醫(yī)學(xué)超級全核醫(yī)學(xué)第六章-全文預(yù)覽
【正文】 放化純度 —— 具有免疫活性的標(biāo)記抗原占總放射性的百分?jǐn)?shù)。 28 定量要準(zhǔn)確 ： ?整個 RIA分析系統(tǒng)的定量基礎(chǔ)就是標(biāo)準(zhǔn)抗原的量，因此標(biāo)準(zhǔn)抗原的定量一定要準(zhǔn)確，即與國家規(guī)定的標(biāo)準(zhǔn)品相比有良好的可比性。 ?一般每一個 RIA試劑盒里都有濃度由小到大的多瓶標(biāo)準(zhǔn)抗原。 5. 樣品管 （ Bx） ： 用同劑量的樣品代替標(biāo)準(zhǔn)管中的標(biāo)準(zhǔn)抗原 ，在相同條件下反應(yīng)和分離 ， 同樣取沉淀測得其放射性 ， 就可以在繪制的標(biāo)準(zhǔn)曲線上找到樣品的濃度 。 23 3. 總放射性管 （ T） ： 反應(yīng)后不分離就直接測得的放射性就是總放射性 。 20 Ag 25 50 100 200 400 800 *Ag Ab 分離 B、 F B1% B2% B3% B4% B5% B6% 1 2 3 4 5 6 B% ？ 21 B% F% B/F Calibration Curve 60 22 ? 在實際的操作中 ， 一般要設(shè)立： 1. 最大結(jié)合管 （ Bo） ： 標(biāo)準(zhǔn)抗原的量為 0， 只有標(biāo)記抗原和特異性抗體時 ， 標(biāo)記抗原與抗體充分反應(yīng)后分離 B和 F，所測得的 B的放射性為 Bo。劑量反應(yīng)曲線是用一系列標(biāo)準(zhǔn)抗原反應(yīng)而繪制出來的，所以又叫標(biāo)準(zhǔn)曲線。 Yalow建立了本方法， Yalow為此在 1977年獲得諾貝爾醫(yī)學(xué)與生理學(xué)獎 5 體外分析技術(shù)建立的基礎(chǔ) : ?以配體和結(jié)合體的特異性結(jié)合反應(yīng)為共同的生物學(xué)基礎(chǔ) ?以結(jié)合反應(yīng)動力學(xué)規(guī)律作為共同的方法學(xué)基礎(chǔ) ?以放射性等的測量技術(shù)作為共同的定量手段 6 生物學(xué)基礎(chǔ)：特異性結(jié)合反應(yīng) ? 配體 結(jié)合體 抗原 抗體的免疫結(jié)合反應(yīng)； 配基 受體的結(jié)合反應(yīng)； 底物 催化酶之間的酶促反應(yīng)； 激素 激素結(jié)合球蛋白的結(jié)合反應(yīng) 7 方法學(xué)基礎(chǔ)：結(jié)合反應(yīng)動力學(xué)規(guī)律 ?遵守可逆反應(yīng)的質(zhì)量作用定律： k1, v1 [L]+[R] [RL] k2, v2 8 定量手段 (標(biāo)記配體作為示蹤劑 ) ?放射性測量技術(shù) ?酶定量技術(shù) ?化學(xué)發(fā)光定量技術(shù) ?熒光定量技術(shù) 9 體外分析技術(shù) 體外放射分析 體外非放射分析 放射性競爭結(jié)合分析 放射性非競爭結(jié)合分析 放射免疫分析 (radioimmunoassay, RIA) 免疫放射分析 酶免疫分析 化學(xué)發(fā)光免疫分析 熒光免疫分析 (immunoradiometric assay, IRMA) (EIA) (CLIA) (FIA) 分類 : 10 放射免疫分析 radioimmunoassay, RIA 11 ?放射免疫分析法是 Yalow和 Berson于 1959年在研究胰島素的時候創(chuàng)立的一種體外放射分析技術(shù)。 ?測定對象是患者血清或其他體液樣品內(nèi)的激素、其它生物活性物質(zhì)和藥物濃度等。 3 ?放射分析方法或其派生的相關(guān)技術(shù) ?在體外進行機體內(nèi)物質(zhì)種類和含量的分析測定。 ?1959年由美國 Berson amp。 Ag和 *Ag Ab間呈負(fù)相關(guān)函數(shù)關(guān)系 13 基本原理 AgAb + Ag *Ag Ab Ag + + *AgAb + *Ag (B) (F) ? *Ag與 Ag 免疫活性相同 ? *Ag＋ Ag Ab Ag= * Ag , AgAb=*AgAb Ag *Ag , *AgAb (B) *Ag(F) Ag *Ag , *AgAb (B) *Ag (F) 14 Ag *Ag Ab *AgAb AgAb *Ag + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + Ag 15 （二）劑量反應(yīng)曲線 ： 標(biāo)準(zhǔn)曲線 ?標(biāo)記物與被測物之間的函數(shù)關(guān)系可以用劑量反應(yīng)曲線來表示。 17 Ag 25 50 100 200 400 800 *Ag Ab 分離 B、 F B%=B/(B+F) F%=F/(B+F) R=B/F B1% B2% B3% B4% B5% B6% 1 2 3 4 5 6 濃度 18 B% 標(biāo) 準(zhǔn) 曲 線 19 未知樣品的測量 ?在同等條件下，用待測抗原與一定量的標(biāo)記抗原與限量特異性抗體發(fā)生反應(yīng)，并用同樣的方法分離待測抗原的 B和 F， 測量其放射性，計算出 B/F， 在劑量反應(yīng)曲線上就可以查出對應(yīng)的抗原濃度。 NSB管是用蒸餾水代替特異性抗體 ， 在相同條件下反應(yīng)后測得的放射性 。 一般在反應(yīng)后分離出沉淀 ， 測定沉淀的放射性作為 B。 25 標(biāo)準(zhǔn)曲線 左：橫座標(biāo)為等份刻度；右：橫座標(biāo)為對數(shù)刻度 26 （一）標(biāo)準(zhǔn)抗原 ?是廠家給出已知劑
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