【正文】 個(gè)體特異性，達(dá)到了如同人類指紋那樣的高度專一性，所以稱其為DNA指紋圖譜（ DNAfragment錄人類染色體上小衛(wèi)星 DNA的高度可變區(qū)（HVR）是由頭尾相連的串聯(lián)重復(fù)序列（tandem(CGG)n等，稱為微衛(wèi)星 DNA。n 重復(fù)單位 6～ 25錄目 （ 2）異源雙鏈 PCR法： 檢測 APC基因變異。如 hMSHhMLH hPMS1或 hPMS2基因的突變所致的 DNA錯(cuò)配修復(fù)缺陷與遺傳性非息肉性結(jié)腸癌的發(fā)生有關(guān)。p53基因的突變是結(jié)腸癌發(fā)展過程的晚期現(xiàn)象。cancer）基因失活是結(jié)腸癌發(fā)展的晚期事件。polyposis錄（ 1） PCR法檢測 BRCA1基因突變（ 2）熒光原位雜交（ FISH）檢測 BRCA2基因擴(kuò)增2．乳腺癌基因診斷方法目 BRCA2基因在 30% ～ 40% 的散發(fā)性乳腺癌有雜合性缺失（ LOH）。突變分布于整個(gè)編碼序列，沒有明顯的突變簇或突變熱點(diǎn)。gene）的突變。錄目 （ 2） DNA序列分析第 282位點(diǎn)突變率最高。2. ras原癌基因突變常用的檢測方法目 及 PCRSSCP分析： 擴(kuò)增 ras 基因第12位密碼子點(diǎn)突變部位，再用 SSCP技術(shù)進(jìn)行分析，或者直接測序確定患者 ras原癌基因的點(diǎn)突變。目 基因家族由 Hras、 Kras和 Nras組成。錄目 錄目 目 n 幽門螺桿菌（ HP）錄目 HCV為正鏈 RNA病毒，先反轉(zhuǎn)錄成 cDNA，再進(jìn)行巢式 PCR檢測 HCV。設(shè)計(jì)保守區(qū)序列引物，擴(kuò)增各型 HBV2． DNA連鎖分析 目 mutation）。拷貝。三核苷酸重復(fù)序列的異常擴(kuò)增以及相鄰CpG錄目 目 kb三種類型； Ⅱ 型倒位患者表現(xiàn)為 16和 kb、 14將基因組 DNA用 Nco錄目 錄目 bp、 723： bA/1:未酶解片段； M： pBR322 正常人的擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng) Mst Ⅱ 消化可生成 54bp和 56bp兩個(gè)片段，而鐮狀細(xì)胞貧血癥患者的 DNA片段不被酶切，仍為 110bp，雜合子可見三條帶正常人 雜合體患者 Marker目 錄正常人 突變攜帶者 患者鐮狀紅細(xì)胞貧血病的限制性內(nèi)切酶譜分析目 (CCT GAG G)5180。ASO雜交法目 GAG5180。GC3180。GAG錄（一）鐮狀細(xì)胞貧血病一、血紅蛋白病 ——ASO 雜交法 PCRRFLP分析 甲型血友病基因診斷 錄目 錄目 錄13kb患者正常repeats)③ number錄目 錄間接診斷：檢測與致病基因連鎖的遺傳標(biāo)記三代遺傳標(biāo)記：① DNA多態(tài)性： 指群體中的 DNA分子存在至少兩種不同的類型，即個(gè)體間同一染色體的相同位置上核苷酸序列存在一定的差異或變異。錄目 mRNA的絕對定量分析 錄目 錄3.端的互補(bǔ)與否，設(shè)計(jì)一對與正?；蛲蛔兡０迮鋵Φ奶禺愐锏任换蛱禺?PCR目 包括數(shù)十個(gè)堿基到數(shù)千個(gè)堿基的丟失、插入、替換、重復(fù)和倒位等，以及染色體突變或畸變，包括染色體的易位、缺失或染色三體（如唐氏綜合征）等。錄5/——5 /—3 /3/—RFLP（ 1）有限制性內(nèi)切酶位點(diǎn)改變目 目 錄目 chips）n 蛋白質(zhì)芯片 (protein錄DNA序列測定原理 (雙脫氧末端終止法)目 錄（五） 錄目 可借助核酸分子雜交或 PCR進(jìn)行檢測。lengthPCRSSCP分析 －目 的突變造成 DNA片段中堿基序列不同，變性為單鏈后在中性聚丙烯酰胺凝膠中的構(gòu)象不同（單鏈構(gòu)象多態(tài)性），利用遷移率的差別可使各種序列不同的單鏈分離開來。PCRASON：正常基因； H：雜合子基因； M：突變基因ASO1 ASO2NHM目 3.錄目 錄2.錄目 Mg2+錄目 錄（二） 聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng) (polymerase先將捕捉探針吸附于固相支持物上，與靶基因序列 A部分雜交，再加入標(biāo)記的檢測探針，檢測探針與靶基因序列 B部分雜交，檢測雜交信號(hào)。目 in situ錄5. 原位分子雜交n 熒光原位雜交specific錄目 反向斑點(diǎn)雜交（ reverse錄斑點(diǎn)雜交（ dotNorthern印跡雜交 (Northernblotting)目 → 變性處理 → DNA轉(zhuǎn)印到膜上并使其牢固結(jié)合 → 將標(biāo)記的探針與膜上 DNA片段雜交，分析雜交信號(hào)。錄目 錄目 n Western 免疫印跡（ Westernn 限制性片段長度多態(tài)性（ RFLP） acid 早期診斷性252。目 錄一、 基因 診 斷的概念、特點(diǎn)及 臨 床意義 定義： 利用分子生物學(xué)技術(shù)，通過檢測基因及基因表達(dá)產(chǎn)物的存在狀態(tài)，對人體疾病作出診斷的方法。Kan錄目 錄F 第一節(jié) 基因診斷學(xué)基礎(chǔ)F 第二節(jié) 遺傳病的基因診斷F 第三節(jié) 傳染病的基因診斷F 第四節(jié) 腫瘤的基因診斷F 第五節(jié) 基因診斷在法醫(yī)學(xué)上的應(yīng)用 F 第六節(jié) 基因治療的概念及策略 本章內(nèi)容提要目 錄 基因診斷與基因治療Gene Diagnosis and Gene Therapy第二十八章目 1976年加州大學(xué)華裔科學(xué)家 錄目 錄目 錄診斷依據(jù) (遺傳物質(zhì)改變 )l DNA、 RNA或蛋白質(zhì)水平變化，如病毒基因及其轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物在體內(nèi)從無到有、癌基因表達(dá)水平從低到高；l 基因結(jié)構(gòu)變化，如點(diǎn)突變引起基因失活、染色體轉(zhuǎn)位引起基因異常激活或滅活。 高靈敏性252。錄二、基因診斷中常用的分子生物學(xué)技術(shù)n 核酸分子雜交（ Nucleicn 單鏈構(gòu)象多態(tài)性（ SSCP） 目 hybridization 指兩條單鏈核酸在一定條件（溫度、鹽離子和有機(jī)溶劑濃度）下，按堿基互補(bǔ)的原則重新配對形成雙鏈的過程。錄目 提取 DNA→ 限制性內(nèi)切酶消化 DNA以產(chǎn)生特定長度的片段 → 凝膠電泳分離 印跡雜交 (Southern2.錄3.錄目 4.目 (allele錄目 (fluorescencepadlock)錄hybridization)待測靶基因序列上兩個(gè)相鄰但不重疊的 DNA片段（ A、 B片段），分別作為捕捉探針（不標(biāo)記的 A片段）和檢測探針（標(biāo)記的 B片段），同時(shí)與靶基因雜交。錄固相夾心雜交法示意圖 目 PCR）模板引物dNTP錄PCR在基因診斷中的應(yīng)用n RTPCRn 熒光定量 PCRn 多重 PCRn PCRASOn ASPCRn PCRSSCPn PCRRFLP目 RTPCR目 錄錄4.conformationDNA錄目 錄正常人 純合突變 雜合突變+fragment變異產(chǎn)生新的酶切位點(diǎn)或原有的酶切位點(diǎn)消失，在用限制性核酸內(nèi)切酶消化時(shí)產(chǎn)生不同長度或不同數(shù)量的片段。錄PCRRFLP目 錄目 錄目 錄（六）生物芯片 （ biochips）n 基因芯片（ gene錄基因芯片雜交流程示意圖目 錄三、 基因診斷技術(shù)路線與方法 n 直接診斷：直接分析致病基因分子結(jié)構(gòu)及表達(dá)是否異常n 間接診斷：利用多態(tài)性遺傳標(biāo)志與致病基因進(jìn)行連鎖分析 根據(jù)對致病基因或相關(guān)基因的了解程度決定基因診斷的技術(shù)途徑選擇。錄目 錄目 錄在 DNA序列上有一段較長序列的重新排布。錄 根據(jù)引物 3180。PCR）目 mRNA長度分析目 2. 遺傳標(biāo)記目 (variablerepeats)tandempolymorphism)目 HBS的間接基因診斷錄 第二節(jié) 遺傳病的基因診斷Gene Diagnosis of Hereditary Diseases目 （二） β珠蛋白生成障礙性貧血癥 錄目 錄n 正常的（ N）的 ASO探針：CCTTCTGTGGC3180。 3180。HBS的限制性內(nèi)切酶譜分析目 HBS的 PCRRFLP分析 PCRRFLP分析 bT注：由于 54? bp、 114錄目 錄?珠蛋白生成障礙性貧血癥的反向斑點(diǎn)雜交分析2. 反向斑點(diǎn)雜交目 目 I等內(nèi)切酶（酶切位點(diǎn)位于交換點(diǎn)兩側(cè)）消化，用特異探針進(jìn)行雜交分析，正常人表現(xiàn)為 I型倒位患者表現(xiàn)為 14 FVIII基因突變的檢測（ 1）依賴于 FVIII基因內(nèi)或旁側(cè)的多態(tài)性標(biāo)記的連鎖分析（ 2） RFLP連鎖分析（ 3） VNTR分析（ 4）短串聯(lián)重復(fù)序列（ STR）的連鎖分析目 智力低下基因 1（ FMR1） 5ˊ非翻譯區(qū)遺傳不穩(wěn)定的 (CGG)n8～ 50n 男性患者和脆性部位高表達(dá)的女性中，達(dá)到 200～ 1000拷貝，相鄰的 CpG島也被甲基化，稱為全突變（ fullmRNA在幾乎所有患者不表達(dá)或只有低表達(dá)，從而出現(xiàn)臨床癥狀。錄 一、病毒性疾病n 甲型肝炎病毒（ HAV）n 乙型肝炎病毒（ HBV）n 丙型肝炎病毒（ HCV）目 bp序列，再用探針雜交，靈敏度可達(dá)到 100個(gè)細(xì)菌水平。主要采用 PCR技術(shù)： ① 檢測 HP染色體 DNA特異片段； ② 檢測 HP尿素酶A基因； ③ 用 PCRRFLP鑒別 HP菌株。n 卡氏肺孢子蟲n 衣原體感染目 錄一、原癌基因與