【正文】 在溶液的表面，然后開始離心。這種方法非常類似于電泳中的PH 梯度等電聚焦方法，在離心時，顆粒依其密度的不同沉降或向上漂浮，直到移動到與自身的密度相同的溶劑梯度中為止，其結(jié)果是依樣品物質(zhì)密度的不同在梯度溶劑中形成一個個區(qū)帶。最常用的制備密度梯度的化合物有蔗糖、甘油、氯化銫和硫酸銫等。沉積的樣品再懸浮到新的溶劑中，并以較低的速度離心使大顆粒的污染物沉降，而被純化的樣品留在溶液中，經(jīng)過反復(fù)多次地離心才能得到純的樣品，這種方法就叫差示沉降離心法，它對細(xì)胞組分間的分離非常有用。 離心技術(shù)的類型最大速度方法移動界面超速離心法含幾個組分的樣品在足夠高的離心場中離心時，每種顆粒都達(dá)到其最大沉降速度，這時樣品開始分離。沉降系數(shù)定義為沉降速度與離心力的比率或單位離心場中顆粒的沉降速度，它以svedberg單位計(jì)算，1S＝11013 s。由于離心力的存在，顆粒將加速運(yùn)動直到摩擦力與離心力相等。顯然Fcf是一個只與離心機(jī)相關(guān)的參數(shù)，而與樣品并無直接的關(guān)系。 離心力和相對離心力：溶液中的固相顆粒做圓周運(yùn)動時產(chǎn)生一個向外離心力，其定義為：F = mω2r式中： F 為離心力的強(qiáng)度； m 為沉降顆粒的有效質(zhì)量；ω 為離心轉(zhuǎn)子轉(zhuǎn)動的角速度，其單位為rad/s；r 為離心半徑(cm)，即轉(zhuǎn)子中心軸到沉降顆粒之間的距離。前者主要用于分離生物材料，每次分離樣品的容量比較大，后者則主要用于研究純品大分子物質(zhì)，包括某些顆粒體如核蛋白體等物質(zhì)的性質(zhì)，每次分析的樣品容量很小，根據(jù)待測物質(zhì)在離心場中的行為(可用離心機(jī)中的光學(xué)系統(tǒng)連續(xù)地監(jiān)測)，能推斷其純度、形狀和相對分子質(zhì)量等性質(zhì)。離心機(jī)離心是蛋白質(zhì)、酶、核酸及細(xì)胞亞組分分離的最常用的方法之一，也是生化實(shí)驗(yàn)室中常用的分離、純化或澄清的方法?？紤]到FCM的可靠性，要注意到對每組測量，都要有對照組，對照組可以是空白對照組、陰性對照組、或零時刻對照組等，具體設(shè)置應(yīng)根據(jù)整體實(shí)驗(yàn)要求而定。我們?？梢杂脕砹私鈹?shù)據(jù)的特性、尋找那些不曾預(yù)料的特異征兆、選擇統(tǒng)計(jì)分析的模型、顯示最終結(jié)果等。方程的數(shù)據(jù)擬合則通常使用最小二乘法。當(dāng)被檢測的生物學(xué)系統(tǒng)能夠用某種數(shù)學(xué)模型技術(shù)時則多使用參數(shù)方法。 圖104　二維等高圖 圖105　假三維圖 　　列表模式其實(shí)只是多參數(shù)數(shù)據(jù)文件的一種計(jì)算機(jī)存貯方式，三個以上的參數(shù)數(shù)據(jù)顯示是用多個直方圖、二維圖和假三維圖來完成的。 圖104給出了二維等高圖的樣式。它是為了克服二維點(diǎn)圖的不足而設(shè)置的顯示方法。橫座標(biāo)和縱座標(biāo)分別為與細(xì)胞有關(guān)的兩個獨(dú)立參數(shù)，平面上每一個點(diǎn)表示同時具有相應(yīng)座標(biāo)植的細(xì)胞存在（圖103）?？v座標(biāo)一般表示的是細(xì)胞的相對數(shù)。 　　（50）數(shù)據(jù)處理原理：FCM的數(shù)據(jù)處理主要包括數(shù)據(jù)的顯示和分析，至于對儀器給出的結(jié)果如何解釋則隨所要解決的具體問題而定。充電電壓一般選+150V，或150V；偏轉(zhuǎn)板間的電位差為數(shù)千伏。實(shí)驗(yàn)經(jīng)驗(yàn)公式f=v/。 樣品分選原理　　流式細(xì)胞儀的分選功能是由細(xì)胞分選器來完成的。自發(fā)熒光信號為噪聲信號，在多數(shù)情況下會干擾對特異熒光信號的分辨和測量。 　　在實(shí)際使用中，儀器首先要對光散射信號進(jìn)行測量。這時所說的角度指的是激光束照射方向與收集散射光信號的光電倍增管軸向方向之間大致所成的角度。未遭受任何損壞的細(xì)胞對光線都具有特征性的散射，因此可利用不同的散射光信號對不經(jīng)染色活細(xì)胞進(jìn)行分析和分選。流式細(xì)胞儀可同時進(jìn)行多參數(shù)測量，信息主要來自特異性熒光信號及非熒光散射信號。二氧化碳培養(yǎng)箱的可選容積非常廣，而且每種類型又有不同的容積可選。目前市面上有高溫濕熱滅菌功能的二氧化碳培養(yǎng)箱極少，而Heal Force（力康）牌HF90氣套式二氧化碳培養(yǎng)箱能夠做到。C就能達(dá)到很徹底的消毒效果，整個消毒過程中培養(yǎng)箱內(nèi)的所有附件都不用取出，可以全部進(jìn)行消毒；而干熱消毒為了達(dá)到較好的效果，溫度一般都在100176。因而濕熱滅菌比干熱所需溫度低，如在同一溫度下，則濕熱滅菌所需時間比干熱短。高溫濕熱由于蒸汽潛熱大，穿透力強(qiáng)，容易使蛋白質(zhì)變性或凝固，因此該法的滅菌效率比干熱滅菌法高。CO2培養(yǎng)箱的濕度恢復(fù)時間比較圖四、防污染設(shè)計(jì)和消毒滅菌系統(tǒng)污染是導(dǎo)致細(xì)胞培養(yǎng)失敗的一個主要因素，因而，二氧化碳培養(yǎng)箱的制造商們設(shè)計(jì)了多種不同的裝置去減少和防止污染的發(fā)生，其主要途徑都是盡量減少微生物可以生長的區(qū)域和表面，并結(jié)合自動排除污染裝置來有效防止污染的產(chǎn)生。維持足夠的濕度水平并且要有足夠快的濕度恢復(fù)速度（如在開關(guān)門后）才能保證不會由于過度干燥而導(dǎo)致培養(yǎng)失敗。目前市面上擁有此功能的二氧化碳培養(yǎng)箱極少，而Heal Force（力康）牌HF90氣套式二氧化碳培養(yǎng)箱能夠做到。紅外傳感器（IR）它是通過一個光學(xué)傳感器來檢測CO2水平的。降低風(fēng)速、減少震動同時也就大大提高了箱內(nèi)細(xì)胞培養(yǎng)的成功率。C時，切斷培養(yǎng)箱的主加熱系統(tǒng)，同時聲光報(bào)警；HF90的環(huán)境溫度監(jiān)控可以根據(jù)環(huán)境溫度的變化自動調(diào)節(jié)培養(yǎng)箱外門輔助加熱系統(tǒng)的功率，達(dá)到精確控制箱體內(nèi)溫度的目的。目前市面上擁有此功能的二氧化碳培養(yǎng)箱極少，而Heal Force（力康）牌HF90氣套式二氧化碳培養(yǎng)箱能夠做到。氣套式與水套式相比，具有加熱快，溫度的恢復(fù)比水套式培養(yǎng)箱迅速的特點(diǎn)，特別有利于短期培養(yǎng)以及需要箱門頻繁開關(guān)的培養(yǎng)。所以，選購二氧化碳培養(yǎng)箱的老師最關(guān)心的當(dāng)然就是其高可靠性、對污染的防范和控制及使用方便。型二級生物安全柜可以在通過HEPA濾膜后直接排入實(shí)驗(yàn)室，或者通過選配的蓋式排氣連接配件排入排氣系統(tǒng)。如果有孔或泄露發(fā)生，負(fù)壓將再次捕捉污染空氣，迫其通過HEPA濾膜，防止其彌散入室內(nèi)。這些已污染的空氣被風(fēng)機(jī)抽入柜子背面的通風(fēng)系統(tǒng)里，在那里大約70%的氣體再循環(huán)，通過HEPA過濾返回作業(yè)區(qū)。必須通過一個排氣HEPA濾膜。 *二級生物安全柜保護(hù)你的實(shí)驗(yàn)樣品。 在操作時，室內(nèi)空氣被抽入前面的格柵，產(chǎn)生一個空氣幕，防止有生物危險的懸浮微粒散入室內(nèi)。 在空氣離開柜前。在工作表面下的壓力通風(fēng)系統(tǒng)里，空氣是未經(jīng)過濾的室內(nèi)氣和剛剛流過作業(yè)區(qū)的氣體的混合體。49號國際標(biāo)準(zhǔn)也未要求這樣的Type 型生物安全柜具有額外安全措施，但所有LABCONCO生物安全柜已具有——污染空氣的正壓力管道必須圍繞以負(fù)壓通風(fēng)系統(tǒng)。全世界的用戶對二氧化碳培養(yǎng)箱都有兩條最基本的要求，一是要求二氧化碳培養(yǎng)箱能夠?qū)囟?、二氧化碳濃度和濕度提供最精確穩(wěn)定的控制，以便于其研究工作的進(jìn)展；二是要求二氧化碳培養(yǎng)箱能夠?qū)ε囵B(yǎng)箱內(nèi)的微生物污染進(jìn)行有效的防范，并且能夠定期消除污染，以保護(hù)研究成果，防止樣品損失。氣套式加熱是通過遍布箱體氣套層內(nèi)的加熱器直接對內(nèi)箱體進(jìn)行加熱的，又叫六面直接加熱。為了使培養(yǎng)箱更加穩(wěn)定的工作，我們推薦用戶選用具備相互獨(dú)立三重溫度控制功能的二氧化碳培養(yǎng)箱，即箱內(nèi)溫度控制、超溫報(bào)警控制和環(huán)境溫度監(jiān)控。C左右時）產(chǎn)生箱內(nèi)溫度過高；HF90的獨(dú)立超溫報(bào)警功能能夠快速準(zhǔn)確的在培養(yǎng)箱內(nèi)溫度高于培養(yǎng)溫度1176。大直徑風(fēng)扇相比其他品牌培養(yǎng)箱的風(fēng)扇，能夠在低轉(zhuǎn)速（低風(fēng)速）時產(chǎn)生大的空氣循環(huán)流量，在達(dá)到均一性目的的同時，降低風(fēng)速、減少箱內(nèi)震動。熱導(dǎo)傳感器監(jiān)控CO2濃度的工作原理是基于對內(nèi)腔空氣熱導(dǎo)率的連續(xù)測量,輸入CO2氣體的低熱導(dǎo)率會使腔內(nèi)空氣的熱導(dǎo)率發(fā)生變化,這樣就會產(chǎn)生一個與CO2濃度直接成正比的電