12基因工程的基本操作程序1-全文預(yù)覽
【正文】 _； 有一段已知基因的核苷酸序列 （二）利用 PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因 變性、退火、延伸三步曲 ?變性： 加熱至 90～95℃ 雙鏈 DNA解鏈成為單鏈 DNA ?退火： 冷卻至 55～60℃ 部分引物與模板的單鏈 DNA的特定互補(bǔ)部位相配對和結(jié)合 ?延伸： 加熱至 70～75℃ 以目的基因為模板，合成互補(bǔ)的新 DNA鏈 變性 退火 延伸 ③過程： a、 DNA變性（ 90℃ 95℃ ）：雙鏈 DNA模板 在 _____作用下， _____斷裂，形成 ___________ b、退火（ 復(fù)性 55℃ 60℃ ）：系統(tǒng)溫度降低，引 物與 DNA模板結(jié)合，形成局部 ________。 非編碼序列： 包括非編碼區(qū)和內(nèi)含子 結(jié)構(gòu)基因 外顯子 內(nèi)含子 轉(zhuǎn)錄、加工修飾 mRNA 原核細(xì)胞 真核細(xì)胞 不同點 編碼區(qū)是 _____的 編碼區(qū)是間隔的、 _____的 相同點 都由能夠編碼蛋白質(zhì)的 _____ _ 和具有調(diào)控作用的 ______ 區(qū)組成的 原核細(xì)胞與真核細(xì)胞的基因結(jié)構(gòu)比較 連續(xù) 不連續(xù) 編碼區(qū) 非編碼 基因組文庫和部分基因文庫的比較 文庫類型 cDNA文庫 基因組文庫 文庫大小 基因中啟動子 基因中內(nèi)含子 基因多少 物種間基因交流 小 大 無 有 無 有 某種生物的部分基因 某種生物的全部基因 可以 部分基因可以 基因表達(dá)的計算 ? 在真核生物中，對應(yīng)的是 的堿基數(shù) DNA mRNA 蛋白質(zhì) 轉(zhuǎn)錄 翻譯 6 3 1 氨基酸數(shù) 堿基數(shù) 基因中外顯子 思考： 如何從基因文庫中得到所需要的基因？ 依據(jù)：目的基因的有關(guān)信息。 終止子 ：是位于基因 尾端 的一段特殊的 DNA片斷，能 終止 mRNA的轉(zhuǎn)錄。 （ 2） cDNA構(gòu)建方法 反轉(zhuǎn)錄法 基因組 DNA文庫 cDNA文庫 （ 3）基因組 DNA文庫與 cDNA文庫的構(gòu)建 補(bǔ)：原核細(xì)胞的基因結(jié)構(gòu) 非編碼區(qū) 非編碼區(qū) 編碼區(qū) 編碼區(qū)上游 編碼區(qū)下游 與 RNA聚合酶結(jié)合位點 啟動子 終止子 RNA聚合酶能夠識別調(diào)控序列中的結(jié)合位點，并與其結(jié)合?；蚬こ痰幕静僮鞒绦? 主要包括四個步驟： ? （ 1）目的基因的獲取 ? （ 2） ? （ 3）將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞 ? （ 4）目的基因的檢測與鑒定 基因 表達(dá)載體 的構(gòu)建 一、目的基因的獲取 獲取方法： （ 1）從 基因文庫 中獲取目的基因； （ 2）利用 PCR技術(shù) 擴(kuò)增目的基因； （ 3）通過 DNA合成儀用化學(xué)方法直接 人工合成 。 （ 1）基因組文庫的構(gòu)建模式圖 通過對 受體菌 的培養(yǎng)而儲存基因 以目的基因轉(zhuǎn)錄成的 信使 RNA為模板，再 反轉(zhuǎn)錄酶
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