2007年研究生高級生化技術-全文預覽
【正文】 ① PCR反應體系的各個組分 ② PCR循環(huán)的溫度 （ 預變性 、 變性 、 退火 、 延伸 ） ③ PCR循環(huán)的次數(shù)和平臺效應 ④ 操作環(huán)境 平臺效應及其原因 實驗三 核酸和蛋白紫外分光光度法定量測定 分光光度技術是利用物質特有的吸收光譜對其進行定性 、 定量分析的實驗技術 。它對核苷酸的錯配是沒有校正功能。 一般 100ng DNA模板 /100?L。 ? PCR反應體系的組成及功能 PCR的完成是在一個 EP管中完成，一個完整的 PCR反應體系應包括以下成分 ： ? 模板 單、雙鏈 DNA均可。 ? PCR擴增 DNA片段的原理 PCR是在模板 DNA、 引物和四中脫氧核苷酸等存在的情況下 ， DNA聚合酶依賴的酶促合成反應 ， 整個擴增過程分三步： ① 變性：加熱 ， 模板 DNA形成兩條單鏈 ② 退火：降溫 ， 模板單鏈 DNA與引物配對結合 ③ 延伸：在 DNA聚合酶及鎂離子等存在的條件下 ， 引物 339。高級生化技術 中山醫(yī)學院 生物化學與分子生物學教研室 錢艷 Email： 實驗二 PCR試劑盒檢測 HBV DNA 實驗分組，認清試劑 （每 2人做一管， 2陽性管） 患者血清 40?l + 40 ?l DNA 提取液，混勻 沸水浴 10min， 10000rpm 5min（離心機的使用） 取上清 2 ?l（或陽性血清 2?l） 加入一 PCR反應管 6000rpm 5s，混勻 一、實驗操作及注意事項 93℃ 3min 預變性 (Hema PCR儀的使用與程序設計 ) 93℃ 45s， 55℃ 35s， 72℃ 60s
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