離子交換柱層析分離純化蔗糖酶(已修改)
2025-06-07 18:04 本頁(yè)面
【正文】 實(shí)驗(yàn)二 離子交換柱層析分離純化蔗糖酶 一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康暮鸵? 學(xué)習(xí)離子交換層析的基本原理； 學(xué)習(xí)離子交換層析分離蛋白質(zhì)的基本方法和技術(shù)； 學(xué)習(xí)蔗糖酶活性檢測(cè)的基本原理和方法。 二、實(shí)驗(yàn)基本原理 離子交換層析 離子交換層析是常用的層析方法之一。它是在以離子交換劑為固定相，液體為流動(dòng)相的系統(tǒng)中進(jìn)行的。離子交換劑與水溶液中離子或離子化合物的反應(yīng)主要以 離子交換方式 進(jìn)行，或者借助離子交換劑上電荷基團(tuán)對(duì)溶液中離子或離子化合物的 吸附作用 進(jìn)行。這些過(guò)程都是 可逆的 。在某一 pH值 的溶液中，不同的蛋白質(zhì)所帶的 電荷 存在 差異 ，因而與離子交換劑的親和力就有區(qū)別。當(dāng)洗脫液的 pH改變 或者 鹽的離子強(qiáng)度逐漸提高 時(shí)，使某一種蛋白質(zhì)的電荷被中和，與離子交換劑的親和力降低，不同的蛋白質(zhì)按所帶電荷的強(qiáng)弱逐一被洗脫下來(lái)，達(dá)到分離的目的。 離子交換劑是由基質(zhì)、電荷基團(tuán)（或功能基團(tuán)）和反離子構(gòu)成。 基質(zhì) 電荷基團(tuán) 反離子 陽(yáng)離子交換劑 電荷基團(tuán) 反離子 陰離子交換劑 電荷基團(tuán) 反離子 基質(zhì) 基質(zhì) — ＋ — ＋ — ＋ 溶液中的離子 或離子化合物 溶液中的離子 或離子化合物 可逆交換 可逆交換 ＋ — 酶活力檢測(cè) (定性 檢測(cè)） 蔗糖酶（ β D呋喃型果糖苷 果糖水解酶 EC ），是一種水解酶。它能催化非還原性雙糖（蔗糖）的 1,2－糖苷鍵裂解，將蔗糖水解為等量的 葡萄糖 和 果糖 （ 還原糖 ）。 因此，每水解 1mol蔗糖，就能生成 2mol還原糖。還原糖的測(cè)定有多種方法，如采用 －二硝基水楊酸法，其原理是 －二硝基水楊酸與 還原糖 共熱被還原成 棕紅色的氨基化合物 ，在一定范圍內(nèi)還原糖的量和反應(yīng)液的顏色深度成正比。 本實(shí)驗(yàn)在離子交換層析分離純化的過(guò)程中，對(duì)分離純化樣品采用 －二硝基水楊酸
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