《毒理學評價研》ppt課件-全文預覽
【正文】 當受試物回變菌落數(shù)超過自發(fā)回變的 2倍以上并有劑量 —— 反應關系時即可判定為陽性。加大藥量，一次給予最大量，對照組一次性灌胃生理鹽水 80mL/kg繼續(xù)觀察 10 d. ? 未發(fā)現(xiàn)動物有任何局部或全身的中毒癥狀，無一只動物死亡。bw， ? 實驗組分高、中、低 3組，分別一次性灌服轉(zhuǎn)基因大豆油 10 mL/kg ? 觀察小鼠的肝、腎、脾、胸腺等臟器均無異常變 化 , 病理檢查各臟器均無異常改變。bw劑量轉(zhuǎn)基因水稻和陰性對照(1%羧甲基纖維素 ) 。用 1% 羧甲基纖維素溶解。 ? 試驗期間，全部小鼠的體重均有所增加，并且處理組與對照組的體重增加與進食量無處理相關的顯著性差異。 ? 灌胃后，動物自由進食與飲水，每天觀察兩次動物的死亡與中毒情況。 ? 如果蛋白的灌胃量 ≥5 g/kg體重，仍未對動物產(chǎn)生毒性作用，則認為這種蛋白是安全的。 ? 試驗目的 ?測定 LD50； ?對受試物進行急性毒性分級，為其他試驗劑量設計提供參考 ? 試驗動物 ? 嚙齒類：大小鼠 非嚙齒類：犬、猴 急性毒性試驗 ? 試驗方法 ? 按照 《 食品安全性毒理學評價程序與方法 — 急性毒性試驗 》 （ GB ）標準程序進行。 ?序列比對工具 ? BLAST是在蛋白質(zhì)序列庫中搜索氨基酸序列的工具 ? FASTA是常用的核酸和蛋白質(zhì)序列庫搜索程序 ? 一般相似性程度極高的 E值一般小于 1e7 加熱和模擬胃腸道消化穩(wěn)定性 試驗條件： 加熱： 95℃ ， 530 min 模擬胃腸道：離子、 pH、酶活、溫度 檢測方法： ? 蛋白電泳：聚丙烯酰胺凝膠電泳 ? 免疫學方法：酶聯(lián)免疫（ ELISA）和蛋白免疫雜交（ Western blot） ? 生物活性檢測與比較 Cao et al. Regulatory Toxicology and Pharmacology. 2022, 58(3): 47481. 熱穩(wěn)定性 模擬消化穩(wěn)定性 急性毒性試驗 由于蛋白質(zhì)類毒素對哺乳動物的毒性作用通常為急性模式，因此，對于外源蛋白的毒性檢測首先關注其急性毒性。 急性毒性試驗 ?結(jié)果分析 ? 毒性分為極毒，劇毒，中等毒性，低毒，實際無毒，無毒六種情況。 ? LD5010倍左右，應進行重復試驗，或者用另一種方法進行驗證 案例：新霉素磷酸轉(zhuǎn)移酶 II（ NPTII）的急性毒性試驗 ? 試驗方法： ? 選用 80只 CD1小鼠，分成四組，每組雌雄各 10只，分別灌胃 0， 100， 1000， 5000mg NPTII蛋白 /kg 體重。 Fuchs, . et al. Bio/Technology, 1993,11,15371547 試驗結(jié)果： ? 全部小鼠均存活，且未發(fā)現(xiàn)與處理有關的臨床癥狀。 Fuchs, . et al. Bio/Technology, 1993,11,15371547 如何計算急性毒性劑量是人類攝入量的多少倍？ Global Environment Monitoring System Food Contamination Monitoring and Assessm
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