【正文】 般城市空氣中雜菌數(shù)為 3000~8000個／米 3 。 ? (2)紫外線強度與消毒劑量指示卡： ? 測定燈管強度時 ， 將卡片置于離紫外燈管１Ｍ的中央處 ， 將圖案一面朝向燈管 ，照射一分鐘 （ 照射時間要準確 ） 后 ， 圖案正中涂層由白色變?yōu)樽霞t色 。滅菌后作細菌計數(shù)測定。 ? ⑵ 消毒前采樣：放置無菌規(guī)格板 ， 取無菌棉拭于含 5ml稀釋液試管中沾濕 ， 在規(guī)格板空心處旋轉(zhuǎn)自左至右涂抹整個區(qū)域 ? ⑶ 消毒后采樣：在前采樣地點旁用 ％ 過氧乙酸溶液消毒物體表面 ， 30分鐘后將無菌棉 拭于含 5ml采樣液試管中沾濕 ， 作為消毒后樣液 。 ? 為比較各種表面消毒劑的相對殺菌強度，常采用在臨床上最早使用的消毒劑 —— 石炭酸作為比較的標準，并提出了石炭酸系數(shù)這一指標。 ? 最后，還可以用氣體滅菌劑如氧化乙烯等對個別成分進行滅菌處理。 ? 濾膜過濾裝置、燒結(jié)玻璃濾板過濾器、石棉板過濾器（ Seitz濾器）、素燒瓷過濾器以及硅藻土過濾器等。 培養(yǎng)基連消工藝流程圖 ? （ 2）過濾除菌法 ? 是將液體或氣體用微孔薄膜過濾，使大于孔徑的細菌等微生物顆粒阻留，從而達到除菌目的。 ? 為了殺死所有微生物特別是耐熱的的芽孢 ， 空罐滅菌要求溫度較高 ， 滅菌時間較長 ， 只有這樣才能殺死設(shè)備中各死角殘存的雜菌或芽孢 。 ? 培養(yǎng)基中的顆粒物質(zhì) ? 培養(yǎng)基中的顆粒物質(zhì)大，滅菌困難，反之，滅菌容易。 τ =()log(No/Ns) τ 滅菌時間 （ 秒 ） k反應(yīng)速度常數(shù) ， 與菌的種類和加熱溫度有關(guān) （ s－１ ） No滅菌開始時 ， 污染的培養(yǎng)基中雜菌個數(shù) （ 個／ ml） Ns經(jīng)過滅菌時間 T后 ， 殘存活菌個數(shù) （ 個／ ml） （二）滅菌溫度與菌反應(yīng)速度常數(shù)的關(guān)系 滅菌溫度與菌死亡反應(yīng)速度常數(shù)的關(guān)系： k=AeE/RT K—— 菌死亡的速度常數(shù) （ 1／秒 ） ， 當反應(yīng)物的濃度為單位濃度時 ，則反應(yīng)速度常數(shù)在數(shù)值上等于反應(yīng)速度 A—— 阿累尼烏斯常數(shù) （ 1／秒 ） R—— 氣體常數(shù) （ *／開／摩爾 ） T—— 絕對溫度（開） 二、影響培養(yǎng)基滅菌的因素 ? pH值的影響 ? pH值對微生物的耐熱性影響很大 ， pH為 ~不易死亡 ， pH 易滲入微生物的細胞內(nèi) 。 ? 由于濕熱滅菌有經(jīng)濟和快速等特點 ， 因此被廣泛用于工業(yè)生產(chǎn) 。大小可根據(jù)需要而定，但最大的鍋每次裝料也最好不超過 500公斤。 立式或臥式滅菌鍋較大，多用于原種或少量栽培種培養(yǎng)基的滅菌，一般能裝幾十瓶或幾百瓶。 ? （ 5）加熱與散熱速度。 ? （ 2）滅菌鍋內(nèi)空氣排除程度的影響 ? 檢驗滅菌鍋內(nèi)空氣排除度，可采用多種方法。培養(yǎng)基一般在 135～ 140℃ 下處理 5～ 15秒鐘。 ? 此法適合于一切微生物學實驗室、醫(yī)療保健機構(gòu)或發(fā)酵工廠中對培養(yǎng)基及多種器材、物料的滅菌。 ? 間歇滅菌法，又稱丁達爾滅菌法或分段滅菌法。 2．濕熱滅菌法 ? 濕熱滅菌法比干熱滅菌法更有效。 ? 濕熱滅菌要比干熱滅菌更有效，這一方面是由于濕熱易于傳遞熱量，另一方面是由于濕熱更易破壞保持蛋白質(zhì)穩(wěn)定性的氫鍵等結(jié)構(gòu)，從而加速其變性。它是利用具有高度選擇毒力（即對病原菌具有高度毒力而對宿主無顯著毒性）的化學物質(zhì)來抑制宿主體內(nèi)病原微生物的生長繁殖，借以達到治療該傳染病的一種措施。 （二）消毒（ disinfection） ? 從字義上來看，消毒就是消除毒害，這里的 “ 毒害 ” 就是指傳染源或致病菌的意思，英文中的 “ disinfection”也是“ 消除傳染 ” 的意思。 ? 滅菌實質(zhì)上可分殺菌和溶菌兩種，前者指菌體雖死，但形體尚存，后者則指菌體殺死后，其細胞發(fā)生溶化、消失的現(xiàn)象 。 （ 1）低溫 （ 2）缺氧 （ 3）干燥 （ 4）高滲 （ 5）高酸度 （ 6）防腐劑 （四）化療（ chemotherapy） ? 化療即化學治療。 除菌的方法 ? 培養(yǎng)基的加熱滅菌（包括常壓或蒸汽高壓加熱法） ? 空氣的過濾除菌 ? 紫外線或電離輻射 ? 化學藥物滅菌 （一）高溫殺菌作用的種類 ? 高溫致死原理：由于它使微生物的蛋白質(zhì)和核酸等重要生物高分子發(fā)生變性、破壞，例如它可使核酸發(fā)生脫氨、脫嘌呤或降解，以及破壞細胞膜上的類脂質(zhì)成分等。 灼燒，是一種最徹底的干熱滅菌方法，但它只能用于接種環(huán)、接種針等少數(shù)對象的滅菌。 ? 巴氏消毒法是一種低溫消毒法 ? 低溫維持法：在 63℃ 下保持 30分鐘可進行牛奶消毒； ? 高溫瞬時法：用于牛奶消毒時只要在 72℃ 下保持 15秒鐘即可。 （ 2）加壓法 ? 常規(guī)加壓滅菌法 ? 盛有適量水的加壓蒸汽滅菌鍋加熱煮沸，徹底驅(qū)盡后將鍋密閉，再繼續(xù)加熱至 121℃ （壓力為 1kg／ cm2或 15磅／英寸 2），時間維持 15～20分鐘，也可采用在較低的溫度（ 115℃ ，即／ cm2或 10磅／英寸 2）下維持 35分鐘的方法。 ? 主要操作：將培養(yǎng)基在發(fā)酵罐外連續(xù)不斷地進行加熱、維持和冷卻，然后才進入發(fā)酵罐。 ? 天然原料尤其是麩皮等植物性原料配成的培養(yǎng)基，一般含菌量較高，而用純粹化學試劑配制成的組合培養(yǎng)基，含菌量低。要防止用常規(guī)的壓力和時間在加壓滅菌鍋內(nèi)進行大容量培養(yǎng)基的滅菌。 （三）高溫對培養(yǎng)基成分的有害影響及其防止 消除高溫有害影響的措施 ? （ 1）采用特殊加熱滅菌法 ? （ 2）對易破壞的含糖培養(yǎng)基進行滅菌時，應(yīng)先將糖液與其他成分分別滅菌后再合并； ? （ 3）對含 Ca2+或 Fe3+的培養(yǎng)基與磷酸鹽先作分別滅菌，然后再混合，就不易形成磷酸鹽沉淀； （ 4）對含有在高溫下易破壞成分的培養(yǎng)基（如含糖組合培養(yǎng)基）可進行低壓滅菌（在 112℃ 即 ／ cm2或 8磅／英寸 2下滅菌 15分鐘）或間歇滅菌； （ 5）在大規(guī)模發(fā)酵工業(yè)中，可采用連續(xù)加壓滅菌法進行培養(yǎng)基的滅菌 (二 )滅菌設(shè)備 l、高壓蒸汽滅菌 生產(chǎn)中使用高壓蒸汽滅菌鍋的型號很多 手提式滅菌鍋，容量小，多用于母種培養(yǎng)基滅菌。 ? 2．常壓蒸汽滅菌鍋 常壓蒸汽滅菌鍋是用鐵鍋、磚、水泥砌成的，造價低，適于一般生產(chǎn)單位和專業(yè)戶使用。 蒸汽冷凝時釋放大量潛熱 ， 并具有強有強大的穿透力 ， 在高溫和水存在時 ， 微生物細胞中的蛋白質(zhì)極易發(fā)生不可逆的凝固性變性 ， 致使微生物在短時間內(nèi)死亡 。 ? 雜菌雖然是一個復雜的高分子體系，但其受熱被殺死，主要原因是高溫能使蛋白質(zhì)變性，這種反應(yīng)屬與單分子反應(yīng)，因此雜菌在一定溫度下受熱死亡也遵循單分子反應(yīng)方程。 ? 高濃度的鹽類 ， 色素則削弱其耐熱性 ，故較易滅菌 。 無論是種子罐 、 發(fā)酵罐 、還是尿素 （ 或液氨 ） 罐 、 消泡罐 ， 當培養(yǎng)基（ 或物料 ） 尚未進罐前對罐進行預先滅菌 ， 為空罐滅菌 。這就是所謂的 “ 三路進氣 ” 。關(guān)鍵步驟是安裝濾膜及無菌過濾過程。 ? 另外，加入 ％ EDTA或 ％ NTA（氮川三乙酸）等螯合劑到培養(yǎng)基中，可防止金屬離子發(fā)生沉淀。 ? 表面消毒劑是指對一切活細胞都有毒性，不能用作活細胞內(nèi)的化學治療用的化學藥劑。