【正文】 增強機體對腫瘤的免疫功能。如黑色素瘤相關抗原 MAGE、酪氨酸酶、癌基因融合基因產(chǎn)物 P210bclabl和病毒基因產(chǎn)物 HPVE E7及癌胚抗原 CEA等，這些腫瘤特異性抗原編碼基因可用于制備腫瘤DNA瘤苗。 96 ? （ 1）、 MHC抗原 ? MHC抗原與免疫識別和免疫應答有關，只有 T細胞識別了抗原呈遞細胞上的 MHC抗原后，才能識別外來抗原并產(chǎn)生免疫應答。 Amini等首先將表達src反義基因的質粒導入 vsrc過度表達的轉化細胞，結果該細胞的致瘤性下降。 93 ? 在超過 50%的腫瘤中都發(fā)現(xiàn)有 p53基因的突變。 腫瘤基因治療 ? 腫瘤基因治療是通過將外源基因導入目的細胞并有效表達從而達到治療腫瘤的目的?；蛑委煘檠巡?B的治療開辟了一條新的途徑。兩患兒經(jīng)治療后，免疫功能日趨健全，走出了隔離帳，過上了正常人生活，并進入普通小學上學。 ? ADA缺乏癥被選為第一個基因治療試驗有以下幾點原因： 這種疾病是由單個基因的缺陷導致的，基因治療成功的可能性高；基因調(diào)控很簡單， 總是開啟 的狀態(tài)，不像許多其他基因，調(diào)控很復雜 ； ADA的數(shù)量無需精確調(diào)控。 基因治療的策略 ? （ CFTR for CF） ? (insulin) ? （ TK gene） ? （antisense） ? （ ribozyme） 實施基因治療的必要步驟如下 ： ? 找到致病基因 ? 克隆得到大量與致病基因相 應的正?；? ? 采取適當方法把正?；蚍呕? 到病人身體內(nèi)去 ? 進入體內(nèi)的正?；驊１磉_ 腺苷脫氨酶（ ADA）缺乏癥 ? ADA缺乏癥是一種罕見的遺傳病，患者沒有正常的 ADA基因，他們的缺陷基因不能產(chǎn)生功能性 ADA酶。 5歲前可能因呼吸阻礙致死。 如：血友?。a充凝血因子 Ⅷ 。 76 ? (2)體細胞基因治療：體細胞基因治療(somatic cell gene therapy)是指將正?；蜣D移到體細胞，或整合到染色體上，或獨立于染色體外，使之表達基因產(chǎn)物，以達到治療目的。 ? 在其他研究中，載體被用于將目標基因運送到患者體內(nèi)的細胞中。病毒進入細胞后，目的基因就成為宿主細胞 DNA的一部分。 68 69 基因治療的 ex vivo 途徑 家族性高膽固醇血癥是由于肝細胞表面低密度脂蛋白（ LDL）受體缺乏所致。 這樣形成的復合物可被帶有特異性受體的靶細胞吞飲 ， 從而將外源 DNA導入靶細胞 。 基本原理 :利用陽離子脂質體單體與 DNA混合后，可以自動形成包埋外源 DNA的脂質體，然后與細胞一起孵育，即可通過細胞內(nèi)吞作用將外源 DNA（即目的基因）轉移至細胞內(nèi)，并進行表達。 ? 該方法可使目的基因在皮膚、肝、胰、胃及乳腺等細胞中表達。 動物實驗表明：接受注射外源 DNA的小鼠能夠按其基因編碼合成相應的蛋白質，并能維持數(shù)月之久。 為了增加病毒載體插入外源 DNA的容量，除了可以刪除病毒的非必需基因外，還可以進一步刪去部分或全部必需基因，這些必需基因的功能由輔助病毒或包裝細胞系反式提供。首先，許多野生型病毒通過在細胞中產(chǎn)毒性復制而導致細胞裂解死亡；或帶有病毒癌基因而使細胞發(fā)生轉化。一般來說，病毒包裝容量不超過自身基因組大小的 105～ 110％。病毒基因組可分為編碼區(qū)和非編碼區(qū)。但是由于病毒的多樣性及與機體復雜的依存關系，人們至今對許多病毒的生活周期、分子生物學、與疾病發(fā)生及發(fā)展的關系等的認識還很不全面 ,從而限制了許多病毒發(fā)展成為具有實用性的載體。 41 ? ? 用于基因治療的病毒載體應具備以下基本條件： ? 1).攜帶外源基因并能包裝成病毒顆粒； 2).介導外源基因的轉移和表達； 3).對機體不致病。 38 ? 根據(jù)已有的實驗室和臨床研究，基因治療的療效預計將如何？即基因治療的有效性在進行人體試驗前要有足夠的動物試驗證據(jù)。如向腫瘤細胞導入單純皰疹病毒胸苷激酶基因，然后給予病人無毒性核苷類似物 GCV（甘昔洛韋，ganciclovir）的藥物前體，由于只有含單純皰疹病毒胸苷激酶基因的細胞才能將 GCV轉化成有毒的藥物，因而腫瘤細胞被殺死，而對正常細胞影響不大。如可將白細胞介素 2 （ IL2）導入腫瘤病人體內(nèi)，提高病人（ IL2）的水平，激活體內(nèi)免疫系統(tǒng)的活性。 29 ? 隨著人類后基因組計劃的進一步開展，占類基因組 90%以上的非編碼序列越來越引起科學家的關注，據(jù)計算推測，人類基因組可能存在 1000多個 miRNA基因， ? 單個 miRNA可調(diào)控 200多個靶基因，約1/3的蛋白編碼基因受 miRNA調(diào)控。 28 ? miRNA通常來源于一個大小約為 1000bp的 長鏈 RNA初始轉錄產(chǎn)物 (Pri一 miRNA)， Pri一miRNA分子在細胞核中經(jīng)過雙鏈 RNA特異性核酸酶 Rnaselll一 Drosha的作用形成 70100nt的具有莖環(huán)結構的 RNA分子 (pre一 miRNA)。 24 ? 倍增放大作用： siRNA一方面可引導RISC特異性切割靶 mRNA；另一方面， siRNA還可作為引物與靶 mRNA結合，在 RNA依賴性 RNA多聚酶（ RNAdependent RNA polymerase， RdRp）的作用下合成新的 dsRNA，再次經(jīng) Dicer酶切割，形成新的 siRNA，并作用于靶mRNA。雙鏈 RNA導入細胞后引起與該段RNA同源的 mRNA發(fā)生特異性降解，進而使相應基因抑制的轉錄后基因沉默現(xiàn)象稱 RNA干擾。但由于糾錯效率低的原因，實踐中有相當?shù)碾y度。 ? 賽百諾公司負責人說，這種新藥是擁有自主知識產(chǎn)權的廣譜腫瘤基因治療藥品，可望明年一月正式上市?！盎蛑委煛毖芯繜釓拇瞬叭澜纾鸲эA，為保障人類健康展現(xiàn)了美好的前景。 and Anderson 1992 大量癌癥臨床試驗 美國等 1993 中國制定第一部基因治療質控要點 中國 1997至今 重組病毒的產(chǎn)業(yè)化及其技術改進 美國 5 基因治療的概念 ? 經(jīng)典： 針對遺傳病某一基因缺陷，將外源基因導入體內(nèi)予以矯正； ? 現(xiàn)在： 凡是在基因水平上進行操作而達到治療疾病的所有療法 6 ? 上世紀九十年代初，一位因 ADA(腺苷酸脫氨酶 )基因缺陷導致嚴重免疫缺損的四歲女孩，由美國國立衛(wèi)生研究院用 ADA基因治療，取得療效。這標志著我國在基因治療藥物研制和產(chǎn)業(yè)化方面已達世界領先水平，在國際競爭中搶占了先機。 基因治療的策略 17 ? 基因修復 ? 基因修復是指將致病基因的突變堿基序列定點糾正，可用來治療點突變導致的疾病。 20 ? Andrew Z. Fire、 Craig C. Mello 21 ? 1998年 Andrew Z. Fire、 Craig C. Mello等發(fā)現(xiàn)將很少量的雙鏈 RNA注入秀麗線蟲體內(nèi)，即可高效、特異地阻斷 /抑制與雙鏈 RNA同源的基因表達，其阻斷 /抑制率比純化后的反義 RNA技術高若干個數(shù)量級。隨后正義鏈被降解，而與 RISC結合的反義鏈則按照堿基互補配對原則與靶 mRNA中的同源序列結合，并由 RISC發(fā)揮核酸內(nèi)切酶作用，在距siRNA3’斷 11或 12個堿基處切割靶 mRNA。 27 ? 2022年 Reinhart等在線蟲中發(fā)現(xiàn)了另一 種重要的具有轉錄后調(diào)節(jié)作用的miRNA:let一 7，后來發(fā)現(xiàn)了大量類似RNA， 2022年起統(tǒng)一稱為 miRNA。當兩者沒有足夠的互補性時， miRNA則抑制 mRNA轉錄后翻譯。 31 ? 免疫調(diào)節(jié) 將抗原、抗體或細胞因子基因導入患者體內(nèi)，改變其免疫狀態(tài)，達到預防和治療疾病的目的。 33 ? 其他方法 增加腫瘤細胞對化療藥物的敏感性。 37 ? 根據(jù)已有的實驗室和臨床研究，基因治療對于患者及其子女和接觸者的安全性如何估計？即基因治療的安全性必須有保證。