【正文】 樣品完全按照標(biāo)準(zhǔn)曲線的條件操作，根據(jù)紫外檢測(cè)獲得的洗脫體積，從分子量標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的分子量。 ? 4. 上樣與洗脫：加樣前檢查床面是否平整，若不平衡用玻璃棒攪拌凝膠使其自然下沉，在膠面上放置圓形濾紙片防止加樣時(shí)沖擊床面，用膠頭滴管吸去上層多余水，然后慢慢滴加 10d牛血清蛋白樣品（每組 8人加 1次樣，兩次加樣間隔 20min），待樣品進(jìn)入凝膠后，向床面滴加2cm高度水防止干膠，擰緊螺絲；打開恒流泵，紫外檢測(cè)儀，記錄儀及部分收集記下初始筆尖位置，直至峰值出現(xiàn)記錄筆移動(dòng)距離 {L}。由于凝膠具有網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)，當(dāng)混合液通過(guò)凝膠顆?？p隙中時(shí)，溶液中的溶質(zhì)凡是比網(wǎng)孔小的分子，都能自由進(jìn)入顆粒內(nèi)部而受阻滯 ,流速緩慢 ,流程長(zhǎng)而后被洗脫；而比網(wǎng)孔大的分子則不能進(jìn)入凝膠網(wǎng)孔而沿凝膠顆粒間的空隙先被洗脫 (阻力小 ,流程短 ,流速大 )。 三、實(shí)驗(yàn)儀器、試劑 1．主要儀器： ? （ 1）分光光度計(jì) ? （ 2）離心機(jī) ? （ 3）電子天平 2．試劑： ? （ 1）茚三酮試劑 ? （ 2） 2％碳酸鈉溶液 ? （ 3） 4％碳酸鈉溶液 ? （ 4） ? （ 5） 95%乙醇 四、實(shí)驗(yàn)步驟 ? （每 2組 4人做 1標(biāo)準(zhǔn)曲線） 編號(hào) 1 2 3 4 5 6 （ ml） 0 蒸餾水（ ml） 0 4%Na2CO3（ ml） 茚三酮試劑（ ml） 2 2 2 2 2 2 800C水浴保溫 30min后冷卻至室溫 95%乙醇（ ml） 5 5 5 5 5 5 蒸餾水（ ml） 5 5 5 5 5 5 A515nm 以亮氨酸的微克數(shù)為橫坐標(biāo)，以 A515縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線 ? 樣品的處理與測(cè)定：在電子天平上稱取小麥粉 10mg于具塞試管底部 →加 1ml 2% 碳酸鈉于 80℃ 水浴中保溫提取10min→加 2ml茚三銅試劑 80℃ 水浴中保溫 30min后冷卻至室溫 →加 5ml 95%乙醇和 5ml蒸餾水充分混勻后轉(zhuǎn)移至離心管中 3000轉(zhuǎn) /分 離心 3min（離心前必須平衡） →取上清液測(cè)A（以 1號(hào)管調(diào)零） 五、結(jié)果計(jì)算 ? 賴氨酸含量（ %）＝ ? 式中： m：標(biāo)準(zhǔn)曲線上查出的亮氨酸的量 (微克 )； ? =Mlys/Mleu ? W：為樣品的干重（ mg）。由于動(dòng)物及人類不能合成，須從食物中得以補(bǔ)充，為此培育高含量賴氨酸的谷物，對(duì)于提高營(yíng)養(yǎng)價(jià)值有重要意義。 ? （ 3）磷酸： ? 取水解液 1mL于試管中加 5滴濃硝酸酸化，再加入 20滴鉬酸銨溶液在沸水浴上加熱，觀察有無(wú)黃色磷鉬酸銨沉淀產(chǎn)生。然后加入 20滴，觀察有無(wú)白色嘌呤堿銀化合物沉淀。再用乙醚 10 mL洗滌沉淀并將沉淀轉(zhuǎn)移至布氏漏斗抽濾（先稱量濾紙重 W1），沉淀在空氣中干燥 30min。 3000轉(zhuǎn) /分，離心 15分鐘后，將上清慢慢傾入 10mL酸性乙醇，邊加邊攪動(dòng)。 三、儀器和試劑 ? 1. 主要試劑 ? （ 1）酵母粉 ? （ 2） NaOH溶液 ? （ 3） ? （ 4）無(wú)水乙醚 ? （ 5） 95％乙醇 ? （ 6）濃氨水 ? （ 7）酸性乙醇溶液 ? （ 8）濃硝酸 ? （ 9） AgNO3 ? （ 10）三氯化鐵 鹽酸溶液。 （ 2）核糖與地衣酚試劑作用呈鮮綠色。 ? （ 2）了解核酸的組分并掌握其鑒定方法。 ? 2．甲醛滴定法常用以測(cè)定蛋白質(zhì)的水解程度。 V0：滴定空白所消耗標(biāo)準(zhǔn)堿的體積（ ml）。 ? (4)．中性甲醛溶液：取分析純甲醛 (36％～37％ )溶液 20ml，加 ％酚酞指示劑約 3滴，滴加 ／ L的氫氧化鈉溶液，使溶液呈微粉紅色（臨用前中和）。 ? K= ? M=% ? V2=100ml ? V3=5ml 五、結(jié)果計(jì)算 100)1( )(%3201 ??????? KVVMWVVc）＝蛋白質(zhì)含量（實(shí)驗(yàn)六 甲醛滴定測(cè)氨基氮 一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康? ? 1．加深對(duì)氨基酸兩性解離的認(rèn)識(shí)。 ? V1：滴定樣品用去的鹽酸溶液平均毫升數(shù)。 ? 2. 蒸餾與吸收：吸取 10ml 2%的硼酸于三角瓶中 →加 4d甲基紅 溴甲酚綠混合指示劑（若變綠色則用 ）。 二、實(shí)驗(yàn)原理 含氮的有機(jī)物與濃硫酸共熱時(shí)，其中的碳、氫二元素被氧化成二氧化碳和水，而氮?jiǎng)t轉(zhuǎn)變成氨，并進(jìn)一步與硫酸作用生成硫酸銨。同時(shí)恒溫水浴溫度變化應(yīng)不超過(guò) 177。 三、儀器和試劑 ? 主要儀器： ? （ 1）離心機(jī) ? （ 2）分光光度計(jì) ? 試劑 ? （ 1）標(biāo)準(zhǔn)麥芽糖溶液（ 2mg/mL） ? （ 2） 1%3,5二硝基水楊酸試劑 ? （ 3） 1%淀粉 四、操作步驟 以麥芽糖含量（ mg）為橫坐標(biāo)，光密度為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。兩種淀粉酶特性不同， α淀粉酶不耐酸，在。 淀粉酶催化產(chǎn)生的這些還原糖能使 3,5二硝基水楊酸還原 ，生成棕紅色的 3氨基 5硝基水楊酸 。 求分子量 距離距離脫色后膠長(zhǎng)染色前膠長(zhǎng)）（遷移 指示 劑 示 劑遷 移蛋白 質(zhì) 白 質(zhì)遷 移MR率相 對(duì) ?? 五 、 注意事項(xiàng) ? 1． 30%AcrBis是神經(jīng)毒化合物，操作時(shí)要小心，做好個(gè)人防護(hù) ? 2．過(guò)硫酸銨需現(xiàn)用現(xiàn)配 ? 3．過(guò)硫酸銨和 TEMED在灌膠前加入即可 ? 4．用微量加樣器上樣時(shí)，勿刺破膠面 根據(jù)本實(shí)驗(yàn)所學(xué)知識(shí)，自行設(shè)計(jì)豌豆凝集素的分離純化實(shí)驗(yàn)。 三、儀器和試劑 1．主要儀器 （ 1）電泳儀 （ 2）電泳槽 2. 試劑 （ 1）電極緩沖液 （ 2） PH 凝膠緩沖液 （ 3） 1%TEMED， （ 4） 30%凝膠儲(chǔ)液， （ 5） 10%過(guò)硫酸銨 （ 6） %考馬斯亮藍(lán) R250染色液 （ 4） 10%乙酸脫色液 四、實(shí)驗(yàn)步驟 1. 電泳槽的安裝：取兩塊玻璃板 →將帶玻璃條的板（高板）放置桌面上 →在上面放置“ U”型橡膠條 →最后將凹槽玻璃板（低板）壓在高板上，置于電泳槽內(nèi)，用鍥子壓緊。 五、結(jié)果計(jì)算 六、思考題 ）展開劑前沿移動(dòng)距離（）（斑點(diǎn)中心到點(diǎn)樣點(diǎn)距離abR ?f實(shí)驗(yàn)三 蛋白質(zhì)分子量測(cè)定 一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康? 掌握電泳基本原理 、 分類 、 影響因素 , SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳用途 ,凝膠制備 。 三、儀器和試劑 主要儀器： （ 1）層析缸 （ 2）微量進(jìn)樣器 （ 3）噴霧器 試劑 ： （ 1）展開劑：乙醇：水：冰乙酸＝ 50:10:1 （ 2）氨基酸溶液： %的賴氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸溶液及它們的混合液 （ 3）顯色劑： %水合茚三酮丙酮溶液。 取濾液 20ml置于旋光管中，先用 1%HCl 調(diào)節(jié)旋光儀“ 0”點(diǎn)，然后將樣品溶液放入旋光儀中測(cè) α 六、思考題 ? 樣品加鹽酸處理時(shí) ， 煮沸時(shí)間少于或多于 15min會(huì)對(duì)測(cè)定結(jié)果產(chǎn)生什么影響 ？ ? 五 、 結(jié)果計(jì)算 ? ? 100.10020 ???WLD??淀粉含量（％）＝表 1－ 1不同 谷物 淀粉的比旋光度 品種 品種 小麥 馬鈴薯 黑麥 小米 大麥 蕎麥 水稻 燕麥 玉米 [α]D20 ? ?）：樣品質(zhì)量（ gdm2WLD???其中 ： 實(shí)驗(yàn)二 氨基酸的紙上層析 一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康? 通過(guò)對(duì)氨基酸的分離 ， 學(xué)習(xí)紙層析法的基本原理及操作方法 。 其在 171～ 195之間 ， 因此可用旋光法測(cè)定粗淀粉的含量 。 實(shí)驗(yàn)一 淀粉含量測(cè)定 一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康? 1. 掌握旋光儀的操作使用。實(shí)驗(yàn)廢液、廢物按要求放入指定收集器皿。 5. 使用藥品時(shí)，要求明確其性質(zhì)及使用方法后，據(jù)實(shí)驗(yàn)要求規(guī)范使用。 主要包括： a、 目的 ， b、 原理 ，