【正文】 T 細胞無能，導致自身耐受。 2．小鼠骨髓細胞經體外低劑量細胞因子誘導，可擴增分化充足的 imDC。 3．每只 Wistar 大鼠胰腺可分離純化出胰島細胞約 個。其中 T1組為糖尿病對照組，腎被膜下注射等量 RPMI1640 液； T2組為單純胰島細胞移植組，腎被膜下移植異種胰島細胞； T3組和 T4 組為經 imDC 預處理后異種胰島細胞移植組，外周靜脈注射供體骨髓細胞培養(yǎng)擴增的 imDC 后經腎被膜下胰島細胞移植。第 7天收取貼壁細胞，標定單克隆抗體，經流式細胞儀鑒定細胞數(shù)量及 imDC 比例。基于這一理論，建立小鼠糖尿病模型，經外周循環(huán)注射負載供體抗原的小鼠 imDC 誘導異種免疫耐受后，移植大鼠胰島細胞，觀察糖尿病小鼠移植物存活時間和移植物排斥 反應。 3．異種胰島細胞移植術前注射 imDC可明顯延長糖尿病小鼠移植術后血糖濃度維持正常水平的時間，和單純胰島細胞移植組相比可明顯減輕移植排斥反應，延長移植物存活時間。胰島細胞的純化達到 80％，存活率為 95％。監(jiān)測各組糖尿病小鼠實驗干預后血糖、體重及皮毛等變化。 3．胰島細胞提取和純化移植：30只雌性， 8～ 10 周 SPF 級 Wistar 大鼠，無菌取胰腺并經膠原酶適度消化，消化液經密度梯度離心分離純化出胰島細胞。 方法： 1．不同 STZ 劑量建立糖尿病動物模型：將 36只雄性， 6～ 8周 SPF級的 BALB/c 小鼠完全隨機分為 G1(對照組 )、 G G3和 G4組，進行糖尿病小鼠建模試驗，分別用檸檬酸 檸檬酸鈉緩沖液和 80mg/kg、 200mg/kg、 240mg/kg 三種濃度的 STZ進行腹腔注射，監(jiān)測小鼠血糖濃度，分析建模成功率和生存率，確定最佳建模劑量。 糖尿病是嚴重威脅人類生命與健康的全球性多發(fā)病，胰島素替代治療不能阻止其并發(fā)癥的出現(xiàn)，而 β 細胞替代治療 (包括胰腺移植和胰島細胞移植 )能達到生理性調控胰島素分泌的目的，并維持正常血糖。 4． T1 組糖尿病小鼠的血糖濃度始終維持在糖尿病水平，體重隨時間延長而下降，且部分小鼠病程中出現(xiàn)皮毛污穢粘連、高滲性昏迷，感染等表現(xiàn)；T2組小鼠經腎被膜下異種胰島細胞移植后血糖濃度很快恢復至正常水平，體重上升，但是術后 5 天血糖開始再次升高，體重隨之下降，表明單純胰島細胞移植排斥反應強烈，胰島細胞短期內失功； T3組和 T4組小鼠經外周靜脈注射經供體抗原修飾的自身骨髓細胞培養(yǎng)分化的 imDC后行腎被膜下異種胰島細胞移植，移植后小鼠血糖濃度在術后第 2天左右恢復正常，并且血糖濃度維持在正常水平的時間 較 T2組明顯延長，體重未見明顯下降。 結果： 1．小鼠經腹 腔注射不同劑量 (80mg/kg， 200mg/kg、 240mg/kg)STZ 誘導糖尿病模型的成功率分別為：0％， ％和 ％； 200mg/kg 和 240mg/kg STZ 腹腔注射組誘導糖尿病模型小鼠實驗觀察期內的生存率分別為： ％和 40％。用 DTZ和 AOPI 染色分別鑒定胰島細胞的形態(tài)和存活率。 2． imDC 提取和培養(yǎng)：將 20只雄性， 6～ 8周 SPF級的 BALB/c 小鼠，取股骨、脛骨沖洗骨髓，沖洗液經淋巴細胞分離液離心，提取單核細胞。但是移植物排斥反應始終影響移植效果，甚至導致移植胰島失功。 結論： 1．一次性腹腔注射STZ200mg/kg 誘導 BALB/c 小鼠的糖尿病模型成功率和生存率明顯優(yōu)于STZ80mg/kg 和 STZ240mg/kg 注射組。 2．小鼠骨髓來源細胞經低劑量 GMCSF 聯(lián)合 IL4擴增出的細胞具有典型 DC 的形態(tài)特征，并且高度表達 imDC的表面分子，基本不表達成熟 DC 的表面分子。 4． imDC 預處理和胰島細胞移植：將 40 只 BALB/c 小鼠完全隨機分為 T T T T4組，建立糖尿病模型。單核細胞經洗滌后置入含 20％胎牛血清的 RPMI1640 培養(yǎng)基中，在 37℃ ， 5％ CO2條件下培養(yǎng)，第 5 天分別加入細胞因子 IL GMCSF。樹突狀細胞 (dendritic cell， DC)的外周致耐受作用通常由未成熟樹突狀細胞 (immature dendritic cell， imDC)介導，由于 imDC不表達共刺激 分子，當 imDC 攜帶自身抗原移行至外周淋巴組織后不能使 T細胞活化，從而誘導 T 細胞無能，導致自身耐受。 2．小鼠骨髓細胞經體外低劑量細胞因子誘導，可擴增分化充足的 imDC。 3．每只 Wistar 大鼠胰腺可分離純化出胰島細胞約 個。其中 T1 組為糖尿病對照組，腎被膜下注射等量 RPMI1640液； T2組為單純胰島細胞移植組，腎被膜下移植異種胰島細胞； T3 組和 T4組為經 imDC 預處理后異 種胰島細胞移植組，外周靜脈注射供體骨髓細胞培養(yǎng)擴增的 imDC 后經腎被膜下胰島細胞移植。第 7天收取貼壁細胞，標定單克隆抗體，經流式 細胞儀鑒定細胞數(shù)量及 imDC 比例?；谶@一理論，建立小鼠糖尿病模型，經外周循環(huán)注射負載供體抗原的小鼠 imDC 誘導異種免疫耐受后，移植大鼠胰島細胞，觀察糖尿病小鼠移植物存活時間和移植物排斥反應。 3． 異種胰島細胞移植術前注射 imDC 可明顯延長糖尿病小鼠移植術后血糖濃度維持正常水平的時間，和單純胰島細胞移植組相比可明顯減輕移植排斥反應，延長移植物存活時間。胰島細胞的純化達到80％，存活率為 95％。監(jiān)測各組糖尿病小鼠實驗干預后血糖、體重及皮毛等變化。 3．胰島細胞提取和純化移植： 30 只雌性， 8～ 10周 SPF級 Wistar 大鼠，無菌取胰腺并經膠原酶適度消化，消化液經密度梯度離心分離純化出胰島細胞。 方法： 1．不同 STZ 劑量建立糖尿病動物模型：將 36只雄性， 6～ 8周 SPF級的BALB/c 小鼠完全隨 機分為 G1(對照組 )、 G G3和 G4組，進行糖尿病小鼠建模試驗，分別用檸檬酸 檸檬酸鈉緩沖液和 80mg/kg、 200mg/kg、 240mg/kg 三種濃度的 STZ進行腹腔注射，監(jiān)測小鼠血糖濃度，分析建模成功率和生存率，確定最佳建模劑量。泌尿外科專業(yè)畢業(yè)論文 [精品論文 ] 未成熟樹突狀細胞誘導糖尿病小鼠異種胰島細胞移植免疫耐受的研究 關鍵詞：糖尿病 異種胰島細胞移植 未成熟樹突狀細胞 免疫耐受 摘要：糖尿病是嚴重威脅人類生命與健康的全球性多發(fā)病，胰島素替代治療不能阻止其并發(fā)癥的出現(xiàn)，而 β 細胞替代治療 (包括胰腺移植和胰島細胞移植 )能達到生理性調控胰島素分泌的目的，并維持正常血糖?；谶@一理論，建立小鼠糖尿病模型，經外周循環(huán)注射負載供體抗原的小鼠 imDC 誘導異種免疫耐受后，移植大鼠胰島細胞，觀察糖尿病小鼠移植物存活時間和移植物排斥反應。第 7天收取貼壁細胞，標定單克隆抗體，經流式細胞儀鑒定細胞數(shù)量及 imDC 比例。其中T1組為糖尿病對照組，腎被膜下注射等量 RPMI1640 液； T2 組為單純胰島細胞移植組，腎 被膜下移植異種胰島細胞； T3 組和 T4組為經 imDC 預處理后異種胰島細胞移植組，外周靜脈注射供體骨髓細胞培養(yǎng)擴增的 imDC 后經腎被膜下胰島細胞移植。 3．每只 Wistar 大鼠胰腺可分離純化出胰島細胞約 個。 2．小鼠骨髓細胞經體外低劑量細胞因子誘導，可擴增分化充足的 imDC。樹突狀細胞 (dendritic cell， DC)的外周致耐受作用通常由未成熟樹突狀細胞 (immature dendritic cell， imDC)介導，由于 imDC 不表達共刺激分子，當 imDC攜帶自身抗原移行至外周淋巴組織后不能使T細胞活化，從而誘導 T 細胞無能，導致自身耐受。單核細胞經洗滌后置入含 20％胎牛血清的 RPMI1640 培養(yǎng)基中，在 37℃ ， 5％ CO2 條件下培養(yǎng)，第 5 天分別加入細胞因子 IL GMCSF。 4． imDC預處理和胰島細胞移植：將 40只 BALB/c 小鼠完全隨機分為 T T T T4 組，建立糖尿病模型。 2．小鼠骨髓來源細胞經低劑量 GMCSF 聯(lián)合 IL4 擴增出的細胞具有典型 DC 的形 態(tài)特征，并且高度表達 imDC的表面分子，基本不表達成熟 DC 的表面分子。 結論： 1．一次性腹腔注射 STZ200mg/kg 誘導 BALB/c 小鼠的糖尿病模型成功率和生存率明顯優(yōu)于 STZ80mg/kg 和 STZ240mg/kg 注射組。但是移植物排斥反應始終影響移植效果，甚至導致移植胰島失功。 2． imDC 提取和培養(yǎng)：將 20只雄性， 6～ 8周 SPF級的 BALB/c 小鼠，取股骨、脛骨沖洗骨髓，沖洗液經淋巴細胞分離液離心，提取單核細胞。用 DTZ和 AOPI 染色分別鑒定胰島細胞的形態(tài)和存活率。 結果： 1．小鼠經腹腔注射不同劑量 (80mg/kg， 200mg/kg、 240mg/kg)STZ 誘導糖尿病模型的成功率分別為：0％， ％和 ％； 200mg/kg 和 240mg/kg STZ 腹腔注射組誘導糖尿病模型小鼠實驗觀察期內的生存率分別為： ％和 40％。 4． T1 組糖尿病小鼠的血糖濃度始終維持在糖尿病水平，體重隨時間延長而下降，且部分小鼠病程中出現(xiàn)皮毛污穢粘連、高滲性昏迷，感染等表現(xiàn)；T2組小鼠經腎被膜下異種胰島細胞移植后血糖濃度很快恢復至正常水平，體重上升，但是術后 5 天血糖開始再次升高，體重隨之下降，表明單純胰島細胞移植排斥反應強烈，胰島細胞短期內失功； T3組和 T4組小鼠經外周靜脈注射經供體抗原修飾的自身骨髓細胞培養(yǎng)分化的 imDC后行腎被膜下異種胰島細 胞移植，移植后小鼠血糖濃度在術后第 2天左右恢復正常，并且血糖濃度維持在正常水平的時間較 T2組明顯延長，體重未見明顯下降。 糖尿病是嚴重威脅人類生命與健康的全球性多發(fā)病，胰島素替代治療不能阻止其并發(fā)癥的出現(xiàn)，而 β 細胞替代治療 (包括胰腺移植和胰島細胞移植 )能達到生理性調控胰島素分泌的目的，并維持正常血糖。 方法： 1．不同 STZ 劑量建立糖尿病動物模型：將 36只雄性， 6～ 8周 SPF級的 BALB/c 小鼠完全隨機