《dna復(fù)制》ppt課件 (2)-預(yù)覽頁
【正文】 的定義 不同生物復(fù)制子的數(shù)目 復(fù)制眼概念 復(fù)制叉概念及其移動方向的實驗確定 復(fù)制的模式 起點、方向和速度 復(fù)制子的定義 DNA中發(fā)生一次復(fù)制的單位稱為復(fù)制子 (replicon) 。 ? 質(zhì)粒一般 是一個自主環(huán)狀的 DNA基因組，構(gòu)成一個獨立復(fù)制子； ? 原核生物 基因組中一般只含一個復(fù)制子，在唯一的起始點啟動就會引起整個基因組復(fù)制； ? 真核生物 基因組含多個復(fù)制子（一般40100kb/個）。 單向復(fù)制： 在復(fù)制眼的一端，一種類型的標(biāo)記后緊跟著另一種標(biāo)記； 雙向復(fù)制： 在復(fù)制眼的兩端產(chǎn)生一種（對稱的）模式。 如 λ 噬菌體：滾環(huán)產(chǎn)生多聚復(fù)制子）； (2） 某種蛋白質(zhì)可能會介入，在真正的末端上啟動 。草履蟲（ Paramecium） 的線性線粒體 DNA的復(fù)制中就形成了一種交聯(lián)； (4） 末端是可變的，而不是精確確定的。 （ 2） 利用 DNA聚合酶 I 進(jìn)行缺口平移法制備探針的基本原理 DNA聚合酶 I 與缺口平移法制備探針 Nick translation replaces part of a preexisting strand of duplex DNA with newly synthesized material. DNase Ⅰ 真核生物 DNA聚合酶的種類及其功能 真核生物由不同 DNA聚合酶 分別負(fù)責(zé)起始和延伸 三種細(xì)胞核 DNA復(fù)制酶具有不同的功能 : ? DNA polymerase α 起始新鏈合成 ? DNA polymerase δ 延伸先導(dǎo)鏈 ? DNA polymerase ε 可能與后隨鏈合成有關(guān)，也可能具有其他功能 DNA聚合酶所具有的共同結(jié)構(gòu) ? 許多 DNA聚合酶有一個由三個結(jié)構(gòu)域組成的大裂隙，類似于手形。每次改變一個連環(huán)數(shù)。 使正超螺旋轉(zhuǎn)化為負(fù)超螺旋，每次改變兩個連接數(shù)。 Three proteins unwind φX174 DNA 3`OH引發(fā)末端的產(chǎn)生 多種方法可以產(chǎn)生 3`OH末端 1) 3) 2) 起始需要解旋酶、單鏈結(jié)合蛋白和引發(fā)酶 復(fù)制復(fù)合體的形成 DNA合成鏈的延伸 半保留復(fù)制合成兩條新的 DNA鏈 DNA的合成是半不連續(xù)的 連接酶將岡崎片段連接在一起 前導(dǎo)鏈和后隨鏈的協(xié)調(diào)合成 DNA復(fù)制忠實性的控制 (1) 半保留復(fù)制的概念 DNA在復(fù)制時，兩條鏈解開分別作為模板，在 DNA聚合酶的催化下按堿基互補(bǔ)的原則合成兩條與模板鏈互補(bǔ)的新鏈，以組成新的 DNA分子。 stahl用同位素（ 15N） 示蹤標(biāo)記加密度梯度離心技術(shù) 實驗 ,該實驗跟蹤了生長了三代的大腸桿菌， 證明了DNA是采取半保留的方式進(jìn)行復(fù)制 。 替換（ substitution): 指摻入錯誤核苷酸（不正確配對） ?Note: DNA聚合酶通常具有 3`5`核酸外切酶活性，可以切除錯配堿基；通過校正機(jī)制，復(fù)制忠實性還可提高 100倍。 DNA合成包括：起始、延伸和終止三個階段 ? 起始 (initiation)：涉及一種蛋白質(zhì)復(fù)合物，它識別復(fù)制起始點 (origin)。
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