【正文】 培養(yǎng)基滅菌時(shí)間不能過(guò)長(zhǎng)，否則容易引起培養(yǎng)基中營(yíng)養(yǎng)成分的損失，并且瓊脂也會(huì) 隨 滅菌時(shí)間的延長(zhǎng)，凝固能力下降， 甚至不能凝固。常用滅菌方法是用高壓蒸汽滅菌法進(jìn)行滅菌，將培養(yǎng)基置于高壓滅菌鍋中，從達(dá)到要求溫度的時(shí)刻算起，在 （ 121。 植物組培苗的工廠化生產(chǎn)在我國(guó)發(fā)展速度很快，組織培養(yǎng)技術(shù)日趨完善，但在組織培養(yǎng)中通常會(huì)出現(xiàn)不同程度的污染， 因此 預(yù)防和控制污染是植物組織培養(yǎng)苗工廠化生產(chǎn)中重要的技術(shù)環(huán)節(jié) 。 其 繁殖方法通常采用分株繁殖、扦插繁殖和組織培養(yǎng)繁殖。 15 外文資料翻譯 13 附 錄 9 檢查培養(yǎng)容器是否存在問(wèn)題 8 污染原因判斷及污染苗搶救 8 內(nèi)源性污染 5 第 4 章 紅掌誘導(dǎo)與繼代培養(yǎng)過(guò)程中的污染 2 第 2 章 外植體材料的消毒與滅菌 關(guān)鍵詞： 紅掌 ， 組織培養(yǎng) ， 滅菌 ， 污染 ， 防治 II ANDRAEANUM DURING TISSUE CULTURE ANALYSIS OF THE CAUSES OF POLLUTION AND RELATED COUNTERMEASURES ABSTRACT Anthurium, also called Andrew Flower, lines such as flamingo, a Fire Araceae. Its bright colors, tall and straight stem, green leaftype appearance, are wellknown in today39。紅掌的繁殖方法通常采用分株繁殖、扦插繁殖和組織培養(yǎng)繁殖。其花色艷麗，花莖挺拔，葉型翠綠美觀，是當(dāng)今世界著名的切花和盆栽花卉之一，市場(chǎng)潛力大，具有極高的觀賞價(jià)值和經(jīng)濟(jì)價(jià)值。本文從滅菌方法、內(nèi)源性污染、繼代培養(yǎng)中污染防治等方面，進(jìn)行了紅掌組培快繁過(guò)程中污染原因的分析及對(duì)策的探討。 5 器皿、工具的滅菌 5 布質(zhì)制品的滅菌 8 預(yù)防方法和措施 10 結(jié) 論 11 謝 辭 12 參考文獻(xiàn) 其花色艷麗，花莖挺拔，葉型翠綠美觀，是當(dāng)今世界著名的切花和盆栽花卉之一，市場(chǎng)潛力大，具有極高的觀賞價(jià)值和經(jīng)濟(jì)價(jià)值。它是影響植物組織培養(yǎng)的一個(gè)重要因素，它通常會(huì)導(dǎo)致培養(yǎng)失敗造成很大的損失。 2 第 1 章 培養(yǎng)基的滅菌 一般 培養(yǎng) 基的滅菌 培養(yǎng)基是在 有菌的環(huán)境中配制的，在該過(guò)程中會(huì)使培養(yǎng)基帶有各種雜菌，因此，每次培養(yǎng)基配制完畢和分裝后應(yīng)盡快滅菌，否則培養(yǎng)基中就會(huì)滋生各 種雜菌，改變培養(yǎng)基的營(yíng)養(yǎng)成分和 pH值，影響培養(yǎng)效果。由于容器的體積不同，瓶壁的厚度不同，所需滅菌時(shí)間也不同 [1]（表 11），對(duì)經(jīng)過(guò)高壓滅菌后不會(huì)變質(zhì)的物品，如無(wú)菌水、培養(yǎng)皿、器械等，可延長(zhǎng)滅菌時(shí)間和增加壓力。 C下滅菌所 必須的最少時(shí)間（ min） 2050 15 75150 20 250500 25 1000 30 1500 35 2020 40 當(dāng)滅菌鍋里的熱溶液冷卻時(shí)，必須十分小心，如果壓力下降過(guò)急，超過(guò)了溫度下降的速率，就會(huì)使液體滾沸，從培養(yǎng)容器之中溢出。 如果是制備固態(tài)培養(yǎng)基，方法是先將沒有不耐熱物質(zhì)而包含其他化合物的培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)瓶中進(jìn)行高壓蒸汽滅菌，滅菌后置于超凈工作臺(tái)上冷卻。 對(duì)污染嚴(yán)重的外植體，可以在培養(yǎng)基中加入殺菌劑。先用 75%的酒精棉花擦拭外植體材料再使用消毒藥劑常能取得較好的消毒效果 [3]。這一步在無(wú)菌操作中有要反復(fù)進(jìn)行。接種前工作臺(tái)面要用新潔爾滅或 75%酒精擦洗 ,使用超凈工作臺(tái)對(duì)接種環(huán)境污染的控制更有成效。 無(wú)菌操作和無(wú)菌操作技術(shù) 植物組織培養(yǎng)是一種無(wú)菌技術(shù)，因此不僅要求整個(gè)操作過(guò)程，一切用 6 具、材料、培養(yǎng)基、培養(yǎng)室、工作人員的衣物都要無(wú)菌，而且要求工作人員在操作過(guò)程中要遵守?zé)o菌操作的規(guī)程，如少有疏忽，都會(huì)造成無(wú)法挽回的后果，使工作前功盡棄。 操作人員操作動(dòng)作要熟練、動(dòng)作快、規(guī)范，這樣可以縮短操作時(shí)間，減少污染。 操作前要用 70% 的酒精擦洗工作人員的手，操作中要經(jīng)常用酒精擦洗手。蓋瓶蓋前應(yīng)將瓶口在火焰上燒一下，再將蓋子也在火焰上燒一下，然后蓋上。經(jīng)處理過(guò)的苗繼代培養(yǎng)時(shí)，不再重復(fù)出現(xiàn)細(xì)菌污染現(xiàn)象，且苗分化能力強(qiáng)，生根培養(yǎng)時(shí)，根系發(fā)達(dá)，移栽成活率高 [7]。這大多是細(xì)菌性污染，主要是由于使用了未消毒好的工具及操作者呼吸時(shí)排出的細(xì)菌所引起的，或是操作人員的手接觸了材料或器皿邊緣所致；有時(shí)培養(yǎng)基上還會(huì)出現(xiàn)黃、白、黑等不同顏色的霉菌，這是真菌性污染，主要是由于接種室空氣污染 造成的 [9] 內(nèi)源性污染 在紅掌組織培養(yǎng)中，由于材料內(nèi)部的內(nèi)生菌不能被一般的表面消毒方法所清除，隨著材料進(jìn)入培養(yǎng)過(guò)程，引起的污染稱為內(nèi)生性污染或內(nèi)源性污染。而在外植體培養(yǎng)后 3～ 5 天內(nèi)并未發(fā)現(xiàn)細(xì)菌污染，以后則不 段 出現(xiàn)明顯的或不明顯的細(xì)菌菌落，就可能是由內(nèi) 生細(xì)菌引起的污染[10]。 污染原因判斷及污染苗搶救 若污染菌類是零星分散在培養(yǎng)基中，則可確定是人為引起的污染，比 如培養(yǎng)基滅菌不徹底；超凈工作臺(tái)長(zhǎng)時(shí)間不換濾網(wǎng)，致使凈化能力降低；接種用具滅菌不徹底；操作不正確，動(dòng)作生硬緩慢，開瓶時(shí)間太久，接種 9 臺(tái)擺放物品雜亂，操作中心在人體范圍之內(nèi)；接種室長(zhǎng)期不滅菌，菌類太多；若污染菌類是從材料周圍長(zhǎng)起，則可證明是植物材料帶菌引起。但若使細(xì)菌污染，由于細(xì)菌繁殖是靠芽孢，細(xì)菌不會(huì)彌散整個(gè)空間，因此只要及時(shí)發(fā)現(xiàn)，將材料上部未感菌的部分剪下轉(zhuǎn)接，材料仍可以用。通風(fēng)方法簡(jiǎn)便易行，應(yīng)多使用。 防霉：污染物品和污染培養(yǎng)基不要在培養(yǎng)室近距離開瓶洗刷。 檢查培養(yǎng)容器是否存在問(wèn)題 培養(yǎng)容器封口多用塑料蓋、膠塞、棉塞、薄膜等，塑料蓋用久了易老化，密封性差，也會(huì)造成污染。在獲得的無(wú)菌培養(yǎng)物之后，應(yīng)將其中一部分作為“原種”保存起來(lái)，分批繁殖和復(fù)檢后再大規(guī)模生產(chǎn)。 減少培養(yǎng) 基中的有機(jī)成分 培養(yǎng)基中有機(jī)成分的存在是污染產(chǎn)生的重要原因 ,去除有機(jī)物是減少污染的一條途徑。 11 結(jié) 論 污染 問(wèn)題，是 紅掌 組織培養(yǎng)過(guò)程 中 難以杜絕的現(xiàn)象。而且對(duì)于菌種的鑒定有很大的困難，因?yàn)橐话阌嘘P(guān)植物或是植物病原菌，其背景資料較少，對(duì)于鑒定而言，便較 棘手。當(dāng)然，在植物組織培養(yǎng)中，控制污染的方法是可靈活多變的，只要能減少污染，不會(huì)發(fā)生培養(yǎng)物的遺傳變異，實(shí)現(xiàn)工廠化快繁，降低成本，能在市場(chǎng)競(jìng)爭(zhēng)中占有一席之 地即可。 在這期間盡管老師很忙但它卻仍然抽出時(shí)間為我修改論文，使我能夠順利的將本文完成。 老師始終為人師表，不厭其煩，令我感到無(wú)比欽佩。這些方法和藥劑要根據(jù)工作中的不同材料不同目的適當(dāng)選用濕熱滅菌（培養(yǎng)基）培養(yǎng)基在制備后的 24h 內(nèi)完成滅菌工序。注意完全排除鍋內(nèi)空氣，使鍋內(nèi)全部是水蒸氣，滅菌才能徹底。對(duì)高壓滅菌后不變質(zhì)的物品，如無(wú)菌水、栽培介質(zhì)、接種用具，可以延長(zhǎng) 滅菌時(shí)間或提高壓力。高壓滅菌前后的培養(yǎng)基，其 pH 值下降 ～ 單位。環(huán)境 pH 值的變化大于 單位就 有可能產(chǎn)生明顯的生理影響。培養(yǎng)基值小于 ，其水解量更多，培養(yǎng)基中添加 %活性炭時(shí)，高壓下蔗糖水解大大增強(qiáng)，添加 1%活性炭，蔗糖水解率可達(dá) 5%。 干熱滅菌（玻璃器皿及耐熱用具）干熱滅菌是利用烘箱加熱到 160～180。包扎可用耐高溫的塑料。 過(guò)濾滅菌（不耐熱的物質(zhì)）一些生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑，如赤霉素、玉米素、脫落酸和某些維生素是不耐熱的，不能用高壓滅菌處理，通常采用過(guò)濾滅菌方法。紫外線滅菌是利用輻射因子滅菌，細(xì)菌吸收紫外線后，蛋白質(zhì)和核酸發(fā)生結(jié)構(gòu)變化，引起細(xì)菌的染色體變異，造成死亡。常用熏蒸劑是甲醛，熏蒸時(shí)，房間關(guān)閉緊密，按5～ 8ml/m3 用量，將甲醛置于廣口容器中，加 5 g/m3 高錳酸鉀氧化揮發(fā)。一般說(shuō)來(lái)，溫度越高，作用時(shí)間越長(zhǎng)，殺菌效果越 好。如桌面、墻面、雙手、植物材料表面等，可用 70%的酒精反復(fù)涂擦滅菌， l%～2%的來(lái)蘇兒溶液以及 %～ 1%的新潔爾滅也可以。 inhibition effect Plant tissue culture, not only in plant breeding, rapid propagation of seedlings and the production of useful secondary metabolites, such as the use of a wide range of plant geic engineering is and Plant Mole cular Biology, one of the important foundation for the study [1]. Pollution, browning, glass and tissue culture are the main problems, including pollution of the most mon [2]. Therefore take effective prevention and control measures to reduce the chance of contamination occurred, tissue culture is an important guarantee for success. Chitosan (chitosan) is the chitin in strong alkaline conditions from B After the formation of acyl an important derivative is determined by a number of Nacetyl glucosamine through β(14) glycosidic bond linking the nature of 19 it more lively. Has natural antibacterial properties of chitosan, and a broad spectrum antimicrobial, in recent years, chitosan in various fields such as agriculture， medicine [3], manufacture [4], food [5], etc. The use of great importance. Tissue culture of the chitosan in the application of inhibition has not been reported. This experiment to be from the contaminated medium subculture andraeanum extraction, purification and identification of bacteria contamination, with different molecular weight chitosan and different concentrations of their inhibition, and explore the best inhibitory effect of chitosan molecular weight and the best inhibitory concentration, in order to explore the