生化與分子生物學(xué)技術(shù)原理-全文預(yù)覽
【正文】 oligo 表示法 poly U 均聚物 poly (dAdT) 交替排列 poly (dA 構(gòu)象的改變并不伴隨共價(jià)鍵的破壞 核酸中的核糖有多種構(gòu)象 核糖的五員環(huán)不處于一個(gè)平面， C1， ， O，和 C4’ 三個(gè)原子在一個(gè)平面上， C2’ 或 /和 C3’ 偏離此平面，使核糖產(chǎn)生不同的構(gòu)象。 ]) 二聚體 NmpNp 3. 糖苷鍵不同 假尿苷 ψ (tRNA rRNA) C5C1’ 糖苷鍵 4. 修飾符號 m1A m7G Cm Ψm m2G m3 G 2 5. 分布 a. RNA ~70 ? mRNA ( hnRNA mRNA ) 5’Cap: m7G Nm 分子內(nèi) : m6A m5C ? rRNA 原核 m5C 真核 Nm mN Ψ 高度修飾成分 ( m1ncp3Ψ ) Hela cell 28S rRNA 65Nm ( 70 ) 18S rRNA 40Nm 6mN ? tRNA 60余種分布在環(huán)區(qū) anticodon loop 高度修飾 Q W ? SnRNA uRNA 5’end Cap m3 G ? 稀有堿基的形成 酶催化 CH3 堿基交換 Q tRNA鳥嘌呤 糖苷轉(zhuǎn)移酶 G34 (tRNA) Q34 (tRNA) Q Gua N 糖苷鍵打斷、重建 b. DNA ? ~10 種 甲基化 ? 形成 合成時(shí) om5dC參入 phage T 合成后甲基化 m5dC m6dA m4dC DNA 甲基化酶 S腺苷甲硫氨酸（甲基供體） a. 原核生物 DNA甲基化 ? 限制修飾系統(tǒng) ? DNA甲基化與復(fù)制 E. coli dam G *ATC dcm C *CA/TGG 完全甲基化 oriC 復(fù)制活性 半甲基化 oriC 抑制復(fù)制活性 oriC, dna 甲基化速度與復(fù)制循環(huán) 半甲基化 oriC 與膜結(jié)合抑制復(fù)制 (抑制劑 ) * dam– 半甲基化產(chǎn)物積累 DNA甲基化 ? 甲基化在兩條鏈上 , 對稱分布 真核生物 5’mCpG3’ 植物 5’mCNG3’ dC mdC 影響 DNA蛋白質(zhì) 相互作用 ? 甲基化格式具有組織專一性 pattern of methylation 格式變化 : 配子發(fā)生時(shí)期 , 胚胎發(fā)育早 期 ,病毒感染 格式維持 :DNA甲基化酶維持配子和體 細(xì)胞甲基化狀態(tài) 甲基化格式的維持 C*CGG CCGG CCGG 甲基化格式的限制性內(nèi)切酶分析 ?甲基化與基因表達(dá) 雞珠蛋白基因的組織特異性分析 (Mspl Hpall) CpG 表達(dá) (紅細(xì)胞） mCpG 不表達(dá)（腎、腦 …… ) 肌動蛋白 ( actin gene)表達(dá) 高速率 轉(zhuǎn)錄 肌肉細(xì)胞 actin gene actin gene (CpG) (mCpG) 成纖維細(xì)胞 低速率 轉(zhuǎn)錄 ? Promoter CpG 甲基化與轉(zhuǎn)錄 γ globin gene –200 — +90 有甲基化基團(tuán) mCpG 轉(zhuǎn)錄受阻 除去部分 mCpG 轉(zhuǎn)錄受阻 除去所有 CpG 轉(zhuǎn)錄 5氮胞苷抑制甲基化 ,瞬時(shí)去甲基化 5NC ? 成纖維細(xì)胞 肌肉細(xì)胞 ( 多核 ,有條紋 , 可收縮 ) ?甲基化與小鼠胚胎發(fā)育 knock out 甲基轉(zhuǎn)移酶 gene C 胚胎發(fā)育早期 甲基化格式變換 ,其后細(xì)胞內(nèi) DNA維持特定的甲基化狀態(tài) 配子發(fā)生期 ,不同性別配子的甲基化格式是特定的。 ? N糖苷鍵 堿穩(wěn)定 酸不穩(wěn)定 DNA RNA dNs Ns 嘌呤 Ns 嘧啶 Ns 酸堿作用比較 DNA RNA 堿 / 2’ or 3’Nt 產(chǎn)物 酸 Pu, Py, Pu, PyNt, 多聚核糖 P碎片 碎片 磷酸二酯鍵 嘧啶糖苷鍵 穩(wěn) 大 ? ?
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