體內(nèi)藥物分析方法及方法的設(shè)計(jì)與評(píng)價(jià)-全文預(yù)覽
【正文】 體內(nèi)樣品的濃度檢測(cè)限 ， 則要根據(jù)樣品處理方法 ， 考慮稀釋度 。 ? 通常以標(biāo)準(zhǔn)曲線的最低濃度點(diǎn)作為定量限 。 ? 例如 ， 在色譜分析中 ， 測(cè)得 N＝ 1mm， 取2ug/mL 的 樣 品 液 20uL 進(jìn)樣 ， 測(cè) 得 峰 高 為30mm。 測(cè)定時(shí)可使用日內(nèi) (或批內(nèi) )精密度測(cè)定時(shí) ， 所使用的高 、 中 、 低三種濃度樣品 ， 在同一周內(nèi)不同日 (或不同批 )分別測(cè)定 3～ 5次 ， 然后計(jì)算出 RSD。 所謂 “ 批內(nèi) ” 是指測(cè)定時(shí)使用同批試劑 、 同一條標(biāo)準(zhǔn)曲線等主要相同條件下完成的分析測(cè)定 。 除定量限外 ， 各濃度點(diǎn)的 RSD不應(yīng)大于15％ ， 最低定量限這一點(diǎn)不應(yīng)大于 20％ 。 (二 )精密度 ? 精密度 (precision)是表示一組測(cè)量值彼此符合的程度 。 ? 上述 ① 、 ② 兩點(diǎn)的原因： ? 一是如果添加量大 ， 實(shí)際測(cè)定量小 ， 那么有可能測(cè)定量在回收率的誤差范圍內(nèi) ， 這樣就不可靠； ? 二是如果添加量大 ， 蛋白質(zhì)實(shí)際結(jié)合能力小 ，這樣存在在空白血樣中的添加藥物部分沒(méi)有結(jié)合 ， 與實(shí)際存在的情況不符 ， 測(cè)得回收率容易偏高 。 然后取高 、 中 、 低濃度的藥物標(biāo)準(zhǔn)品添加到空白體液中 ， 每個(gè)濃度至少平行測(cè)定5份 ， 按標(biāo)準(zhǔn)曲線制備方法同法測(cè)定 ， 所得信號(hào)值代入回歸方程 ， 求得測(cè)定值 。藥 /A39。 ? 絕對(duì)回收率應(yīng)考察高 、 中 、 低 3個(gè)濃度 ， 低濃度選擇在定量限 (LOQ)附近 ， 高濃度在標(biāo)準(zhǔn)曲線的上限附近 ， 中間選一個(gè)濃度 。 根據(jù)回收率測(cè)定方法不同可分為絕對(duì)回收率和方法回收率 。 常用回收率 (recovery)數(shù)值反映測(cè)定的準(zhǔn)確程度 ， 也可通過(guò)與其他已建立的方法進(jìn)行比較的辦法來(lái)加以反映 。 有時(shí)也可采用專屬性強(qiáng) ，已證明用于體內(nèi)實(shí)樣測(cè)定的步驟和方法作為對(duì)照測(cè)定 ， 以此來(lái)檢驗(yàn)所建立的方法的實(shí)際可行性 。 若采用色譜法測(cè)定 ， 多數(shù)情況下需要用內(nèi)標(biāo)法定量 ， 則應(yīng)首先選擇合適的內(nèi)標(biāo) ， 然后進(jìn)行回收率的測(cè)定 。 在色譜分析中應(yīng)力求減少體內(nèi)樣品中內(nèi)源性雜質(zhì)峰 ， 對(duì)無(wú)法消除的內(nèi)源性雜質(zhì)峰應(yīng)設(shè)法使其從待測(cè)物的色譜區(qū)域內(nèi)移開(kāi) 。 方法建立的一般實(shí)驗(yàn)步驟 ? 方法初步擬定后 ， 還需進(jìn)行一系列實(shí)驗(yàn)工作 ，以選擇最佳實(shí)驗(yàn)條件及驗(yàn)證所擬定的方法是否適合實(shí)樣檢測(cè) 。 前者要求具有一定的靈敏度和準(zhǔn)確度 ， 不強(qiáng)調(diào)簡(jiǎn)便 、 快速 ， 設(shè)計(jì)方法時(shí)應(yīng)考慮到不同時(shí)間獲得的樣品中藥物濃度變化較大這一因素 。 藥物的理化性質(zhì)包括酸堿性 (pKa)、 親脂性 、 溶解度 、 極性 、 光譜特征 、 穩(wěn)定性等 ，這些性質(zhì)與分析方法的選擇 、 實(shí)驗(yàn)條件的改善密切相關(guān) 。 ? 選用何種方法進(jìn)行體內(nèi)藥物分析為好呢 ？ 一般要根據(jù)藥物的理化性質(zhì) 、 結(jié)構(gòu)持征 、 藥物濃度大小 、 干擾成分的多少 、 預(yù)處理方法 、 實(shí)驗(yàn)?zāi)康囊约皩?shí)驗(yàn)室條件等因素綜合起來(lái)進(jìn)行考慮 。 因此使其在體內(nèi)藥物分析及其代謝的檢測(cè)中得到廣泛的應(yīng)用 。 （ 四 ） 毛細(xì)管電泳法 ? 毛細(xì)管電泳法 (CE)， 又稱高效毛細(xì)管電泳法(HPCE)， 是 20世紀(jì)末發(fā)展起來(lái)的一種高效 、快速的分析技術(shù) 。 由于 HPLC法的發(fā)展 ， 尤其是RPHPLC(反相 高效液相色譜法 ） 的廣泛應(yīng)用 ，使 GC法的應(yīng)用相對(duì)減少 。 ? (4)檢測(cè)器多是針對(duì)整分子的光譜特征進(jìn)行檢測(cè)的 ， 專一性較高 。 HPLC法 ? HPLC法在體內(nèi)藥物分析中的應(yīng)用已大大超過(guò)其他分析方法 ， 成為體內(nèi)藥物分析中應(yīng)用最廣泛的技術(shù)之一 。 該法具有靈敏度高 、 專一性強(qiáng) 、 操作簡(jiǎn)便 、 快速等優(yōu)點(diǎn) ， 是臨床治療藥濃監(jiān)測(cè)和生化檢驗(yàn)的常用方法 ， 但需要一定的試劑盒和儀器 。 熒光分光光度法 ? 熒光分光光度法的靈敏度比紫外 可見(jiàn)分光光度法的靈敏度高 ， 最高可達(dá)到 1012g/mL， 雖然有熒光的物質(zhì)數(shù)量不多 ， 但體內(nèi)許多重要的生化物質(zhì) 、 藥物及其代謝物或致癌物都有熒光現(xiàn)象 。 但用于測(cè)定含藥濃度低的樣品時(shí) ， 也受到一定的限制 。 比色法 ? 比色法靈敏度不高 ， 通常只能測(cè)定出 1ug/ml濃度以上的樣品 。 光譜法在體內(nèi)藥物分析中是應(yīng)用較早的方法之一 ， 根據(jù)陸明廉對(duì)我國(guó)1975～ 1984年間血藥濃度測(cè)定方法的統(tǒng)計(jì) ， 應(yīng)用光譜法占應(yīng)用血藥分析方法總數(shù)的三分之一 。體內(nèi)藥物分析 Biopharmaceutical Analysis 體內(nèi)藥物分析方法及方法的設(shè)計(jì)與評(píng)價(jià) ? 生物樣本經(jīng)預(yù)處理后 ， 選用適當(dāng)方法進(jìn)行測(cè)定 。 （ 一 ） 光譜分析法 ? 光譜分析法包括比色測(cè)定 、 紫外分光光度法和熒光分光光度法 。 選用專屬的方法或試劑與之反應(yīng) ， 測(cè)定衍生物的熒光或?qū)馕諒?qiáng)度 ， 也可借助數(shù)學(xué)的方法消除干擾 。 紫外分光光度法 ? 分光光度法的靈敏度較比色法高 ， 適用于測(cè)定具有紫外吸收的藥物 ， 方法簡(jiǎn)單 ， 儀器要求也不高 。 但采用一些光譜分析技術(shù) ， 如用差示分光光度法 ， 導(dǎo)數(shù)分光光度法 ， 雙波長(zhǎng)和三波長(zhǎng)分光光度法等 ， 可適當(dāng)提高方法的靈敏度和選擇性 ， 也可消除雜質(zhì)的干擾 ， 因此 ， 該法目前仍用于一些生物樣品中的藥物檢測(cè) 。 該法的原理是利用抗原 抗體特異反應(yīng)來(lái)測(cè)定體內(nèi)藥物的含量 。 近年手性色譜技術(shù) 、 毛細(xì)管電泳技術(shù) 、 色譜與光譜聯(lián)用技術(shù) 、色譜與免疫聯(lián)用技術(shù)等的建立與發(fā)展 ， 更為色譜技術(shù)在體內(nèi)藥物分析中的應(yīng)用增添了無(wú)量的前景 。 ? (2)樣品預(yù)處理簡(jiǎn)單 ， 可不經(jīng)萃取和衍生化處理直接測(cè)定極性大的水溶性藥物 ， 特別適合生物樣品的測(cè)定； ? (3)分離效率高 ， 流動(dòng)相選擇范圍廣 ， 儀器自動(dòng)化程度高 。 GC法 ? GC法是最先興起的具有分離和分析兩種功能的測(cè)定技術(shù) ， 在藥物分析和體內(nèi)藥物分析中曾得到較廣泛的應(yīng)用 。 因而影響該法在體內(nèi)藥物分析中的廣泛應(yīng)用 。 ? 由于該法具有高效 、 快速 、 靈敏 、 進(jìn)樣少 、 信息量大 、 運(yùn)行成本低 、 易于自動(dòng)化等優(yōu)點(diǎn) 。 上述這些方法近幾年來(lái)在體內(nèi)藥物分析中均得到不同程度應(yīng)用 。 (二 )充分了解待測(cè)藥物的特性與體內(nèi)狀況 ? 藥物的理化性質(zhì)和體內(nèi)過(guò)程是建立方法的主要依據(jù) 。 (三 )明確測(cè)定的目的 、 要求 ? 應(yīng)了解擬建立的方法是用于測(cè)定藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù) ， 還是用于臨床藥濃監(jiān)測(cè) 。 （ 四 ） 結(jié)合實(shí)驗(yàn)室條件 ? 根據(jù)實(shí)驗(yàn)室現(xiàn)有的和可
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