【正文】 增強機體對腫瘤的免疫功能。如黑色素瘤相關(guān)抗原 MAGE、酪氨酸酶、癌基因融合基因產(chǎn)物 P210bclabl和病毒基因產(chǎn)物 HPVE E7及癌胚抗原 CEA等，這些腫瘤特異性抗原編碼基因可用于制備腫瘤DNA瘤苗。 96 ? （ 1）、 MHC抗原 ? MHC抗原與免疫識別和免疫應(yīng)答有關(guān)，只有 T細(xì)胞識別了抗原呈遞細(xì)胞上的 MHC抗原后，才能識別外來抗原并產(chǎn)生免疫應(yīng)答。 Amini等首先將表達(dá)src反義基因的質(zhì)粒導(dǎo)入 vsrc過度表達(dá)的轉(zhuǎn)化細(xì)胞，結(jié)果該細(xì)胞的致瘤性下降。 93 ? 在超過 50%的腫瘤中都發(fā)現(xiàn)有 p53基因的突變。 腫瘤基因治療 ? 腫瘤基因治療是通過將外源基因?qū)肽康募?xì)胞并有效表達(dá)從而達(dá)到治療腫瘤的目的?；蛑委煘檠巡?B的治療開辟了一條新的途徑。兩患兒經(jīng)治療后，免疫功能日趨健全，走出了隔離帳，過上了正常人生活，并進(jìn)入普通小學(xué)上學(xué)。 ? ADA缺乏癥被選為第一個基因治療試驗有以下幾點原因： 這種疾病是由單個基因的缺陷導(dǎo)致的，基因治療成功的可能性高；基因調(diào)控很簡單， 總是開啟 的狀態(tài)，不像許多其他基因，調(diào)控很復(fù)雜 ； ADA的數(shù)量無需精確調(diào)控。 基因治療的策略 ? （ CFTR for CF） ? (insulin) ? （ TK gene） ? （antisense） ? （ ribozyme） 實施基因治療的必要步驟如下 ： ? 找到致病基因 ? 克隆得到大量與致病基因相 應(yīng)的正?；? ? 采取適當(dāng)方法把正?；蚍呕? 到病人身體內(nèi)去 ? 進(jìn)入體內(nèi)的正常基因應(yīng)正常表達(dá) 腺苷脫氨酶（ ADA）缺乏癥 ? ADA缺乏癥是一種罕見的遺傳病，患者沒有正常的 ADA基因，他們的缺陷基因不能產(chǎn)生功能性 ADA酶。 5歲前可能因呼吸阻礙致死。 如：血友?。a充凝血因子 Ⅷ 。 76 ? (2)體細(xì)胞基因治療：體細(xì)胞基因治療(somatic cell gene therapy)是指將正?；蜣D(zhuǎn)移到體細(xì)胞，或整合到染色體上，或獨立于染色體外，使之表達(dá)基因產(chǎn)物，以達(dá)到治療目的。 ? 在其他研究中，載體被用于將目標(biāo)基因運送到患者體內(nèi)的細(xì)胞中。病毒進(jìn)入細(xì)胞后，目的基因就成為宿主細(xì)胞 DNA的一部分。 68 69 基因治療的 ex vivo 途徑 家族性高膽固醇血癥是由于肝細(xì)胞表面低密度脂蛋白（ LDL）受體缺乏所致。 這樣形成的復(fù)合物可被帶有特異性受體的靶細(xì)胞吞飲 ， 從而將外源 DNA導(dǎo)入靶細(xì)胞 。 基本原理 :利用陽離子脂質(zhì)體單體與 DNA混合后，可以自動形成包埋外源 DNA的脂質(zhì)體，然后與細(xì)胞一起孵育，即可通過細(xì)胞內(nèi)吞作用將外源 DNA（即目的基因）轉(zhuǎn)移至細(xì)胞內(nèi)，并進(jìn)行表達(dá)。 ? 該方法可使目的基因在皮膚、肝、胰、胃及乳腺等細(xì)胞中表達(dá)。 動物實驗表明：接受注射外源 DNA的小鼠能夠按其基因編碼合成相應(yīng)的蛋白質(zhì)，并能維持?jǐn)?shù)月之久。 為了增加病毒載體插入外源 DNA的容量，除了可以刪除病毒的非必需基因外，還可以進(jìn)一步刪去部分或全部必需基因，這些必需基因的功能由輔助病毒或包裝細(xì)胞系反式提供。首先，許多野生型病毒通過在細(xì)胞中產(chǎn)毒性復(fù)制而導(dǎo)致細(xì)胞裂解死亡；或帶有病毒癌基因而使細(xì)胞發(fā)生轉(zhuǎn)化。一般來說，病毒包裝容量不超過自身基因組大小的 105～ 110％。病毒基因組可分為編碼區(qū)和非編碼區(qū)。但是由于病毒的多樣性及與機體復(fù)雜的依存關(guān)系，人們至今對許多病毒的生活周期、分子生物學(xué)、與疾病發(fā)生及發(fā)展的關(guān)系等的認(rèn)識還很不全面 ,從而限制了許多病毒發(fā)展成為具有實用性的載體。 41 ? ? 用于基因治療的病毒載體應(yīng)具備以下基本條件： ? 1).攜帶外源基因并能包裝成病毒顆粒； 2).介導(dǎo)外源基因的轉(zhuǎn)移和表達(dá)； 3).對機體不致病。 38 ? 根據(jù)已有的實驗室和臨床研究，基因治療的療效預(yù)計將如何？即基因治療的有效性在進(jìn)行人體試驗前要有足夠的動物試驗證據(jù)。如向腫瘤細(xì)胞導(dǎo)入單純皰疹病毒胸苷激酶基因，然后給予病人無毒性核苷類似物 GCV（甘昔洛韋，ganciclovir）的藥物前體，由于只有含單純皰疹病毒胸苷激酶基因的細(xì)胞才能將 GCV轉(zhuǎn)化成有毒的藥物，因而腫瘤細(xì)胞被殺死，而對正常細(xì)胞影響不大。如可將白細(xì)胞介素 2 （ IL2）導(dǎo)入腫瘤病人體內(nèi)，提高病人（ IL2）的水平，激活體內(nèi)免疫系統(tǒng)的活性。 29 ? 隨著人類后基因組計劃的進(jìn)一步開展，占類基因組 90%以上的非編碼序列越來越引起科學(xué)家的關(guān)注，據(jù)計算推測，人類基因組可能存在 1000多個 miRNA基因， ? 單個 miRNA可調(diào)控 200多個靶基因，約1/3的蛋白編碼基因受 miRNA調(diào)控。 28 ? miRNA通常來源于一個大小約為 1000bp的 長鏈 RNA初始轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物 (Pri一 miRNA)， Pri一miRNA分子在細(xì)胞核中經(jīng)過雙鏈 RNA特異性核酸酶 Rnaselll一 Drosha的作用形成 70100nt的具有莖環(huán)結(jié)構(gòu)的 RNA分子 (pre一 miRNA)。 24 ? 倍增放大作用： siRNA一方面可引導(dǎo)RISC特異性切割靶 mRNA；另一方面， siRNA還可作為引物與靶 mRNA結(jié)合，在 RNA依賴性 RNA多聚酶（ RNAdependent RNA polymerase， RdRp）的作用下合成新的 dsRNA，再次經(jīng) Dicer酶切割，形成新的 siRNA，并作用于靶mRNA。雙鏈 RNA導(dǎo)入細(xì)胞后引起與該段RNA同源的 mRNA發(fā)生特異性降解，進(jìn)而使相應(yīng)基因抑制的轉(zhuǎn)錄后基因沉默現(xiàn)象稱 RNA干擾。但由于糾錯效率低的原因，實踐中有相當(dāng)?shù)碾y度。 ? 賽百諾公司負(fù)責(zé)人說，這種新藥是擁有自主知識產(chǎn)權(quán)的廣譜腫瘤基因治療藥品，可望明年一月正式上市。“基因治療”研究熱從此波及全世界，起而效顰，為保障人類健康展現(xiàn)了美好的前景。 and Anderson 1992 大量癌癥臨床試驗 美國等 1993 中國制定第一部基因治療質(zhì)控要點 中國 1997至今 重組病毒的產(chǎn)業(yè)化及其技術(shù)改進(jìn) 美國 5 基因治療的概念 ? 經(jīng)典： 針對遺傳病某一基因缺陷，將外源基因?qū)塍w內(nèi)予以矯正； ? 現(xiàn)在： 凡是在基因水平上進(jìn)行操作而達(dá)到治療疾病的所有療法 6 ? 上世紀(jì)九十年代初，一位因 ADA(腺苷酸脫氨酶 )基因缺陷導(dǎo)致嚴(yán)重免疫缺損的四歲女孩，由美國國立衛(wèi)生研究院用 ADA基因治療，取得療效。這標(biāo)志著我國在基因治療藥物研制和產(chǎn)業(yè)化方面已達(dá)世界領(lǐng)先水平，在國際競爭中搶占了先機。 基因治療的策略 17 ? 基因修復(fù) ? 基因修復(fù)是指將致病基因的突變堿基序列定點糾正，可用來治療點突變導(dǎo)致的疾病。 20 ? Andrew Z. Fire、 Craig C. Mello 21 ? 1998年 Andrew Z. Fire、 Craig C. Mello等發(fā)現(xiàn)將很少量的雙鏈 RNA注入秀麗線蟲體內(nèi)，即可高效、特異地阻斷 /抑制與雙鏈 RNA同源的基因表達(dá)，其阻斷 /抑制率比純化后的反義 RNA技術(shù)高若干個數(shù)量級。隨后正義鏈被降解，而與 RISC結(jié)合的反義鏈則按照堿基互補配對原則與靶 mRNA中的同源序列結(jié)合，并由 RISC發(fā)揮核酸內(nèi)切酶作用，在距siRNA3’斷 11或 12個堿基處切割靶 mRNA。 27 ? 2022年 Reinhart等在線蟲中發(fā)現(xiàn)了另一 種重要的具有轉(zhuǎn)錄后調(diào)節(jié)作用的miRNA:let一 7，后來發(fā)現(xiàn)了大量類似RNA， 2022年起統(tǒng)一稱為 miRNA。當(dāng)兩者沒有足夠的互補性時， miRNA則抑制 mRNA轉(zhuǎn)錄后翻譯。 31 ? 免疫調(diào)節(jié) 將抗原、抗體或細(xì)胞因子基因?qū)牖颊唧w內(nèi)，改變其免疫狀態(tài)，達(dá)到預(yù)防和治療疾病的目的。 33 ? 其他方法 增加腫瘤細(xì)胞對化療藥物的敏感性。 37 ? 根據(jù)已有的實驗室和臨床研究，基因治療對于患者及其子女和接觸者的安全性如何估計？即基因治療的安全性必須有保證。