《體上課用》ppt課件-全文預(yù)覽
【正文】 胞的親緣性或親和性 具有合適的篩選標(biāo)記 具有較 高的外源 DNA的載裝能力 具有多種單一的核酸內(nèi)切酶識(shí)別切割位點(diǎn) 具有與特定受體細(xì)胞相適應(yīng)的整合位點(diǎn) 質(zhì)粒 質(zhì)粒的基本特征 質(zhì)粒是生物細(xì)胞內(nèi)固有的、能獨(dú)立于寄主染色體而自主復(fù)制、并 被穩(wěn)定遺傳的一類核酸分子 質(zhì)粒常見(jiàn)于原核細(xì)菌和真菌中 絕大多數(shù)的質(zhì)粒是 DNA型的 絕大多數(shù)的天然 DNA質(zhì)粒具有共價(jià)、封閉、環(huán)狀的分子結(jié)構(gòu)， 質(zhì)粒 DNA的分子量范圍： 1 300 kb 質(zhì)粒 質(zhì)粒的基本特征 質(zhì)粒的自主復(fù)制性 質(zhì)粒能利用寄主細(xì)胞的 DNA復(fù)制系統(tǒng)進(jìn)行自主復(fù)制 根據(jù)在每個(gè)細(xì)胞中的分子數(shù)（拷貝數(shù)）多寡，質(zhì)?？煞譃? 兩大復(fù)制類型： 嚴(yán)緊型復(fù)制控制的質(zhì)粒 1 3 拷貝 stringent plasmid 松弛型復(fù)制控制的質(zhì)粒 10 60 拷貝 stringent plasmid 質(zhì)粒 質(zhì)粒的基本特征 質(zhì)粒的不相容性 任何兩種含有相似復(fù)制子（自主復(fù)制的單位 )結(jié)構(gòu)的不同質(zhì)粒，不能同時(shí)存在于一個(gè)細(xì)胞中，這種現(xiàn)象稱為 質(zhì)粒的不相容性 ，不相容性的質(zhì)粒組成 不相容性群 以大腸桿菌的質(zhì)粒為例： ColE pMB1 擁有相似的復(fù)制子結(jié)構(gòu)，彼此不相容 pSC10 F、 RP4 擁有相似的復(fù)制子結(jié)構(gòu)，彼此不相容 p15A及其衍生質(zhì)粒擁有相似的復(fù)制子結(jié)構(gòu)，彼此不相容 質(zhì)粒 質(zhì)粒的基本特征 質(zhì)粒的不相容性： 分子機(jī)制 兩種含有相似復(fù)制子結(jié)構(gòu)的不同質(zhì)粒，在復(fù)制時(shí)受到同一種 拷貝數(shù)控制系統(tǒng)的干擾，致使兩種質(zhì)粒的最終拷貝數(shù)不同， 兩種含有不同復(fù)制子結(jié)構(gòu)的不同質(zhì)粒，在復(fù)制時(shí)各受自己的 拷貝數(shù)控制系統(tǒng)的調(diào)節(jié)，致使兩種質(zhì)粒的最終拷貝數(shù)恒定， 因此在經(jīng)過(guò)若干復(fù)制周期和細(xì)胞分裂周期后仍能共處于同一 細(xì)胞內(nèi) 其中拷貝數(shù)多的質(zhì)粒在以后的細(xì)胞分裂周期中更具優(yōu)勢(shì) 質(zhì)粒 質(zhì)粒的基本特征 質(zhì)粒的可轉(zhuǎn)移性 革蘭氏陰性菌的質(zhì)粒可分成兩大類： 接合型質(zhì)粒 能在天然條件下自發(fā)地從一個(gè)細(xì)胞轉(zhuǎn)移到 另一個(gè)細(xì)胞（接合作用），如 F、 Col、 R質(zhì)粒等 如 Col、 R的其它成員 非接合型質(zhì)粒 不能在天然條件下獨(dú)立地發(fā)生接合作用 值得注意的是，某些非接合型質(zhì)粒（ ColE1） 在接合型質(zhì)粒 的存在和協(xié)助下，也能發(fā)生 DNA轉(zhuǎn)移，這個(gè)過(guò)程由 mob 基因決定 質(zhì)粒 質(zhì)粒的基本特征 攜帶特殊的遺傳標(biāo)記 野生型的質(zhì)粒 DNA上往往攜帶一個(gè)或多個(gè)遺傳標(biāo)記基因，這 使得寄主生物產(chǎn)生正常生長(zhǎng)非必需的附加性狀，選擇標(biāo)記基因，如最常用的抗藥性基因：抗氨芐青霉素 、抗四環(huán)素、抗氯霉素、抗卡那霉素等 這些標(biāo)記基因?qū)?DNA重組分子的篩選具有重要意義 質(zhì)粒 質(zhì)粒的構(gòu)建 天然存在的野生型質(zhì)粒由于分子量大、拷貝數(shù)低、單一酶切位點(diǎn)少、遺傳標(biāo)記不理想等缺陷，不能滿足克隆載體的要求，因此往往需要以多種野生型質(zhì)粒為基礎(chǔ)進(jìn)行人工構(gòu)建。 噬菌體或病毒的上述特性使得它們的 DNA能被開(kāi)發(fā)成為基因工 程的有用載體，因?yàn)椋? 高效率的感染性能使外源基因高效導(dǎo)入受體細(xì)胞 自主復(fù)制繁殖性能使外源基因在受體細(xì)胞中高效擴(kuò)增 噬菌體或病毒 DNA 大腸桿菌的 l 噬菌體 DNA l 噬菌體的生物學(xué)特性： 生物結(jié)構(gòu) l 噬菌體是 大腸桿菌的溫和型噬菌體 l 噬菌體 由外殼包裝蛋白和 lDNA組成 lDNA全長(zhǎng) 48502個(gè)核苷酸 lDNA上 至少有 61個(gè)基因 l 噬菌體生物學(xué)特性： 生物結(jié)構(gòu) 5’ TCCAGCGGCGGGG 3’ 3’ CCCGCCGCTGGA 5’ COS COS cos 頭部合成基因
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