基因工程的基本操作程序(3)-全文預(yù)覽
【正文】 法 結(jié)果顯示 分子 檢測 第一步 轉(zhuǎn)基因生物染色體的 DNA上是否插入了目的基因 DNA分子雜交（ DNA和DNA之間） 是否成功顯示出雜交帶 第二步 目的基因是否轉(zhuǎn)錄出 mRNA 分子雜交技術(shù)（ DNA mRNA 之間） 同上 第三步 目的基因是否翻譯出蛋白質(zhì) 抗原 — 抗體雜交 同上 個體水平鑒定 包括抗蟲，抗病的 接種 實驗，以確定是否有抗性以及抗性的程度；基因工程產(chǎn)品需要與天然產(chǎn)品的活性比較，以確定其功能是否相同等 歸納 : 基因工程的基本操作程序 1. 獲取目的基因 ? 從基因文庫 ? 利用 PCR技術(shù) ? 人工合成 2. 構(gòu)建基因表達載體 ? 目的基因、啟動子、終止子、標記基因 3. 將目的基因?qū)胧荏w細胞 ? 農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法、顯微注射法、 Ca2+處理微生物細胞 4. 目的基因的檢測與鑒定 ? 檢測：是否插入、轉(zhuǎn)錄、翻譯、個體水平的檢測 多細胞生物的檢測，將每個受體細胞單獨培養(yǎng)并誘導(dǎo)發(fā)育成完整個體，檢測這些個體是否攝入目的基因，攝入的基因是否表達（是否表現(xiàn)出相應(yīng)的性狀）。花粉管通道法就是在植物受粉后，花粉形成的花粉管還未愈合前，剪去柱頭，然后，滴加 DNA（含目的基因），使目的基因借助花粉管通道進入受體細胞。 編碼蛋白質(zhì) 核苷酸 染色體 轉(zhuǎn)錄 表達 體外 核苷酸 引物 人工合成 步驟二：基因表達載體的構(gòu)建 （ 1）用一定的 _________切割質(zhì)粒，使其出現(xiàn)一個切口，露出 ____________。 構(gòu)建基因組 DNA文庫時，首先應(yīng)分離細胞的 A、染色體 DNA B、線粒體 DNA C、總 mRNA D、 tRNA 目的基因可從基因文庫中獲得，下列有關(guān)基因文庫的描述正確的是 A、某生物的全套基因就是一個基因文庫 B、將含有某種生物不同的許多 DNA片段，導(dǎo)入某個生物 體內(nèi)，則這個生物就是一個基因文庫 C、含有一種生物所有基因的基因文庫叫做基因組文庫 D、含有一種生物的一部分基因的基因文庫叫 cDNA文庫 A C 2） PCR技術(shù) —— 聚合酶鏈式反應(yīng) ? 原理： ? 前提： ? 原料 ? 方式 PCR擴增儀 DNA復(fù)制 一段已知目的基因的核苷酸序列 ： 以 _____方式擴增， 即 ____（ n為擴增循環(huán)的次數(shù)） 指數(shù) 2n 模板 DNA； DNA引物；四種脫氧核苷酸；熱穩(wěn)定 DNA聚合酶（ Taq酶）；離子 ? 過程 變性、退火、延伸三步曲 ?變性： 加熱至 90～ 95℃雙鏈 DNA解鏈
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