【正文】 的主觀愿望 ,去定向改造某種生物的某一性狀 ,創(chuàng)造出新的生物類型。絕大多數(shù)的細菌質(zhì)粒都是閉合環(huán)狀 DNA分子，能自主復(fù)制，其上有酶切位點和抗生素的抗性基因（一個或多個），以便用于第四步的檢驗。 關(guān)于目的基因，它是一種資源，而且是一種有限的戰(zhàn)略性資源。再使用 DNA連接酶將其整合到載體的基因中 ,并使其表達。最重要的是它能夠跨越物種間的生殖隔離，將兩個風(fēng)馬牛不相及的物種上的形狀進行轉(zhuǎn)移，為我所用，因此 一次又一次給人類帶來驚喜。 基因工程又稱基因拼接技術(shù)和 DNA重組技術(shù)，是以分子遺傳學(xué)為理論基礎(chǔ)， 以分子生物學(xué)和微生物學(xué)的現(xiàn)代方法為手段， 將不同來源的基因 (DNA 分子 )，按預(yù)先設(shè)計的藍圖， 在體外構(gòu)建雜種 DNA分子， 然后導(dǎo)入活細胞， 以改變生物原有的遺傳特性、獲得新品種、 生產(chǎn)新產(chǎn)品。 四、基因工程 。 [7] ：將在第四部分詳細敘述。根據(jù)產(chǎn)生變異的原 因，它可以分為結(jié)構(gòu)變異和數(shù)量變異兩大類。 [4]而在生物多樣性的產(chǎn)生過程中，我們不得不關(guān)注 “內(nèi)共生學(xué)說 ”： “據(jù)認為，該（產(chǎn)生細胞器）的過程始于某個行為草率或敢于冒險的細胞，它不是受到了侵犯就是被別的細菌俘虜，結(jié)果雙方都感到滿意。它是由于 DNA 分子中發(fā)生堿基對的增添、缺失或改變，而引起 的基因結(jié)構(gòu)的改變，具有隨機性、低頻性、少利多害性、不定向性等特點。所以， “自前寒武紀(jì)以來，海洋和大陸生物的多樣性按指數(shù)增長。這種變異經(jīng)過漫長的積累與放大，使物種中出現(xiàn)生殖隔離，即標(biāo)志著新物種的誕生。這三個層次相互交叉并且密切聯(lián)系，下面從兩個方面論述 “基因多樣性是生物多樣性的基礎(chǔ) ”。 ”[1] 23 生命，這一奇妙的存在體充滿了神秘感，每一步深入的探索，都帶來更大的 謎團，更深的奧秘。美國國家航空和航天局的科學(xué)家杰伊 在轉(zhuǎn)基因家畜血液中得到了人免疫球蛋白 α1球蛋白、 β球蛋白、干擾素、胰蛋白酶和生長激素等 ,而且這些蛋白都具有正常的 生物活性。對于轉(zhuǎn)基因動物技術(shù)客服異種移植的反應(yīng)策略包括 [7]：轉(zhuǎn)人體補調(diào)蛋白基因；消除（或減少）異種移植物康源基因；多策略克服免疫反應(yīng)；克服急性血管排斥 和誘導(dǎo)耐受。例如，在對各種動物的抗病基因轉(zhuǎn)移研究中 ,以對雞的抗病效果較顯著 [6]。例如；轉(zhuǎn)基因豬中 GH產(chǎn)物得到表達 ,血漿中 GH 水平持續(xù)地提高 ,生長速度比較快 ,飼料利用率提高 17%,胴體脂肪為對照組的 50%。另外，除了在小鼠中可以進行基因的定向轉(zhuǎn)移外， 其他轉(zhuǎn)基因動物均是隨機整合和表達的結(jié)果。 轉(zhuǎn)基因動物技術(shù)的現(xiàn)狀 同基因重組微生物和轉(zhuǎn)基因植 物相比，轉(zhuǎn)基因動物的技術(shù)效率很低，所需要的費用高，消耗的人力多，產(chǎn)生有用結(jié)果耗時長。異體克隆胚胎由于基因印記可能導(dǎo)致核質(zhì)相互作用的不協(xié)調(diào) , 致使目前制備克隆動物的效率都很低。 （ 3） .體細胞基因打靶技術(shù) 體細胞便于采集、數(shù)量巨大 , 并可以在體外增殖培養(yǎng) , 通過對體細胞進行基因打靶 , 使外源性基因定點的整合到體細胞的基因組中 , 再結(jié)合體細胞克隆來生產(chǎn)轉(zhuǎn)基因動物。 近年發(fā)展的轉(zhuǎn)基因技術(shù) （ 1） .性腺轉(zhuǎn)基因方法 對應(yīng)于向雄性動物的睪丸內(nèi)注射外源基因 ,Yang et al. 直接對小鼠的卵巢注射綠色熒光蛋白基因 , 檢測后代的陽性率達 54%, 并且發(fā)現(xiàn)獲得的 6 代以內(nèi)的轉(zhuǎn)基因小鼠都具有較好的遺傳穩(wěn)定性。 （ 4） .人工酵母染色法 人工酵母染色法 (YAC)是一種新型載體。 這種方法的缺點是效率低、位置效應(yīng) (外源基因插入位點隨機性 )造成的表達結(jié)果的不確定性、動物利用率低等，反芻動物還存在著繁殖周期長，有較強的時間限制、需要大量的供體和受體動物等特點。 轉(zhuǎn)基因動物技術(shù) 轉(zhuǎn)基因動物是指用實驗導(dǎo)入的方法將外源基因在染色體基因內(nèi)穩(wěn)定整合并能穩(wěn)定表達的一類動物。被轉(zhuǎn)移的基因可以來自同種或異種動物，也可以來自植物或微生物，打破了物種之間的界線。 Gene target practice technology。 電泳條帶如下圖 篇三：基因工程論文 西安工程大學(xué) 生物工藝學(xué)課程論文 題 目：轉(zhuǎn)基因動物的技術(shù)應(yīng)用姓 名： 學(xué)院 ： 班 級： 學(xué) 號：王 超環(huán)境與化學(xué)工程學(xué)院 10級生物工程 101班41004020209 二〇一一年十一月 轉(zhuǎn)基因動物的技術(shù)應(yīng)用 王 超 (西安工程大學(xué) ,環(huán)境與化學(xué)工程學(xué)院 ,10級生物工程 101班 ,郵編 :710600) 摘要：本文主要對動物轉(zhuǎn)基因技術(shù)應(yīng)用做了具體的分析和概述，使我們能夠更加深層次地認識和理解轉(zhuǎn)基因技術(shù)， 14 并且用舉例的方法詳細的、綜合的介紹了傳統(tǒng)的轉(zhuǎn)基因動物方法以及近些年逐步發(fā)展起來的用來提高轉(zhuǎn)基因效率的技術(shù)，如：非定點整合轉(zhuǎn)基因方法、基因打靶技術(shù)等。 A280/A260為 ，說明提取到的 DNA含有雜質(zhì)。將誘導(dǎo)前的樣品和誘導(dǎo)后的樣品分別離心，回收沉淀，將沉淀用緩沖液和雙蒸水溶解并在沸水浴中 10min立即放入冰浴中冷卻。用 沉淀，在離心一次，棄去上清液，再用 冰冷的含 20%甘油的 ，冰浴30min， 4℃ 離心棄上清，沉 淀用 100ul冰冷的含 20%甘油的 +溶解，冰浴，備用。取上層后加入等體積的異丙醇離心棄上清，用 70%的乙醇漂洗后干燥，并加入RNaseA， 37℃ 保溫 PCR基因擴增及瓊脂糖凝膠電泳 分別加入 PCR 擴增所需的試劑，稍作離心加入石蠟油，然后設(shè)定好程序進行 PCR,PCR 結(jié)束后加入 200ulTE 緩沖液， 300ul苯酚 /氯仿 /異戊醇 120200rpm離心，取上清加 10%體積的 NaAc 和 倍的冰冷無水乙醇， 20℃ 冰箱中放置30min。加異戊醇，棄上清。加 10%的 SDS和蛋白酶 k， 37%溫育 10min。 外源基因的誘導(dǎo)表達及 SDSPAGE 外源基因在原核生物中的高效表達除了有適宜的載體外，還必須有適 合的宿主細胞及誘導(dǎo)因子。限制性內(nèi)切酶都有最適的反應(yīng)溫度和緩沖液的濃度，其中溫度的要求是最嚴格的，一般是 37℃ ，但也有30℃ 條件下比 37℃ 稍好的。各種生物大分子在一定的 PH值條件下，可以解離成帶電荷的離子，在電場中會向相反的電極移動。我們用堿裂解的方法來制備質(zhì)粒 DNA. PCR擴增 9 PCR擴增是由變性、退火、和延伸 3 個步驟反復(fù)循環(huán)實現(xiàn)的。目前，以基因工程學(xué)位基礎(chǔ)的基因克隆重組技術(shù)已成為現(xiàn)代生物技術(shù)的核心。 關(guān)鍵詞： PCR技術(shù) 重組子 DNA凝膠電泳 1 前言 擬南芥（ Arabidopsis thaliana ）是一種十字花科（ Cruciferae）的小型野草，早在 16世紀(jì)被發(fā)現(xiàn)， 19世紀(jì)末， 7 科學(xué)家就注意到了它的研究價值。而轉(zhuǎn)基因生物遠遠超出了近緣的范圍，人們對可能出現(xiàn)的新組合、新性狀會不會影響人類健康和環(huán)境，還缺乏知識和經(jīng)驗，按目前的科學(xué)水平還不能完全精確地預(yù)測。 但是，任何科學(xué)技術(shù)都是一把 “雙刃劍 ”，在給人類帶來利益的同時，也會給人類帶來一定的災(zāi)難。而且在人類疾病的診斷、治療等方面具有革命性的推動作 5 用，對人口 素質(zhì)、環(huán)境保護等作出具大貢獻。它能釘死蚊蟲與害蟲，而對人畜無害，不污染環(huán)境。 三、基因工程應(yīng)用于環(huán)保方面 工業(yè)發(fā)展以及其它人為因素造成的環(huán)境污染已遠遠超出 4 了自然界微生物的凈化能力，已成為人們十分關(guān)注的問題。 目前，應(yīng)用基因工程研制的艾滋病疫苗已完成中試，并進入臨床驗證階段；專門用于治療腫瘤的 “腫瘤基因?qū)?”也將在不久完成研制，它可有目的地尋找并殺死腫瘤，將使癌癥的治愈成為可能?；蚬こ趟幬镏饕毎蜃?、抗體、疫苗、激素和寡核甘酸藥物等。 隨著生活水平的提高，人們越來越關(guān)注口味、口感、營養(yǎng)成分、欣賞價值等品質(zhì)性狀。由于植物生理學(xué)家、遺傳學(xué)家和分子生物學(xué)家協(xié)同作戰(zhàn)，耐澇、耐鹽堿、耐旱和耐冷的轉(zhuǎn)基因作物新品種 (系 )也已獲得成功。 由于植物病毒分子生物學(xué)的發(fā)展，植物抗病基因工程也也已全面展開。基因工程研究和應(yīng)用范圍涉及農(nóng)業(yè)、工業(yè)、醫(yī)藥、能源、環(huán)保等許多領(lǐng)域。許多科學(xué)家預(yù)言，生物學(xué)將成為 21 世紀(jì)最重要的學(xué)科，基因工程及相關(guān)領(lǐng)域的產(chǎn)業(yè)將成為 21 世紀(jì)的主導(dǎo)產(chǎn)業(yè)之一?；蚬こ淘谶@些領(lǐng)域已取得了令人矚目的成就。植物對逆境的抗性一 直是植物生物學(xué)家關(guān)心的問題。將這種抗凍蛋白基因從魚基因組中分離出來，導(dǎo)入植物體可獲得轉(zhuǎn)基因植物，目前這種基因已被轉(zhuǎn)入番茄和黃瓜中。 二、基因工程應(yīng)用于醫(yī)藥方面 3 目前，以基因工程藥物為主導(dǎo)的基因工程應(yīng)用產(chǎn)業(yè)已成為全球發(fā)展最快的產(chǎn)業(yè)之一，發(fā)展前景非常廣闊。我們最為熟悉的干擾素 (IFN)就是一類利用基因工程技術(shù)研制成的多功能細胞因子，在臨床上已用于治療白血病、乙肝、丙肝、多發(fā)性硬化癥和類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎等多種疾病。此項基因?qū)W研究成果在國際治肝領(lǐng)域中，是繼干擾素等藥物之后的一項具有革命性轉(zhuǎn)變的重大醫(yī)學(xué)成果。也有人把Bt蛋白基因、球形芽孢桿菌、且表達成功。 四、前景展望 由于基因工程運用 DNA分子重組技術(shù)，能夠按照人們預(yù)先的設(shè)計創(chuàng)造出許多新的遺傳結(jié)合體，具有新奇遺傳性狀的新型產(chǎn)物，增強了人們改造動植物的主觀能動性、預(yù)見性。我國基因工程技術(shù)尚落后于發(fā)達國家，更應(yīng)當(dāng)加速發(fā)展，切不可坐失良機。轉(zhuǎn)基因生物和常規(guī)繁殖生長的品種一樣，是在原有品種的基礎(chǔ)上對其部分性狀進行修飾或增加新性狀，或消除原來的不利性狀，但常規(guī)育種是通過自然選擇，而且是近緣雜交，適者生存下來，不適者被淘汰掉。實驗過程中涉及到關(guān)于PCR， DNA 凝膠電泳，限制性酶切，重組子的構(gòu)建，以及重組子的篩選，目的基因的表達等等許多過程。 基因工程