專題1《基因工程》專題復(fù)習(xí)-全文預(yù)覽
【正文】 胞的原理 借鑒 細(xì)菌或病毒侵染細(xì)胞 的途徑 。同理質(zhì)粒在 DNA連接酶的作用下也會(huì)出現(xiàn)前后相連，形成自身連接 。 如果目的基因是從基因組文庫(kù)中獲取的，因?yàn)槟康幕虮旧硪押袉?dòng)子、終止子，在構(gòu)建表達(dá)載體時(shí)，就不需要在加啟動(dòng)子、終止子。 c、延伸 （ 70℃ 75℃ ）：在 Taq酶的作用下， 合成與模板互補(bǔ)的 ________。 真核生物基因結(jié)構(gòu) 外顯子 ：真核細(xì)胞基因 DNA中的編碼序列，這些序列被轉(zhuǎn)錄成 RNA并進(jìn)而翻譯為蛋白質(zhì)。沒有啟動(dòng)子，基因就不能轉(zhuǎn)錄。則用限制酶 B和限制酶 H共同完成切割一個(gè)重組質(zhì)粒，預(yù)計(jì)產(chǎn)生的片段長(zhǎng)度（ kbp）可能是（多選） 、 、 、 、 、 、和 E B +E H+ E DNA片段長(zhǎng)度 CD 二、基因工程的基本操作程序 基因工程基本操作的四個(gè)步驟 目的基因的獲取 基因表達(dá)載體的構(gòu)建 將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞 目的基因的檢測(cè)與鑒定 一 .目的基因的概念 主要是指編碼 蛋白質(zhì) 基因，也可以是一些具有調(diào)控作用的因子。南京三模 )下列關(guān)于染色體和質(zhì)粒的敘述，正確的是 ( ) A．染色體和質(zhì)粒的化學(xué)本質(zhì)都是 DNA B．染色體和質(zhì)粒都只存在于原核細(xì)胞中 C．染色體和質(zhì)粒都與生物的遺傳有關(guān) D．染色體和質(zhì)粒都可作為基因工程的常用載體 C 限制酶是一種核酸切割酶，可辨識(shí)并切割 DNA分子上特定的核苷酸堿基序列。 ⑤質(zhì)粒能自我復(fù)制，既可在自身細(xì)胞、受體細(xì)胞內(nèi)，也可在體外。 ③作為載體必須具有一個(gè)至多個(gè)限制酶切點(diǎn)，而且每種酶的切點(diǎn)最好只有一個(gè)。 ? 具有某些標(biāo)記基因，供重組 DNA的鑒定和選擇。 coliDNA連接酶： 連接黏性末端 T4DNA連接酶： 連接黏性末端和平末端 ２ .DNA連接酶的種類 ： 脫氧核苷酸鏈上相鄰的兩個(gè)脫氧核苷酸之間的磷酸二酯鍵 DNA連接酶 DNA連接酶無(wú)特異性，其催化 DNA片段末端形成磷酸二脂鍵。但兩種同尾酶切割形成的 DNA片段經(jīng)連接后所形成的重組序列，不能被原來(lái)的限制酶所識(shí)別和切割。 ? 同裂酶（ Isoschizomers） 有些來(lái)源不同的限制酶卻識(shí)別和切割相同的序列，這類限制酶稱為同裂酶。 如： BamHⅠ 、 BstⅠ 都可識(shí)別 ——GGATCC——序列。 G A A T T C G C T T A A A A T T C G 限制酶切割ＤＮＡ分子示意圖 C T T A A G 黏性末端 黏性末端 什么叫平末端？ …… GAATTC…… …… CTTAAG…… …… GAATTC…… …… CTTAAG…… EcoRⅠ …… GAATTC…… …… CTTAAG…… …… GAATTC…… …… CTTAAG…… 不同來(lái)源的 DNA片段混合 將不同種來(lái)源的DNA片段連接起來(lái) 生物 A基因片段 生物 B基因片段 …… G AATTC…… …… CTTAA G…… 酶切 …… GAATTC…… …… CTTAAG…… …… G AATTC…… …… CTTAA G…… …… G AATTC…… …… CTTAA G…… 同一種 用同一種限制性酶處理不同 DNA片段，會(huì)形成 同樣的黏性末端 ，可進(jìn)行重組 ?；蚬こ虒ｎ}復(fù)習(xí) 一、基因工程的基本操作工具 １ . 基因工程的概念 這種技術(shù)是在生物體外，通過對(duì)DNA分子進(jìn)行人工“剪切”和“拼接”，對(duì)生物的基因進(jìn)行改造和重新組合，然后導(dǎo)入受體細(xì)胞內(nèi)進(jìn)行無(wú)性繁殖，使重組基因在受體細(xì)胞內(nèi)表達(dá)，產(chǎn)生出人類所需要的基因產(chǎn)物。 來(lái)源： 作用： 結(jié)果： 形成兩種末端 “分子手術(shù)刀 ” ——限制酶 黏性末端 平末端 可用于目的基因和載體的切割 特性： 限制酶是一類酶，而不是一種酶。 但有些特例，不同的 限制酶識(shí)別同一種堿基序列且切點(diǎn)相同。 少數(shù) 限制酶卻可識(shí)別不止一種堿基序列。 ? 同尾酶 (Isocaudomers) 有些來(lái)源不同的限制酶，識(shí)別及切割序列各不相同，但卻能產(chǎn)生出相同的粘性末端，這類限制酶稱為同尾酶。 E DNA連接酶 DNA聚合酶 連接 DNA鏈 連接部位 相同點(diǎn) 雙鏈 單鏈 在兩 DNA片段之間形成磷酸二酯鍵 將單個(gè)脫氧核苷酸加到已存在的核酸片段上，形成磷酸二酯鍵 都能形成 磷酸二酯鍵 DNA聚合酶和 DNA連接酶有何相同點(diǎn)和不同點(diǎn)？ 種類 項(xiàng)目 限制酶 DNA連 接酶 DNA 聚合酶 解旋酶 作用底物 DNA分子 DNA分子 片段 脫氧核苷酸 DNA 分子 作用部位 磷酸二 酯鍵 磷酸二 酯鍵 磷酸二 酯鍵 堿基對(duì)間 的氫鍵 作用特點(diǎn) 切割目的基因及載體，能專一性識(shí)別雙鏈 DNA分子的某種特定的核苷酸序列，并且使每一條鏈中特定部位的兩個(gè)核苷酸之間的磷酸二酯鍵斷開 將雙鏈 DNA片段 “ 縫合 ”起來(lái)，恢復(fù)被限制酶切開了的兩個(gè)核苷酸之間的磷酸二酯鍵 只能將單個(gè)脫氧核苷酸添加到脫氧核苷酸鏈上 將 DNA 兩條鏈之 間的氫鍵 打開 作用結(jié)果 形成黏性末端或平末端 形成重組 DNA分子 形成新的 DNA
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