離子交換柱層析分離純化蔗糖酶-全文預(yù)覽
【正文】 EAE— Sephadex，加入 ，輕輕攪拌，浸泡 ，用玻璃砂漏斗抽濾，并用去離子水洗至近中性，抽干后，放入小燒杯中，加 50ml mol/L HCl, 攪勻，浸泡 ，同上，用去離子水洗至近中性，（ DEAE Sepharose Fast Flow，用后務(wù)必回收）。 本實(shí)驗(yàn)在離子交換層析分離純化的過(guò)程中，對(duì)分離純化樣品采用 －二硝基水楊酸法來(lái)初步判定樣品中還原糖含量的多少，由此來(lái)確定并收集蔗糖酶純化樣品。 基質(zhì) 電荷基團(tuán) 反離子 陽(yáng)離子交換劑 電荷基團(tuán) 反離子 陰離子交換劑 電荷基團(tuán) 反離子 基質(zhì) 基質(zhì) — ＋ — ＋ — ＋ 溶液中的離子 或離子化合物 溶液中的離子 或離子化合物 可逆交換 可逆交換 ＋ — 酶活力檢測(cè) (定性 檢測(cè)） 蔗糖酶（ β D呋喃型果糖苷 果糖水解酶 EC ），是一種水解酶。這些過(guò)程都是 可逆的 。實(shí)驗(yàn)二 離子交換柱層析分離純化蔗糖酶 一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康暮鸵? 學(xué)習(xí)離子交換層析的基本原理； 學(xué)習(xí)離子交換層析分離蛋白質(zhì)的基本方法和技術(shù)； 學(xué)習(xí)蔗糖酶活性檢測(cè)的基本原理和方法。離子交換劑與水溶液中離子或離子化合物的反應(yīng)主要以 離子交換方式 進(jìn)行，或者借助離子交換劑上電荷基團(tuán)對(duì)溶液中離子或離子化合物的 吸附作用 進(jìn)行。 離子交換劑是由基質(zhì)、電荷基團(tuán)（或功能基團(tuán)）和反離子構(gòu)成。還原糖的測(cè)定有多種方法，如采用 －二硝基水楊酸法，其原理是 －二硝基水楊酸與 還原糖 共熱被還原成 棕紅色的氨基化合物 ，在一定范圍內(nèi)還原糖的量和反應(yīng)液的顏色深度成正比。 四、實(shí)驗(yàn)器材與儀器 高速冷凍離心機(jī)； 層析柱（ 20㎝ ） (1支 /組）； 恒流泵（流速 ～ 1ml/min） (10rpm)（ 1臺(tái) /組）； 梯度混合器 (100ml梯度杯 )（ 1套 /組）；
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