2007年研究生高級(jí)生化技術(shù)(已修改)
2025-01-31 09:10 本頁(yè)面
【正文】 高級(jí)生化技術(shù) 中山醫(yī)學(xué)院 生物化學(xué)與分子生物學(xué)教研室 錢(qián)艷 Email： 實(shí)驗(yàn)二 PCR試劑盒檢測(cè) HBV DNA 實(shí)驗(yàn)分組，認(rèn)清試劑 （每 2人做一管， 2陽(yáng)性管） 患者血清 40?l + 40 ?l DNA 提取液，混勻 沸水浴 10min， 10000rpm 5min（離心機(jī)的使用） 取上清 2 ?l（或陽(yáng)性血清 2?l） 加入一 PCR反應(yīng)管 6000rpm 5s，混勻 一、實(shí)驗(yàn)操作及注意事項(xiàng) 93℃ 3min 預(yù)變性 (Hema PCR儀的使用與程序設(shè)計(jì) ) 93℃ 45s， 55℃ 35s， 72℃ 60s 重復(fù) 25個(gè)循環(huán) 72℃ 保溫 5min， 20℃ 保存?zhèn)溆? 二、 PCR基本原理及相關(guān)知識(shí) ? 概念 聚合酶鏈反應(yīng) （ polymerase chain reaction， PCR） 是一種體外擴(kuò)增特異DNA片斷的技術(shù) ,能在短時(shí)間內(nèi)獲得數(shù)百萬(wàn)個(gè)特異 DNA序列的拷貝 。 Kary Mullis ? PCR技術(shù)最早由美國(guó) Cetus公司人類(lèi)遺傳研究室 Kary Mullis及同事于 1985年發(fā)現(xiàn)并研制成功的 。 ? Kary Mullis因發(fā)明了 “ 聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng) ” 而獲得 1993年度諾貝爾化學(xué)獎(jiǎng) 。 相對(duì) DNA克隆而言 ， 這種方法的特點(diǎn)：操作簡(jiǎn)便 、 時(shí)間短 、 特異性高 、 靈敏度高 、實(shí)用性強(qiáng)； 廣泛的應(yīng)用于醫(yī)學(xué)診斷 、 分子生物學(xué) 、分子克隆 、 基因診斷 、 法醫(yī)學(xué) 、 考古學(xué)等各個(gè)領(lǐng)域 。 ? PCR擴(kuò)增 DNA片段的原理 PCR是在模板 DNA、 引物和四中脫氧核苷酸等存在的情況下 ， DNA聚合酶依賴的酶促合成反應(yīng) ， 整個(gè)擴(kuò)增過(guò)程分三步： ① 變性：加熱 ， 模板 DNA形成兩條單鏈
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