實(shí)驗(yàn)四__重組蛋白的sds-page-全文預(yù)覽
【正文】 04 0. 004 0. 004 0. 004 T o t al V o l um e ( m L ) 10 10 10 10 10 (ml) (ml) F i nal G el C o nc ent r at i o n 5 % 5 ％ 3 0 % A c r / 1% B i s 貯液 ( m L ) 0. 33 0. 7 濃縮膠緩沖液（ 1M, pH 6. 8 ） ( m L ) 0. 25 0. 5 10% S D S ( m L ) 0. 02 0. 04 ddH2O ( m L ) 1. 4 2. 7 10% 過(guò)硫酸胺 0. 02 0. 04 T E ME D 0. 002 0. 004 T o t al V o l um e ( m L ) 2 4 (ml) (ml) 上樣與電泳 將電泳槽與電泳儀連接好 ， 上槽接 負(fù)極 ， 下槽接 正極 。 配置貯備溶液 A 30%Acr/1%Bis 貯液： Acr 30 g Bis g 溶于去離子水，定容至 100mL。 濃度過(guò)高 ， 易造成拖尾 ， 甚至影響蛋白質(zhì)遷移率與分子量對(duì)數(shù)的線性關(guān)系；濃度太低則不易檢測(cè) 。 2. 樣品處理液中 SDS單體的濃度 :為了保證蛋白質(zhì)與 SDS的充分結(jié)合 ，溶液中 SDS的總量至少要比蛋白質(zhì)高 34倍 ， 甚至 10倍以上 。 蛋白質(zhì)完全變性 二硫鍵全部還原 與 SDS充分結(jié)合 樣品處理 二硫蘇糖醇 （ DTT） (或 β 巰基乙醇 ) 1mL 10%SDS 4 mL 濃縮膠緩沖液 ml 87%甘油 g %溴酚藍(lán) 2mL ddH2O 至 20mL 1 mL/管分裝，－ 20℃ 保存。 而長(zhǎng)軸長(zhǎng)度與蛋白質(zhì)分子量成正比。 SDS 是一種陰離子去污劑，作為變性劑和助溶性試劑，它能斷裂分子內(nèi)和分子間的氫鍵，破壞蛋白質(zhì)的二級(jí)和三級(jí)結(jié)構(gòu)，使蛋白去折疊變性，多聚體解聚為亞基。 分子篩效應(yīng)不同于柱層析中的分子篩效應(yīng)，后者是大分子先從凝膠顆粒間的縫隙流出，小分子后流出。 (3)電位梯度的不連續(xù)性 V(電泳速度 )=E(電位梯度 ) * m(遷移率 ) E高 m慢 ≈E低 m快 由于蛋白質(zhì)的有效遷移率恰好介于快、慢離子之間，因此也就聚集在這個(gè)移動(dòng)的界面附近，被濃縮形成一個(gè)狹小的中間層。 Gly:其 pI =， 在 濃縮膠 緩沖體系中，甘氨酸解離度很小，因而在電場(chǎng)中遷移很慢，稱(chēng)為尾隨離子（ trailing ion） ， 慢離子 。 凝膠濃度與孔徑的關(guān)系： T濃度大 ， 孔徑小 ， 移動(dòng)顆粒穿過(guò)網(wǎng)孔阻力大 。 ?化學(xué)聚合： 使用 AP作催化劑，常用于制備分離膠（小孔膠）。 ② 甲叉雙丙烯酰胺 (Bis)： 是交聯(lián)劑，將聚丙烯酰胺鏈交聯(lián)成三維網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)。實(shí)驗(yàn)四、 SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳 法測(cè)定蛋白質(zhì)的分子量 1 實(shí)驗(yàn)?zāi)康? 通過(guò)本實(shí)驗(yàn)學(xué)習(xí) SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳法的基本原理。 ① 丙烯酰胺（ Acr） ： 是凝膠的最主要成分，單體聚合形成長(zhǎng)鏈。
規(guī)章制度相關(guān)推薦
鄂ICP備17016276號(hào)-1