實驗10雙縮脲法測定蛋白質(zhì)含量-全文預(yù)覽
【正文】 質(zhì)含量應(yīng)在標準曲線范圍內(nèi)。 0號管調(diào)零 ，測定各管 540nm光吸收值。 考馬斯亮藍染色法測定蛋白質(zhì)濃度 考馬斯亮藍在一定蛋白質(zhì)濃度范圍內(nèi) ， 蛋白質(zhì)和染料結(jié)合符合比爾定律 ， 因此可以通過測定染料在 595nm處光吸收的增加量得到與其結(jié)合的蛋白質(zhì)量 。 紫外分光光度法測定蛋白質(zhì)濃度 由于蛋白質(zhì)分子中酪氨酸和色氨酸殘基的苯環(huán)含有共軛雙鍵 ， 因此蛋白質(zhì)具有吸收紫外線的性質(zhì) ，吸收高峰在 280 nm波長處 。在一定條件下 ， 藍色強度與蛋白質(zhì)的量成正比例 。 用水蒸汽蒸餾法將氨蒸入無機酸溶液中 ， 然后再用標準酸溶液進行滴定 ， 滴定所用無機酸的量 (mol)相當于被測樣品中氨的量 （ mol） ， 根據(jù)所測得的氨量即可計算樣品的含氮量 。 （ 2） 標準管法 CX/AX=CS/AS， 已知 CS， 測定 AS、 AX可求得 CX。 （ 3） 比較吸光度的比值 純 DNA： 2 8 02 6 0 ?nmnmAA（二）利用吸收光譜對物質(zhì)進行定量分析 1． 原理 BeerLambert（ 比爾 ） 定律： T=I/I0 A=lg1/T=lgI0/I A=εcl 其中： T為透光率； A為吸光率； I0為入射光強度； I為透射光強度； ε為摩爾消光系數(shù)； C為溶液濃度； L為溶液光程的厚度 2． 常用方法 （ 1） 標準曲線法 ? 標準曲線與樣品的測定條件必須一致。 在凱氏定氮儀中加入強堿堿化消化液 ， 使硫酸銨分解出氨 。 Folin酚反應(yīng)是在雙縮脲反應(yīng)的基礎(chǔ)上 ， 引進 Folin試劑 (磷鉬酸
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