 發(fā)達(dá) 強(qiáng)壯； Ⅱ 期 幼蟲刺較少； Ⅲ 期 幼蟲腹側(cè)有 很多 小刺。 流行病學(xué) 自 上個 世紀(jì) 30 年代以來，人們開始研究羊 狂 蠅蛆流行病學(xué)。目前，對 羊 狂 蠅蛆 的流行動態(tài)已完成野外調(diào)查的國家有法國 [12]、美國 [13]、烏克蘭 [14]、津巴布韋 [2]、南非 [15]、印度 [16] 等。我國新疆石河子 [17]、寧夏固原 [18]和四川阿壩地區(qū) [19]做過一個完整年度的調(diào)查。 2 羊鼻蠅蛆病病理學(xué)及鼻黏膜免疫學(xué)研究 有關(guān)報道稱 羊 狂 蛆 原是一 種 古 北區(qū)的物種，后隨人類 和 宿主動物遷移而被帶往各地 [6]； 現(xiàn)在普遍認(rèn)為羊 狂 蠅 蛆 為全球性 分布，由其幼蟲侵襲引起 羊的 狂 蠅蛆病亦在世界各國養(yǎng)羊區(qū) 廣泛 流行 [20]。如美國西南部羊 狂 蠅 蛆 感染率為 %，平均感染強(qiáng)度 [13]；法國西南部 感染率為 %，強(qiáng)度 為 [11]； 烏克蘭 感染率為 58%～ 90%，強(qiáng)度 為 14[14]； 非洲各養(yǎng)羊 區(qū) 普遍流行；南非 感染率 %[21]。由于羊 狂蠅 的感染率隨 地區(qū)差異而變化 較大，故 只有 調(diào)查 地區(qū) 相對一致才 具 有可比性。就同一地區(qū)而言 ，綿羊的感染率高于山羊 [8]，夏秋季高于冬春季， 幼齡羊高于成年羊 [17]。羊 狂 蠅蛆病的致死率不高，偶而可由大量的蟲體阻塞呼吸道 致患 羊窒息或繼發(fā)病菌 感染死亡 [22]。其發(fā)病情況通常在夏秋季成蟲大批出 現(xiàn) 時以表現(xiàn)卡他性鼻炎為主要癥狀，采 食羊只為躲避成蟲侵襲常將鼻孔緊帖 于 地面，或?qū)㈩^藏于其他羊只兩后肢中間；冬季無明顯癥狀，春季則多 搖頭、 打噴嚏 [16]。 羊 鼻蠅 的宿主特異性較強(qiáng)，通常寄生于羊科動物 [6]，主要是綿羊 。但達(dá)胡巴雅爾等 [23]報道還可寄生于 駱駝和 馴鹿， 楊曉野等人研究表明馴鹿狂蠅蛆與羊狂蠅蛆 不是 一個 種 [22]。 發(fā)育生物學(xué) 在羊 狂 蠅 蛆 各蟲態(tài)發(fā)育 期的研究中對 Ⅲ 期 幼蟲化蛹、羽化及成蟲的壽命研究報道 比 較多，如 Cobbett and Mitchell[24]觀察美國新墨西哥 和 德克薩斯羊 狂 蠅 Ⅲ 期 幼蟲化蛹需 13～ 72h，羽化需 17～ 70 天。印度的 Jagannath[25]經(jīng)實驗 研究 認(rèn)為化蛹需13～ 24h，羽化期 17～ 37 天，成蟲的壽命 為 3～ 25 天 [26]。 Fallis[27]發(fā)現(xiàn)在加拿大成蟲的存活期為 10～ 28天，大多 數(shù)在 16天。我國汪世鐘 [28]，鄭經(jīng)鴻等 [20]， 張永森等 [17]報道成蟲存活期為 10天左右。 各國對羊 狂 蠅 各 期 幼蟲 寄生所需時間 這一 重要的報道 較 少，美國的 Cobbett[24]和 Mitchell[29]首先于 1933 年剖 檢 僅有 ～ 月齡春羔時發(fā)現(xiàn)， 并 有成熟的 Ⅲ 齡幼蟲寄生，從而斷定幼蟲從 Ⅰ 期 到 Ⅲ 期 僅用 ～ 。隨后他們 捕獲 到雌蠅，擠出其腹部的 Ⅰ 期 幼蟲，然后 人工感染羔羊，隔期剖殺 檢查 ，結(jié)果發(fā)現(xiàn)， Ⅰ期 幼蟲發(fā)育為成熟的 Ⅲ 期 幼蟲，在夏季僅需 25～ 35天的時間，而在寒冷的季節(jié)里，幼蟲則 以 Ⅰ 期 幼蟲的蟲態(tài)滯育達(dá) 9 個月之久。因此，兩位學(xué)者 據(jù)羊 狂 蠅在夏季化蛹羽化僅需 17～ 70 天，成蟲壽命平均 約 16 天的結(jié)論推斷：溫暖季節(jié)里羊 狂 蠅 蛆 整個生活周期約需 ～ 個月的時間。加拿大學(xué)者 Fallis[27]同樣用剖 檢 春羔的方法發(fā)現(xiàn)，羊 狂 蠅幼蟲在初夏的寄生期僅需 30 天，這一點證實了 Cobbett[24]和Mitchell[29]1933 年的工作結(jié)論。 Dorchies[11]等用同樣方法研究認(rèn)為夏季 Ⅰ 期 到 Ⅲ 期幼蟲的發(fā)育時間不到 20 天。 因此，本蟲在北方 寒冷地區(qū) 每年僅繁殖一代，而在溫暖地區(qū)則可每年兩代。 根據(jù)前人對 羊狂蠅 幼蟲寄生 期的研究，對世界各地區(qū)羊 狂 蠅的年發(fā)生世代 歸結(jié) 如下： 內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文 3 表 1 世界各地區(qū)羊狂蠅年發(fā)生世代時間表 [30] Table1. The sequence of generation Oestrus ovis files occuring in the world 由表 1可見， 很多 學(xué)者認(rèn)為北半球是一個統(tǒng)一模式 [ 31]。即成 蠅 于 6月份羽化，交配產(chǎn)幼蟲，幼蟲迅速生長發(fā)育且于當(dāng)年 8月 份 成熟為 Ⅲ 期 幼蟲并離開宿主，這些幼蟲化蛹、羽化出秋季世代的成蟲，并于當(dāng)年 10 月 份 間產(chǎn)生幼蟲，這些幼蟲可以長期以 Ⅰ 期 幼蟲的形式 在羊鼻腔或鼻竇內(nèi) 寄生 ，直到 翌 年 3 月 份 發(fā)育為成熟的Ⅲ 期 幼蟲，這些成熟幼蟲離開宿主、化蛹并 在外界 保持靜息狀態(tài)，直到 6 月 份 羽化為成蟲。這 恰 與南半球相反 [21]。 由于蛹和成蟲是羊 狂 蠅整個生活史 過程 中生存于外界的蟲態(tài)，因而受外界環(huán)境因素影響較大。因此有關(guān) 于 羊 狂 蠅這兩個階段的發(fā)育生態(tài)學(xué)研究報道較多。蛹的發(fā)育上限溫度與發(fā)育起點溫度是預(yù)測一個地區(qū)羊 狂 蠅發(fā)生情況的兩個重要生物學(xué)參數(shù)。 Breev等 [32]經(jīng)研究認(rèn) 定 ，持續(xù) 34℃ 高溫會促使蛹死亡，但日氣溫在 21～ 30℃ 之間波動的情況下卻不會影響 蛹的 死亡率，蛹的發(fā)育起點溫度為 12℃ ，雄蟲的有 效積溫為 243 日度，雌蟲為 279 日度。 Knapp[33]和 Rogers[31]則認(rèn)為 32℃ 以上時蛹不能 存活 。 羊 狂 蠅 的 蛹期會隨 周圍 環(huán)境溫度的升高而縮短 [2 3 33]。 Bukshtynov[34]發(fā)現(xiàn)最高溫度下 僅 用 14天成蟲即可羽化。成蟲的羽化需要 達(dá)到 一定的溫度，但成蟲的繁殖與存活則在干燥環(huán)境比潮濕環(huán)境更為適宜，而干熱又優(yōu)于干涼氣候 [9]。因此，一年中分為雨季與旱季的國家和地區(qū)，旱季往往是羊 狂 蠅成蟲出現(xiàn)的季節(jié) [2]。 寄生在羊 鼻腔 內(nèi)的幼蟲的發(fā)育速率并不是 一致 的，它表現(xiàn)為時慢時快 [ 9]。 I 期幼蟲 在涼爽的氣候下呈滯育狀態(tài)在鼻 腔 內(nèi)越冬 [2 2 33]。而津巴布韋等冬季 暖和 的地區(qū)幼蟲 則不滯育 [ 9]。對冬季幼蟲滯育的解釋， Rogers]等 [35]人認(rèn)為， 12℃ 的氣溫不會 影響鼻腔內(nèi)的溫度而使 羊鼻蠅 幼蟲滯育，以 I 期 幼蟲為越冬蟲態(tài)的現(xiàn)象可能是由于溫度或 (和 )光周期對蛹期的幼稚成蟲或羽化出的成蟲的影響，誘使這些成蟲產(chǎn)生能夠停止或延遲發(fā)育的幼蟲。在許多溫暖地區(qū)，如印度 [16]、津巴布韋 [9] 以及非洲的地區(qū) 成蟲出現(xiàn)時間 第 1代 第 2代 第 3代 印度 6月～ 7月 9月 11月 津巴布韋 5月底～ 6月 8月～ 9月 10月中旬～ 11月初 法國 (西南部 ) 3月～ 4月 6月～ 7月 9月～ 10月 平原區(qū) 5月底 8月～ 9月 林區(qū) 7月初 9月 北半球模式 6月 9月～ 10月 4 羊鼻蠅蛆病病理學(xué)及鼻黏膜免疫學(xué)研究 一些國家 [2]和法國西南部 [12]冬季氣候溫暖，幼蟲 不發(fā)生滯育，說明滯育現(xiàn)象與季節(jié)溫度有關(guān)。 免疫學(xué)診斷 隨著免疫學(xué)技術(shù)的 飛速 發(fā)展，人們也開展了一些羊 狂 蠅蛆病免疫學(xué)方面的 研究工作，但多偏重于診斷。如 Deconinck等 [36] 用 Ⅱ 期 幼蟲做粗抗原，用 酶聯(lián)免疫吸附試驗（ ELISA） 測定 感染 羊抗體水平，發(fā)現(xiàn)陽性率為 88%，與剖檢調(diào)查所得感染率 96%相 接近，從而確定 酶聯(lián)免疫吸附試驗 的有效性。 Duranton等 [37]通過比較 得出 斑點酶聯(lián) (DotELISA)快速診斷羊 狂 蠅蛆病的效果 沒有酶聯(lián)免疫吸附試驗準(zhǔn)確率高 。 在抗原的免疫原性的