體上課用ppt課件(已修改)
2025-05-24 05:51 本頁(yè)面
【正文】 B 用于基因克隆的載體 3 基因工程的基本條件 質(zhì)粒（ plasmid） 噬菌體或病毒 DNA 考斯質(zhì)粒（ cosmid） 與噬菌粒 人造染色體載體 載體的功能及特征 載體的功能及特征 載體的功能 運(yùn)送外源基因高效轉(zhuǎn)入受體細(xì)胞 為外源基因提供復(fù)制能力或整合能力 為外源基因的擴(kuò)增或表達(dá)提供必要的條件 載體的功能及特征 載體應(yīng)具備的條件 具有針對(duì)受體細(xì)胞的親緣性或親和性 具有合適的篩選標(biāo)記 具有較 高的外源 DNA的載裝能力 具有多種單一的核酸內(nèi)切酶識(shí)別切割位點(diǎn) 具有與特定受體細(xì)胞相適應(yīng)的整合位點(diǎn) 質(zhì)粒 質(zhì)粒的基本特征 質(zhì)粒是生物細(xì)胞內(nèi)固有的、能獨(dú)立于寄主染色體而自主復(fù)制、并 被穩(wěn)定遺傳的一類核酸分子 質(zhì)粒常見(jiàn)于原核細(xì)菌和真菌中 絕大多數(shù)的質(zhì)粒是 DNA型的 絕大多數(shù)的天然 DNA質(zhì)粒具有共價(jià)、封閉、環(huán)狀的分子結(jié)構(gòu)， 質(zhì)粒 DNA的分子量范圍： 1 300 kb 質(zhì)粒 質(zhì)粒的基本特征 質(zhì)粒的自主復(fù)制性 質(zhì)粒能利用寄主細(xì)胞的 DNA復(fù)制系統(tǒng)進(jìn)行自主復(fù)制 根據(jù)在每個(gè)細(xì)胞中的分子數(shù)（拷貝數(shù)）多寡，質(zhì)?？煞譃? 兩大復(fù)制類型： 嚴(yán)緊型復(fù)制控制的質(zhì)粒 1 3 拷貝 stringent plasmid 松弛型復(fù)制控制的質(zhì)粒 10 60 拷貝 stringent plasmid 質(zhì)粒 質(zhì)粒的基本特征 質(zhì)粒的不相容性 任何兩種含有相似復(fù)制子（自主復(fù)制的單位 )結(jié)構(gòu)的不同質(zhì)粒，不能同時(shí)存在于一個(gè)細(xì)胞中，這種現(xiàn)象稱為 質(zhì)粒的不相容性 ，不相容性的質(zhì)粒組成 不相容性群 以大腸桿菌的質(zhì)粒為例： ColE pMB1 擁有相似的復(fù)制子結(jié)構(gòu)，彼此不相容 pSC10 F、 RP4 擁有相似的復(fù)制子結(jié)構(gòu)，彼此不相容 p15A及其衍生質(zhì)粒擁有相似的復(fù)制子結(jié)構(gòu)，彼此不相容 質(zhì)粒 質(zhì)粒的基本特征 質(zhì)粒的不相容性： 分子機(jī)制 兩種含有相似復(fù)制子結(jié)構(gòu)的不同質(zhì)粒，在復(fù)制時(shí)受到同一種 拷貝數(shù)控制系統(tǒng)的干擾，致使兩種質(zhì)粒的最終拷貝數(shù)不同， 兩種含有不同復(fù)制子結(jié)構(gòu)的不同質(zhì)粒，在復(fù)制時(shí)各受自己的 拷貝數(shù)控制系統(tǒng)的調(diào)節(jié)，致使兩種質(zhì)粒的最終拷貝數(shù)恒定， 因此在經(jīng)過(guò)若干復(fù)制周期和細(xì)胞分裂周期后仍能共處于同一 細(xì)胞內(nèi) 其中拷貝數(shù)多的質(zhì)粒在以后的細(xì)胞分裂周期中更具優(yōu)勢(shì) 質(zhì)粒 質(zhì)粒的基本特征 質(zhì)粒的可轉(zhuǎn)移性 革蘭氏陰性菌的質(zhì)?？煞殖蓛纱箢悾? 接合型質(zhì)粒 能在天然條件下自發(fā)地從一個(gè)細(xì)胞轉(zhuǎn)移到 另一個(gè)細(xì)胞（接合作用），如 F、 Col、 R質(zhì)粒等 如 Col、 R的其它成員 非接合型質(zhì)粒 不能在天然條件下獨(dú)立地發(fā)生接合作用 值得注意的是，某些非接合型質(zhì)粒（ ColE1） 在接合型質(zhì)粒 的存在和協(xié)助下，也能發(fā)生 DNA轉(zhuǎn)移，這個(gè)過(guò)程由 mob 基因決定 質(zhì)粒 質(zhì)粒的基本特征 攜帶特殊的遺傳標(biāo)記 野生型的質(zhì)粒 DNA上往往攜帶一個(gè)或多個(gè)遺傳標(biāo)記基因，這 使得寄主生物產(chǎn)生正常生長(zhǎng)非必需的附加性狀，選擇標(biāo)記基因，如最常用的抗藥性基因：抗氨芐青霉素 、抗四環(huán)素、抗氯霉素、抗卡那霉素等 這些標(biāo)記基因?qū)?DNA重組分子的篩選具有重要意義 質(zhì)粒 質(zhì)粒的構(gòu)建 天然存在的野生型質(zhì)粒由于分子量大、拷貝數(shù)低、單一酶切位點(diǎn)少、遺傳標(biāo)記不理想等缺陷，不能滿足克隆載體的要求，因此往往需要以多種野生型質(zhì)粒為基礎(chǔ)進(jìn)行人工構(gòu)建。 目前實(shí)驗(yàn)室使用的大腸桿菌質(zhì)粒大多是由少數(shù)幾個(gè)野生型質(zhì)粒構(gòu)建的： pSC101 kb 拷貝數(shù) 5 四環(huán)素抗性標(biāo)記基因 Tcr ColE1 kb 拷貝數(shù) 20 30 大腸桿
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