人感染豬鏈球菌病樣品采集運(yùn)送與實(shí)驗(yàn)室檢測方案-全文預(yù)覽
【正文】 學(xué)檢測 生化鑒定 推片鏡檢 ? 抗凝血或腦脊液可推片革蘭氏染色鏡檢 ? 陽性標(biāo)本可見中性粒細(xì)胞內(nèi)吞噬顆粒，偶爾可見革蘭陽性球菌 感染鼠尾血推片 感染兔心臟血推片 分離鑒定 ? 血平板直接接種 – 新鮮羊血瓊脂平板 /含 8%新生牛血清的營養(yǎng)瓊脂平板 – 血或腦脊液等標(biāo)本 ? 直接接種 – 組織標(biāo)本 ? 可直接涂抹平板或剪碎用無菌生理鹽水洗滌，洗液接種平板 ? 置 37℃ 5% CO2培養(yǎng)箱或者燭缸中培養(yǎng) 24小時(shí) 分離鑒定 ? 增菌培養(yǎng) – 待檢標(biāo)本置約 10倍體積腦心肉湯 /含 8%新生牛血清葡萄糖肉湯（附配方 ） /商品化血培養(yǎng)瓶中增菌培養(yǎng) 37℃ 24小時(shí) – 增菌培養(yǎng)物接種新鮮羊血瓊脂平板，置37℃ 5% CO2培養(yǎng)箱或者燭缸中培養(yǎng) 24小時(shí) – 如果是 污染標(biāo)本 ,則要接種于選擇增菌培養(yǎng)液（含 15微克 /毫升多粘菌素 B， 30微克 /毫升萘啶酮酸的腦心培養(yǎng)基）進(jìn)行增菌 附：葡萄糖肉湯（含 8%新生牛血清） 成分： ? 酵母浸膏 3克 ? 10%葡萄糖溶液 20毫升 ? 枸椽酸鈉 3克 ? 磷酸氫二鉀 2克 ? 牛肉湯 900毫升 ? %硫酸鎂 20毫升 ? %對氨苯甲酸 5毫升 ? 新生牛血清 80毫升 附：葡萄糖肉湯（含 8%新生牛血清） 制法 ? 除葡萄糖及硫酸鎂外 ,其他各物混合 ,加熱溶解 ,矯正 pH至 ,再煮沸 5分鐘 ? 用濾紙過濾并分裝于 100毫升三角燒瓶內(nèi) ,每瓶50毫升 ,包扎瓶口 ,高壓滅菌 10磅 20分鐘 ? 將葡萄糖配成 10%水溶液 ,硫酸鎂配成 %水溶液 ,分別高壓滅菌 8磅 15分鐘 ? 每 50毫升無菌肉湯內(nèi)加入無菌葡萄糖及磷酸鎂水溶液各 1毫升 ,混勻 .于 37℃ 培養(yǎng) 2天證明無細(xì)菌生長后存于冰箱內(nèi)備用。 上游引物： cagtatttaccgcatggtagatat 下游引物： gtaagataccgtcaagtgagaa 檢測豬鏈球菌莢膜多糖基因（ cps2A） 上游引物： gttgagtccttatacacctgtt 下游引物： cagaaaattcatattgtccacc 檢測溶菌酶釋放相關(guān)蛋白編碼基因片段（ mrp） 上游引物： ggtatacctt gctggtaccg ttc
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