工程菌的高效表達和穩(wěn)定性(文件)
【正文】 （ t），微生物細胞數(shù)目的增長速率（ dN/dt）正比于已經(jīng)存在的總細胞數(shù)目（ N），則得：dN/dt=μN。 如果不含重組質(zhì)粒的宿主細胞不比含有重組質(zhì)粒的工程菌生長快，則重組質(zhì)粒的丟失也不會導(dǎo)致非常嚴重的后果；調(diào)整這兩種菌的比生長速率可以提高重組質(zhì)粒的穩(wěn)定性。 1）培養(yǎng)基的組成 培養(yǎng)基對克隆菌穩(wěn)定性的影響 培養(yǎng)基 克隆菌 F2025 不穩(wěn)定型 PBB W3110trpAE1trpR tnaA 7% 結(jié)構(gòu)性 MM (RSF 2124trp) 99% 結(jié)構(gòu)性 PBB W3110 trpAE1 trpRam27 12% 分配性 MM (pSC101trp) 48% 分配性 2）培養(yǎng)溫度 對于溫度敏感性質(zhì)粒，為了控制在生長前期其外源基因丌表達，一般采用二階段溫度培養(yǎng)系統(tǒng)，即在菌種生長階段，采用較低的培養(yǎng)溫度，當(dāng)菌體生長至適宜濃度和生長時期時，提高溫度迚行誘導(dǎo)，使外源基因表達。 可采用 兩階段培養(yǎng)法 ，即在發(fā)酵前期控制外源基因不過量表達，使重組質(zhì)粒穩(wěn)定地遺傳；到后期通過提高質(zhì)粒的拷貝數(shù)或轉(zhuǎn)錄、翻譯效率使外源基因高效表達。 改造、構(gòu)建能穩(wěn)定表達的質(zhì)粒載體是構(gòu)建工程菌的重要一環(huán)。 結(jié)構(gòu)不穩(wěn)定：指外源基因從質(zhì)粒上丟失或堿基重排、缺失所致工程菌性能的改變 導(dǎo)致質(zhì)粒不穩(wěn)定的 常見的三個因素： ； 。在對數(shù)生長期，細胞快速繁殖，這時菌體 數(shù)目倍增，對營養(yǎng)和氧需求量急增，營養(yǎng)和氧 成了菌群旺盛代謝
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