【正文】 使用紫外分光光度計(jì)進(jìn)行核酸溶 液定量和純度的初步判斷。但由于比色法僅限于可見光區(qū)，而且精度低，已遠(yuǎn)遠(yuǎn)不能滿足高精度微量分析的要求。（3）揮發(fā)性、腐蝕性、強(qiáng)酸強(qiáng)堿類物質(zhì)應(yīng)盛于帶蓋稱量瓶內(nèi)稱量，防止腐蝕天平?！辨I自動(dòng)校對零，然后逐漸加入待稱物質(zhì)，直至所需重量為止。（2）打開天平開關(guān)“on”，天平則自動(dòng)進(jìn)行靈敏度及零點(diǎn)調(diào)節(jié)。目前實(shí)驗(yàn)室常規(guī)備用的是自動(dòng)化程度較高的電子分析天平。嚴(yán)禁將電泳槽放在儀器頂部，避免緩沖液灑進(jìn)儀器內(nèi)部。此時(shí)按任一鍵可止鳴。在狀態(tài)欄最下方，顯示實(shí)際的工作時(shí)間（精確到秒）。⑥確認(rèn)各參數(shù)無誤后，按“啟動(dòng)”鍵，啟動(dòng)電泳儀輸出程序。③設(shè)置電流I，按“選擇”鍵，先使I反顯，然后輸入數(shù)字200。STEP174。則操作步驟如下：①按“模式”鍵，將工作模式由標(biāo)準(zhǔn)（STD）轉(zhuǎn)為定時(shí)（TIME）3 模式。屏幕轉(zhuǎn)成參數(shù)設(shè)置狀態(tài)，見圖一：U:0V U＝100V ｜Mode： STDI: 0mAI ＝50mA｜ P: 0W P＝50W｜T: 00:00 T＝ 01:00｜其中:左側(cè)大寫U: I: P: T: 為電泳時(shí)實(shí)際值；中間部分顯示程序的常設(shè)值（預(yù)置值）。區(qū)帶電泳需用各種類型的物質(zhì)作為支持物，常用的支持物有濾紙、醋酸纖維薄膜、非凝膠性支持物、凝膠性支持物及硅膠―G薄層等，分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)中最常用的是瓊脂糖凝膠電泳。（7）不得在機(jī)器運(yùn)轉(zhuǎn)過程中或轉(zhuǎn)子未停穩(wěn)的情況下打開蓋門，以免發(fā)生事故。（4）揮發(fā)性或腐蝕性液體離心時(shí)，應(yīng)使用帶蓋的離心管，并確保液體不外漏以免腐蝕機(jī)腔或造成事故。（6）按控制面板上的停止鍵，數(shù)碼管顯示dedT，數(shù)秒鐘后即顯示閃爍的轉(zhuǎn)速值，這時(shí)機(jī)器已準(zhǔn)備好下一次工作。（3）將預(yù)先平衡好的樣品放置于轉(zhuǎn)頭樣品架上，關(guān)閉機(jī)蓋。試轉(zhuǎn)前應(yīng)先打開蓋門，用手盤動(dòng)轉(zhuǎn)軸，輕巧靈活，無異常現(xiàn)象方可上所用的轉(zhuǎn)頭。在國內(nèi)，有多個(gè)廠家生產(chǎn)冷凍離心機(jī)，本實(shí)驗(yàn)室的高速冷凍離心機(jī)為GL20GⅡ型（上海安亭），落地式。一個(gè)標(biāo)準(zhǔn)的分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室除了具有一般生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室的常規(guī)儀器設(shè)備外，還具有一些特殊用途的儀器，這些儀器一般較精密，價(jià)格昂貴。引發(fā)體與DNA結(jié)合后由引物酶合成RNA引物并合成與RNA引物相連接的岡崎片斷。分為HMG和HMG2兩大類。重疊的部分可以在調(diào)控區(qū),也可以在結(jié)構(gòu)基因區(qū)。單順反子:只編碼一個(gè)蛋白質(zhì)的mRNA稱為單順反子mRNA。不同ARS序列的共同特征是有一個(gè)被稱為A區(qū)的11bp的保守序列。,DNA的半不連續(xù)復(fù)制:DNA復(fù)制過程中,前導(dǎo)鏈的復(fù)制是連續(xù)的，而另一條鏈,即后隨鏈的復(fù)制是中斷的、不連續(xù)的衛(wèi)星DNA:又稱隨體DNA。大腸桿菌的復(fù)制起點(diǎn)包括Ornh和OriH,OnC是首選的復(fù)制起點(diǎn),而OnH是在 Rnase h缺失突變株中發(fā)現(xiàn)的一系列復(fù)制起點(diǎn)DNA的半保留復(fù)制DNA在復(fù)制過程中,每條鏈分別作為模板合成新鏈,產(chǎn)生互補(bǔ)的兩條鏈。C值(c value)。結(jié)構(gòu)分子生物學(xué):研究生物大分子特定的空間結(jié)構(gòu)及結(jié)構(gòu)的運(yùn)動(dòng)變化與其生物學(xué)功能關(guān)系的科學(xué)。一個(gè)典型的真核基因 包括:(1)編碼序列—外顯子(exon)。9．體外重組常用的連接方法有哪些？各有何優(yōu)缺點(diǎn)？13．何謂核酸雜交？常用的雜交方法有哪些？？分子克隆中常用的宿主細(xì)胞有哪些？宿主細(xì)胞應(yīng)具備哪些條件？3DNA損傷修復(fù)有哪些類型？試述各類型的修復(fù)方式。轉(zhuǎn)錄水平的調(diào)節(jié)C．翻譯水平的調(diào)節(jié)D。6有基因表達(dá)活性的染色質(zhì)DNA對DNaseⅠ更敏感。5基因的甲基化程度愈高，其表達(dá)則降低。4COS區(qū)是指λ噬菌體粘性末端構(gòu)成的區(qū)域。4轉(zhuǎn)錄后基因沉默被稱為RNAi。3CAP結(jié)合在啟動(dòng)子上時(shí)，能促進(jìn)RNA聚合酶與啟動(dòng)子結(jié)合，促進(jìn)轉(zhuǎn)錄。（）3所有多肽鏈經(jīng)核糖體翻譯出來即有正常生理功能。2在雙向復(fù)制中一條鏈按5′→3′的方向合成，另一條鏈按3′→5′的方向合成。2原核細(xì)胞和真核細(xì)胞中許多mRNA都是多順反子轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物。以RNA為模版合成出的DNA鏈叫負(fù)股鏈。1中度重復(fù)順序一般具有種特異性。1短分散片段重復(fù)順序的平均長度約為35005000bp。串聯(lián)重復(fù)序列是形成衛(wèi)星DNA 的基礎(chǔ)。（）真核細(xì)胞基因轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物為單順反子。50．DNA切除修復(fù)需要的酶有（）、（）和（）。39．PCR技術(shù)的基本過程是（）、（）、（）。34．常用的核酸探針包括（）、（）和（）。30．體外重組常用方法有（）、（）、（）和（）。（）序列； DNA分子在該酶切割下可產(chǎn)生（）、（）或（）末端。22.、操縱子由（）、（）和（）組成；受（）產(chǎn)物的調(diào)控。（）、（）、（）、（）和（）。（）、（）和（）三類。（）、（）、（）和（）四種。細(xì)胞死亡是生命現(xiàn)象不可逆停止及生命的結(jié)束，正常的組織中經(jīng)常發(fā)生細(xì)胞死亡，是維持組織機(jī)能和形態(tài)所必須的，包括細(xì)胞主動(dòng)死亡程序性死亡和細(xì)胞被動(dòng)死亡即細(xì)胞壞死、細(xì)胞凋亡。細(xì)胞是有機(jī)體的基本結(jié)構(gòu)單位和功能單位，而細(xì)胞周期則是保證細(xì)胞進(jìn)行生命活動(dòng)的基本過程。介紹了基因組重排技術(shù)的過程及應(yīng)用,展現(xiàn)了基因組重排技術(shù)的優(yōu)點(diǎn),并給出了基因組重排技術(shù)的發(fā)展在未來的應(yīng)用情景。一種 DNA損傷劑往往可以同時(shí)引起幾種類型的損傷，其損傷效應(yīng)的大小和類型與劑量及細(xì)胞所處的周期狀態(tài)有關(guān)。絲裂霉素C可造成DNA分子單鏈間的交聯(lián)，這種情況常發(fā)生在兩個(gè)單鏈的對角的鳥嘌呤之間。UV照射后DNA分子上的兩個(gè)相鄰的胸腺嘧啶(T)或胞嘧啶(C)之間可以共價(jià)鍵連結(jié)形成環(huán)丁酰環(huán)，這種環(huán)式結(jié)構(gòu)稱為二聚體。釋放出的新合成的單鏈或是先復(fù)制成雙鏈DNA，被酶切割成單位長度后，再形成環(huán)狀雙鏈DNA分子；或是釋放出的新合成的單鏈DNA，先被酶切割成單位長度形成單鏈環(huán)狀DNA分子后再復(fù)制成雙鏈環(huán)狀DNA分子。DNA復(fù)制的忠實(shí)性維護(hù)DNA聚合酶高度選擇性、DNA聚合酶的自我校對、錯(cuò)配修復(fù)連接體和去連接體幾種特殊形式的DNA合成誘導(dǎo)型穩(wěn)定DNA復(fù)制、DNA重組依賴的DNA復(fù)制、組成型穩(wěn)定DNA復(fù)制、DNA的跨損傷復(fù)制?！?39。以339。但在低等生物中，也可進(jìn)行單向復(fù)制。端自由羥基（339。DNA以半保留方式進(jìn)行復(fù)制， 和 所完成的實(shí)驗(yàn)所證明。第五章、基因的自身維護(hù)DNA復(fù)制DNA復(fù)制是指DNA雙鏈在細(xì)胞分裂以前的分裂間期進(jìn)行的復(fù)制過程，復(fù)制的結(jié)果是一條雙鏈變成兩條一樣的雙鏈（如果復(fù)制過程正常的話），每條雙鏈都與原來的雙鏈一樣。一些密碼子與通用密碼子不同。與核基因組相比，線粒體基因組有如下有趣的性質(zhì)： 所有的基因都位于一個(gè)單一的環(huán)狀DNA分子上。(二)在細(xì)菌細(xì)胞中，某種特定基因的數(shù)目。恒定的拷貝數(shù)與質(zhì)粒復(fù)制控制系統(tǒng)、宿主細(xì)胞遺傳背景及生長條件有關(guān)。大多數(shù)真核生物為蛋白質(zhì)編碼的基因都含有“居間序列”，即不為多肽編碼，其轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物在mRNA前體的加工過程中被切除的成分。真核生物的同一個(gè)基因簇的基因，不會(huì)像原核生物的操縱子結(jié)構(gòu)那樣，轉(zhuǎn)錄到同一個(gè)mRNA上。c、功能相關(guān)的序列常串連在一起，由共同的調(diào)控元件調(diào)控，并轉(zhuǎn)錄成同一mRNA分子，可指導(dǎo)多種蛋白質(zhì)的合成，這種結(jié)構(gòu)稱操縱子。1920年，（Hans Winkler）首次使用基因組這一名詞。這些RNA的共同特點(diǎn)是都能從基因組上轉(zhuǎn)錄而來，但是不翻譯成蛋白，在RNA 水平上就能行使各自的生物學(xué)功能了。這個(gè)詞是從拉丁詞順，這意味著“在同一側(cè)的”構(gòu)建。在生物體的不同發(fā)育期，基因的活性是不同的，而且基因的活性有嚴(yán)格的程序。、生物體細(xì)胞中的DNA分子上有很多基因，但并不是每一基因的特征都表現(xiàn)出來。結(jié)構(gòu)異染色質(zhì)是指各類細(xì)胞在整個(gè)細(xì)胞周期內(nèi)處于凝集狀態(tài)的染色質(zhì)，多定位于著絲粒區(qū)、端粒區(qū)，含有大量高度重復(fù)順序的脫氧核糖核酸（DNA），稱為衛(wèi)星DNA（satellite DNA）。常染色質(zhì)并非所有基因都具有轉(zhuǎn)錄活性，處于常染色質(zhì)狀態(tài)只是基因轉(zhuǎn)錄的必要條件，而不是充分條件。通過一對分別與選定的2段DNA配對的引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增，通過PCR產(chǎn)物的有無、產(chǎn)量的高低等，就可以對是否存在相互作用進(jìn)行判斷。核小體是染色體的基本結(jié)構(gòu)單位，由DNA和組蛋白（histone）構(gòu)成，是染色質(zhì)（染色體）的基本結(jié)構(gòu)單位。核小體是由DNA與四對組織蛋白（共8個(gè)）的復(fù)合物，其中有H2A和H2B的二聚體兩組以及H3和H4的二聚體兩組。性細(xì)胞如精子、卵子等是單倍體，染色體數(shù)目只是體細(xì)胞的一半。哺乳動(dòng)物雄性個(gè)體細(xì)胞的性染色體對為XY，雌性則為XX。染色體和核小體染色體（Chromosome），是細(xì)胞內(nèi)具有遺傳性質(zhì)的物體，易被堿性染料染成深色，又叫染色質(zhì)。 或 紐數(shù)（Writhing number）：其數(shù)值有公式L=T+W 計(jì)算得到，以W表示（或以τ表示），不一定為整數(shù)。（Twisting number）：即DNA分子中的WatsonCrick螺旋周數(shù)，以T 表示(或以β表示)，其數(shù)值可直接在處于最穩(wěn)定狀態(tài)下的雙鏈環(huán)形（或超螺旋形式）DNA中的實(shí)際螺旋周數(shù)計(jì)數(shù)得到，不一定是整數(shù)，右手螺旋為正，左手螺旋為負(fù)。不同的DNA分子由于堿基對的排列順序存在著差異,因此,每一個(gè)DNA分子的堿基對都有其特定的排列順序,這種特定的排列順序包含著特定的遺傳信息,從而使DNA分子具有特異性?，F(xiàn)在普遍認(rèn)為堿基堆集力是穩(wěn)定DNA結(jié)構(gòu)的最重要的因素。DNA分子的雙螺旋結(jié)構(gòu)是相對穩(wěn)定的。核酸存在于所有動(dòng)植物細(xì)胞、微生物和病毒、噬菌體內(nèi)，是生命的最基本物質(zhì)之一，對生物的生長、遺傳、變異等現(xiàn)象起著重要的決定作用?；蚪M學(xué)的主要工具和方法包括： 生物信息學(xué)，遺傳分析，基因表達(dá)測量和基因功能鑒定?；蚪M學(xué)基因組學(xué)（英文genomics），研究生物基因組和如何利用基因的一門學(xué)問。重組酶僅能催化特異性位點(diǎn)間的重組，因而重組具有特異性和高度保守性?；蚯贸芍兄鼓骋换虻谋磉_(dá)外，還包括引入新基因及引入定點(diǎn)突變。同源重組需要一系列的蛋白質(zhì)催化，如原核生物細(xì)胞內(nèi)的RecA、RecBCD、RecF、RecO、RecR等；以及真核生物細(xì)胞內(nèi)的Rad5Mre11Rad50等等。在為蛋白質(zhì)編碼的序列中如缺失及插入的核苷酸數(shù)不是3的整倍數(shù)，則發(fā)生讀框移動(dòng)（reading frame shift），使其后所譯讀的氨基酸序列全部混亂，稱為移碼突變（frameshift mutaion）。DNA損傷的改變類型：a、點(diǎn)突變：指DNA上單一堿基的變異。也許這未能完全修復(fù)而存留下來的損傷會(huì)在適合的條件下顯示出來（如細(xì)胞的癌變等），但如果細(xì)胞不具備這修復(fù)功能，就無法對付經(jīng)常在發(fā)生的DNA損傷事件，就不能生存。DNA修復(fù)DNA修復(fù)（DNA repairing）是細(xì)胞對DNA受損傷后的一種反應(yīng)，這種反應(yīng)可能使DNA結(jié)構(gòu)恢復(fù)原樣，重新能執(zhí)行它原來的功能；但有時(shí)并非能完全消除DNA的損傷，只是使細(xì)胞能夠耐受這DNA的損傷而能繼續(xù)生存。情況分為：substitutation（替換）deletion（刪除）insertion（插入）exon skipping（外顯子跳躍）。c、插入：指一個(gè)或一段核苷酸插入到DNA鏈中。同源重組 同源重組，（Homologus Rebination)是指發(fā)生在姐妹染色單體（sister chromatin)之間或同一染色體上含有同源序列的DNA分子之間或分子之內(nèi)的重新組合。這與早期生理學(xué)研究中常用的切除部分觀察整體推測功能的三部曲思想相似。位點(diǎn)特異性重組是發(fā)生在兩條DNA鏈特異位點(diǎn)上的重組，重組的發(fā)生需一段同源序列即特異性位點(diǎn)(又稱附著點(diǎn)；attachmentsite，att)和位點(diǎn)特異性的蛋白因子即重組酶參與催化。修復(fù)的過程是：識(shí)別出正確的鏈，切除掉不正確的部分，然后通過DNA聚合酶III和DNA連接酶的作用，合成正確配對的雙鏈DNA。基因組研究應(yīng)該包括兩方面的內(nèi)容：以全基因組測序?yàn)槟繕?biāo)的結(jié)構(gòu)基因組學(xué)（structural genomics）和以基因功能鑒定為目標(biāo)的功能基因組學(xué)（functional genomics)，又被稱為后基因組（postgenome）研究，成為系統(tǒng)生物學(xué)的重要方法。RNA主要是負(fù)責(zé)DNA遺傳信息的翻譯和表達(dá)，為單鏈分子，分子量要比DNA小得多。DNA的結(jié)構(gòu)DNA即脫氧核糖核酸（英文Deoxyribonucleic acid的縮寫）,又稱去氧核糖核苷酸，是染色體主要組成成分，同時(shí)也是組成基因的材料。各個(gè)堿基對之間的這種縱向的相互作用力叫做堿基堆集力,它是芳香族堿基π電子間的相互作用引起的。例如,一個(gè)具有4 000個(gè)堿基對的DNA分子所攜帶的遺傳信息是4種,即10種。由此引入拓?fù)鋵W(xué)參數(shù)： （Linking number）：在雙螺旋DNA中，一條鏈以右手螺旋繞另一條鏈纏繞的次數(shù)，以L 表示（或以α表示），其計(jì)數(shù)方法為處于松弛環(huán)形DNA時(shí)的螺旋周數(shù)，肯定為整數(shù)，右手螺旋為正、左手螺旋為負(fù)。如260bp BDNA雙鏈自然狀態(tài)下T=25，解鏈20%時(shí)的T=20。用σ表示，由公式σ = Lβ /β 表示。性細(xì)胞如精子、卵子等是單倍體，染色體數(shù)目只是體細(xì)胞的一半。在無性繁殖物種中，生物體內(nèi)所有細(xì)胞的染色體數(shù)目都一樣；而在有性繁殖大部分物種中，生物體的體細(xì)胞染色體成對分布，稱為二倍體。核小體（英語：Nucleosome，也譯作核體或核仁小體等）是組成真核生物染色質(zhì)（除精子染色質(zhì)外）