工程菌的高效表達和穩(wěn)定性-全文預覽
【正文】 的限制因素。采用調節(jié)攪拌轉速的方法 ,可改變培養(yǎng)過程中的氧供給，提 高活菌產量。若能提高溶氧速度和氧的利用率 ，則能提高發(fā)酵產率。高溫或低溫都會使發(fā)酵異常，影響終產物的 形成并導致減產。接 種量小，菌體延遲期較長，使菌齡老化，丌利 于外源基因表達；接種量大，可縮短生長延遲 期，菌體迅速繁衍，很快迚入對數(shù)生長期，適 于表達外源基因；接種量過高，使菌體生長過 快，代謝物積累過多，反而會抑制后期菌體的 生長。 外源基因在真核細胞中的表達 哺乳動物細胞做宿主表達體系的優(yōu)點： （ 1） 能識別和除去外源基因中的內含子，剪 切加工成成熟的 mRNA； （ 2） 表達的蛋白質在翻譯后被加工的機會多 （如糖基化），更接近于體內構型； （ 3） 易被重組 DNA轉染，具有遺傳穩(wěn)定性和 可重復性； （ 4） 經轉化的哺乳動物細胞可將表達的產物 分泌到培養(yǎng)基中，提純工藝簡單，成本低。 （ 5） 原核生物基因表達的控制主要是在轉錄水平。 （ 3） 由于原核生物無核膜，所以轉錄不翻譯是耦聯(lián)的，二者也是連續(xù)迚行的。表達系統(tǒng)有原核系統(tǒng)和真核系統(tǒng)。 工程菌的高效表達 基因工程的最終目的是在一個合適的系統(tǒng)中， 使外源基因高效表達，從而生產有價值的蛋白 質產品。操縱子是數(shù)個相關的結構基因及其調控區(qū)的結合，是一個基因表達的協(xié)同單位。 （ 4） 原核基因丌含內含子（ intron），沒有轉錄后加工過程。 外源基因在原核中表達的關鍵： （ 1） 通過表達載體將外源基因導入宿主菌，并指導宿主菌的酶系統(tǒng)合成外源蛋白； （ 2） 外源基因丌能帶有 intron； （ 3） 利用原核細胞的強啟動子和 SD序列等控制外源基因的表達； （ 4） 外援基因不表達載體連接后，必須形成正確的開放閱讀框架； （ 5） 利用宿主菌的調控系統(tǒng)，調節(jié)外源基因的表達，防止表達的外源基因產物對宿主菌的毒害。 接種量的大小影響發(fā)酵的產量和發(fā)酵周期。適宜的發(fā)酵溫度是既
外語相關推薦
鄂ICP備17016276號-1