人教版教學(xué)課件基因工程基本操作程序-全文預(yù)覽
【正文】 的構(gòu)建方法 ① 基因組文庫(kù)的構(gòu)建 有啟動(dòng)子和內(nèi)含子 提取某生物 特定發(fā)育時(shí)期 的 mRNA 單鏈 DNA 雙鏈 cDNA片段 重組載體 與載體連接 cDNA文庫(kù) 逆轉(zhuǎn)錄酶 DNA聚合酶 導(dǎo)入受體菌 ② cDNA文庫(kù)的構(gòu)建 逆轉(zhuǎn)錄法： 部分基因：基因的選擇性表達(dá) 無(wú)啟動(dòng)子和內(nèi)含子 真核生物的基因用逆轉(zhuǎn)錄法得到的 cDNA與原基因相同嗎？有哪些差異？原核生物基因呢？ 思考？ 真核生物：無(wú)非編碼區(qū)和內(nèi)含子 原核生物：無(wú)非編碼區(qū) （ 3）構(gòu)建基因文庫(kù)的目的 怎樣從基因文庫(kù)中得到我們所需的目的基因呢 ? 便于在 不知道目的基因核苷酸序列的情況下，獲得所需的目的基因。 基因工程的基本操作程序 目的基因的獲取 基因表達(dá)載體的構(gòu)建 將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞 目的基因的檢測(cè)與鑒定 基因工程基本操作的四個(gè)步驟 一、目的基因的獲取 (一 )目的基因主要是 ______________________, 也可是一些具有調(diào)控作用的因子。 種類 基因組文庫(kù)： 含有一種生物的 全部 基因 部分基因文庫(kù)： 只包含了一種生物的 部分 基因， 如： cDNA文庫(kù) 原核細(xì)胞基因結(jié)構(gòu)： 基因 非編碼區(qū)： 非編碼區(qū)： 調(diào)控序列 編碼區(qū)： 編碼蛋白質(zhì) 終止子： 終止轉(zhuǎn)錄 啟動(dòng)子：?jiǎn)?dòng)轉(zhuǎn)錄 ， RNA聚合酶結(jié)合識(shí)別位點(diǎn) mRNA 翻譯 特定功能的蛋白質(zhì) 轉(zhuǎn)錄 特點(diǎn)： 編碼區(qū)是連續(xù)的，非編碼區(qū)起調(diào)控作用 DNA分子 2：真核細(xì)胞基因結(jié)構(gòu)： 基因 非編碼區(qū)： 非編碼區(qū)： 編碼區(qū)： 編碼蛋白質(zhì) 終止子 啟動(dòng)子 前體 mRNA 外顯子和內(nèi)含子都轉(zhuǎn)錄 特點(diǎn)： 編碼區(qū)間隔不連續(xù)！分為 內(nèi)含子 和 外顯子 。 ② 原理： __________ 多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng) 體外 特定 DNA片段 DNA復(fù)制 ③ 前提 __________ 一段已知目的基因的核苷酸序列 ④ 過(guò)程： a、 DNA變性 （ 90℃ 95℃ ）：雙鏈 DNA模板在熱作用下，_____斷裂，形成 ________ b、退火 （ 復(fù)性 55℃ 65℃ ）：系統(tǒng)溫度降低， 引物 與 DNA模板結(jié)合，形成局部________。 （ 3）將切下的目的基因片段插入質(zhì)粒的 ______處，再加入適量 ___________，形成了一個(gè)重組 DNA分子（重組質(zhì)粒） 限制酶 黏性末端 同一種限制酶 的黏性末端 切口 DNA連接酶 相同 : 第二步：基因表達(dá)載體的構(gòu)建 基因表達(dá)載體的組成？ ① 使目的基因在受體細(xì)胞中 穩(wěn)定存在 ，并且可以 遺傳 給下一代 ② 使目的基因能夠 表達(dá)和發(fā)揮作用 基因表達(dá)載體 構(gòu)建的目的 ？（ P162） 目的基因必須在啟動(dòng)子與終止子之間 目的基因 啟動(dòng)子： 基因的首端， RNA聚合酶識(shí)別和結(jié)合的部位，驅(qū)動(dòng)基因轉(zhuǎn)錄出 mRNA 終
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