【正文】 2 ? ELISA試驗(yàn)是一種敏感性高，特異性強(qiáng)，重復(fù)性好的實(shí)驗(yàn)診斷方法。 3 一、 ELISA試劑盒測定技術(shù)的發(fā)展 ? 臨床測定技術(shù)的發(fā)展主要在于方法學(xué)的發(fā)展，而方法學(xué)的發(fā)展依托于試劑生產(chǎn)技術(shù)不斷進(jìn)步更新和型標(biāo)記物的應(yīng)用。 近年來，隨著分子生物學(xué)的發(fā)展，使用基因工程方法制備各種特殊的抗原或抗體及其酶結(jié)合物等免疫測定試劑幾成為現(xiàn)實(shí)的新一代試劑，各種新型使用的測定方法也不斷出現(xiàn)。 ? 提高檢測的特異性（ %） ? 提高檢測的靈敏度，應(yīng)用 Parl Ehrich 學(xué)說（ PEI）HBsAg標(biāo)準(zhǔn)品，對(duì) ad標(biāo)準(zhǔn)品的靈敏度為 /ml對(duì) ay標(biāo)準(zhǔn)品靈敏度為 例如： 6 基 因 工 程 ? 較早用于免疫測定的基因工程抗原是HBcAg和 HBsAg,這兩種基因工程抗原的出現(xiàn)，較好地解決了抗 HBc和 HBe的測定問題。用酵母從病毒基因組非結(jié)合區(qū)得到表達(dá)，表達(dá)為融合蛋白，亦作為包被固相載體。 ? C100的抗原性較弱，在 HCV復(fù)制中，不能充分暴露宿主的免疫系統(tǒng)。有利早期診斷。改進(jìn)了反映的靈敏度。 ? 抗原組合：以 Core和 NS3作為主要檢測片斷（比例十分重要）加合成多肽 NS4 ? 特點(diǎn)：直接測 Core抗原 不易發(fā)生變異 抗 IgM 和 IgG檢出率可達(dá) 100% 特異性達(dá) %靈敏度為 100% 12 基因工程抗體及其功能試劑 ? 80年代后人們開始使用基因工程技術(shù)制備抗體，并進(jìn)而 將抗體分子片斷與其它蛋白（或另一種抗體分子）融合得到多功能試劑 ，到目前為止，基因工程抗體在免疫測定上的應(yīng)用尚處于一個(gè)初級(jí)階段。 ? 近來為提高檢測血清中 P24抗原的敏感性，將血清中免疫復(fù)合物（ ICD)解離后再進(jìn)行測定。 HIV M群的抗體，絕大多數(shù) HIV2群的抗體。 ? 從以上抗原設(shè)計(jì)保證 HIV的來自不同亞型 /或區(qū)域的抗原亞型抗體的檢測。 17 HIV 確認(rèn)試劑 —免疫印記 （ WB或 RIBA）試劑 ? 判斷標(biāo)準(zhǔn) ? 我國 HIV 抗體陽性：至少二條膜帶（即gp160/gp120）或至少一條膜帶和 p24(核心 )帶同時(shí)出現(xiàn) ? 美國 HIV1陽性（任何兩個(gè)中有二條帶（ P24 gp41 gp120/gp160） , HIV2無陽性 ? WHO : HIV 1 陽性（不管有無核心帶或酶帶， 但有兩條膜帶） HIV2陽性（不管有無核心帶或酶帶，單有兩條膜帶即為陽性） 18 基因工程酶及其融合蛋白 ? 除了基因工程抗原、抗體外，與標(biāo)記免疫測定有關(guān)的另一中重要的基因工程試劑就是酶及其融合蛋白，以重組酶建立免疫測定方法較為成功的是CEDIATM均相酶免疫試驗(yàn)。 ? 2）、表達(dá)的抗原將盡可能少含有非特異性抗原 或共同抗原。固相捕獲法測 IgM抗體等，這里只簡述雙抗夾心法測抗原。AgAgAg+Ab*→ Ab因此出現(xiàn)△ Al(可能是假陽性 )，△ A2(可能是假陰性 )。凡灰區(qū)范圍內(nèi)的結(jié)果可報(bào)告可疑或重復(fù)檢測。酶結(jié)合物反應(yīng)充分，特異性強(qiáng)，不僅抗 HIV 2型陽性標(biāo)本 OD值比一步法高而且本地清晰。沒有健全的 實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量管理、質(zhì)量體系，一切均在非控制之中，只靠一份質(zhì)控血清，分析這份血清的質(zhì)控結(jié)果是達(dá)不到質(zhì)量保證的預(yù)期結(jié)果的，也不可能做好室內(nèi)質(zhì)控，作好質(zhì)控圖。重點(diǎn)抓住低值弱陽性 臨界值血清的室內(nèi)質(zhì)控檢測，是室內(nèi)質(zhì)控精密度觀測的最敏感的窗口，也是揭示試驗(yàn)成功與否的重要標(biāo)志。 CO 值 當(dāng) S/CO ≥ 1時(shí)，判為陽性； S/CO 1 時(shí)判為陰性。 當(dāng) S ≤ CO 值時(shí)，判為陽性； S CO值時(shí)，判為陰性 ? （ 2）樣品結(jié)果新表示法： S/CO 值 當(dāng) S/CO ≤ 1時(shí)，判為陽性； ， S/CO 1 時(shí)，判為陰性。 ? 舉例說明 HBsAgELISA法檢測時(shí) OCV的測定。這組數(shù)據(jù)舉例見表 46 次數(shù) 質(zhì)控血清 1 陰性對(duì)照品 Cutoff值 S/CO值 A值 A值 陰性 A值 1 2 181 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 47 ? 通過表 ，計(jì)算 20各質(zhì)控血清的 s/co值的均值（ X），標(biāo)準(zhǔn)差（ s）和變異系數(shù)（ cv）： ? X= s= cv=% ? 從而獲得該實(shí)驗(yàn)室 OCV測定數(shù)據(jù)。若太大應(yīng)該查找原因，使其向 ocv 的 s值靠近。 53 常規(guī)條件下未知值質(zhì)控血清變異的測定 ? 有時(shí)為了避免主觀性，再做 RCVU測定。 62 示例： 20次質(zhì)控血清 S/CO值 次數(shù) s/co值 次數(shù) s/co值 1 12 2 13 3 14 4 15 5 16 6 17 7 18 8 19 9 20 10 21 11 63 ? 在第三次測定后，按 “ 即刻法 ” 計(jì)算： n=3,三次 s/co值從大到小排列為： 求出 x=,s= 計(jì)算： SI下限 == SI上限 == 查 SI值表： n=3時(shí)， n2=,n3=。 66 ? 在第六次測定后，按上 5計(jì)算： n=5 測得 S /CO 值為 求出 x=,s= 計(jì)算： SI下限 == SI上限 == 查 SI值表： n2=,n3=。 ? 從該數(shù)據(jù)反映該室批內(nèi)變異 S內(nèi) （ ）大于批間變異 S間 （ ）。 75 ? 利用表 X間 和 S間 做室內(nèi)批間變異控框架圖，并將第 21次以后的 x值依次描記上。線段越長，反映精密度越差；線段長的越多，反映這一階段精密度總體情況不好。具體做法，在此 77 圖 某實(shí)驗(yàn)室批間變異質(zhì)控圖 78 8 室內(nèi)質(zhì)控圖的建立及判斷 ? 美國 1924年首先提出質(zhì)量控制圖的統(tǒng)計(jì)質(zhì)控方法，自從 Shewhart質(zhì)控圖在工業(yè)企業(yè)中運(yùn)用以來，用數(shù)理統(tǒng)計(jì)的方法監(jiān)測產(chǎn)品質(zhì)量的不合格成為可行。 2s為警告限，以 x177。若當(dāng)天質(zhì)控物檢測結(jié)果失控，則當(dāng)天病人樣本的測定結(jié)果 80 ? 當(dāng)以 3s為失控限時(shí)，每 100次約有一次判為失控 (99%的合格率 )。我們建議采用 。 82 Westgrad多規(guī)則控制方法 (以下簡稱多規(guī)則 ) ? (1) ? 前述 x177。 ? 2）在控制圖上繪 7條平行線。 2S寫成 12S， x177。它只指出可能有問題，最后判別要經(jīng)過系 ? 5）經(jīng)過選擇，將 13S ， 22S ， R4S ， 41S ，1θX 等列為失控規(guī)則，內(nèi)中既有對(duì)隨機(jī)誤差敏感的，也有對(duì)系統(tǒng)誤差敏感的。 3S限值（符合 13S規(guī)則）。 2S線上就認(rèn)為失控，這是錯(cuò)誤的理解。并且將原來的結(jié)果抹去，點(diǎn)上新的接近 X ? ● 12S 是警告規(guī)則，不是失控規(guī)則。確實(shí)失控，不僅控制品重做，更應(yīng)檢查失控原因，糾正誤差后，連同病人一起重做。 2S范圍，而不只是在 x177。實(shí) ? 出現(xiàn)控制值超出 x177。 2S控制方法對(duì)誤差捕獲的靈敏度較高，較X177。 94 ? （ 1） 試驗(yàn)首先應(yīng)成立，滿足試劑盒要求 。從表 ? ②通過室內(nèi)質(zhì)控，批內(nèi)、批間質(zhì)控圖（圖 、），我們就會(huì)發(fā)現(xiàn)該室檢測的精密度、準(zhǔn)確度極差，許多階段存在有系統(tǒng)誤差，反映出許多問題有待發(fā)現(xiàn)和解決。從而選擇 “ 更好 ” ，使之不斷提高，以達(dá)到 “ 最好 ”