pcr引物設(shè)計(jì)黃金原則-全文預(yù)覽
【正文】 效濃度而使PCR 反應(yīng)不能正常進(jìn)行。引物自身不能有連續(xù)4個(gè)堿基的互補(bǔ)。尤其3′端不應(yīng)超過3個(gè)連續(xù)的G或C，因這樣會使引物在GC富集序列區(qū)錯(cuò)誤引發(fā)。 引物3′端錯(cuò)配時(shí)，不同堿基引發(fā)效率存在著很大的差異，當(dāng)末位的堿基為A時(shí)，即使在錯(cuò)配的情況下，也能有引發(fā)鏈的合成，而當(dāng)末位鏈為T時(shí)，錯(cuò)配的引發(fā)效率大大降低，G、C錯(cuò)配的引發(fā)效率介于A、T之間，所以3′端最好選擇T。若按公式Tm= 4（G+C）+2（A+T）估計(jì)引物的Tm值，則有效引物的Tm為55~80℃，其Tm值最好接近72℃以使復(fù)性條件最佳。 GC含量（position）過高或過低都不利于引發(fā)反應(yīng)。在NCBI上搜索不同物種的同一基因，通過序列分析軟件（比如DNAman）比對（Alignment），各基因相同的序列就是該基因的保守區(qū)。 ~30堿基之間。上下游引物的GC含量不能相差太大。 ′端要避開密碼子的第3位。 6. 堿基要隨機(jī)分布。 7. 引物自身及引物之間不應(yīng)存在互補(bǔ)序列。 兩引物之間也不應(yīng)具有互補(bǔ)性，尤其應(yīng)避免3′ 端的互補(bǔ)重疊以防止引物二聚體（Dimer與Cross dimer）的形成。 8
公司管理相關(guān)推薦
鄂ICP備17016276號-1