【正文】 5 不同齡期、性別綿羊羊鼻蠅蛆 感染 情況 Table5. Prevalence of Oestrus ovis in different ages and sex of sheep 年齡 公羊 母羊 調(diào)查數(shù) 感染數(shù) 感染率（ %） (X 177。SD ) 177。 無流鼻液癥狀羊 流鼻液癥狀羊 合計 調(diào)查數(shù)（只） 149 158 307 感染數(shù)（只） 21 83 104 感染率（ %） (X 177。 表 2 不同臨床癥狀綿羊鼻蠅蛆感染情況 Table2. Prevalence of Oestrus ovis in different clinical symptom of sheep 注： 同 行 數(shù)據(jù) 右上標(biāo) “ ＊ ” 表示組間差異極顯著（ P） 。有時，當(dāng)個別幼蟲進(jìn)入顱 腔損傷到腦膜或因鼻竇發(fā)炎而波及腦膜時，出現(xiàn)神經(jīng)癥狀，患羊表現(xiàn)為運動失調(diào)，旋轉(zhuǎn)動動，發(fā)生麻痹或頭彎向一側(cè)；最后病羊食欲廢絕，極度衰竭死亡（如圖 圖 2）。SD 表示，采用 SPSS Statistics 統(tǒng)計軟件，對實驗數(shù)據(jù)進(jìn)行 ANOVA方差分析。在低倍鏡下觀察，重點了解組織切片的全貌、層次、部位關(guān)系。 內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文 13 封片 將已完全透明的切片從二甲苯液中取出，擦去切片以外載玻片上多余的二甲苯，用玻璃棒滴加一滴樹膠于切片一端，隨 即將蓋玻片一端與樹膠接觸稍稍前推，并與載玻片成 30176。 切片經(jīng)過 以 下 4種上升 (濃度 )酒精，50%酒精 ， 2min→ 70%酒精 ， 2min→ 85%酒精 ， 2min→ 95%酒精 ， 3min， 為伊紅酒精染液浸染創(chuàng)造條件 ，最后 %伊紅酒精浸染 ， 30s。 染色 此過程為 細(xì)胞核被蘇木精染成紫藍(lán)色， 經(jīng) 1%的酒精鹽酸分化脫去胞質(zhì)等不該著色的部位， 多數(shù)細(xì)胞質(zhì)及非細(xì)胞成分被伊紅染成粉紅色。 切片 切片時先準(zhǔn)備好毛筆、鑷子，將粘有蠟塊的木塊固定于切片機(jī)上，調(diào)節(jié)刀與蠟塊的距離，當(dāng)蠟塊與刀口接觸時，可進(jìn)行修片，當(dāng)組織切全后，調(diào)節(jié)切片厚度3μ m，然后連續(xù)進(jìn)行切片。透明的過程和時間 :1： 1 酒精二甲苯 ， （ 可過夜 ） → 二甲苯Ⅰ ，→ 二甲苯Ⅱ ， 。 沖洗（洗滌） 組織固定后，通常用流水沖洗 8～ 12h，以洗凈固定液，停止固定作用，避免組織過度固定，而影響制片效果。一般時間為 1～ 2min 方法 臨床癥狀、流行病學(xué)調(diào)查及剖 解方法 從 春 季至 秋 季 分別隨機(jī)選取 157 和 150 只綿羊， 首先 進(jìn)行臨床癥狀觀察：觀察綿羊的被毛舒展情況、精神狀 態(tài)、呼吸姿勢及次數(shù)、鼻腔分泌物、 鼻部是否有潰爛和炎癥 等情況并予以記錄，采集選取綿羊的羊頭，回實驗室進(jìn)行蟲體檢驗。105Pa) 高壓下蒸氣滅菌（至少 20min），保存存于室溫或 4℃ 冰箱中。 10 羊鼻蠅蛆病病理學(xué)及鼻黏膜免疫學(xué)研究 儀器 電熱恒溫水浴鍋： ,山西文水醫(yī)療器械廠 自動雙重純水蒸餾器：上海亞榮生化儀器 全封閉組織脫水機(jī)： VIP5JrJ2型，日本櫻花檢驗儀器株式會社 自動組織包埋機(jī)： TEC5EME2型，日本櫻花檢 驗儀器株式會社 平推式切片機(jī)： CRM440型 ,日本櫻花檢驗儀器株式會社 組織標(biāo)本伸展水槽： PSM型，日本櫻花檢驗儀器株式會社 電熱恒溫 烤片機(jī)： Slidewarmer， 日本櫻花檢驗儀器株式會社 電熱恒溫干烤箱： 2023 型，上海市躍進(jìn)醫(yī)療器械一廠 光學(xué)顯微鏡： MODEL UMDOB3 OLYMPUS CORPORATION 常規(guī)剖解器械、照相機(jī)等。本實驗在對山西黃土高原地區(qū)羊鼻蠅蛆病流行病學(xué)調(diào)查的基礎(chǔ)上，對感染羊的鼻腔黏膜等組織進(jìn)行了病理學(xué)研究，以為該病的防治提供病理學(xué)依據(jù)。而且在體內(nèi)頸 部中央淋巴結(jié)淋巴細(xì)胞免疫后 6 個月再受抗原刺激能夠依然再生，說明記憶細(xì)胞在這些淋巴結(jié)內(nèi)能夠存留很長時間 [83]。 雖然鼻內(nèi)免疫主要是 IgA，但同時也激發(fā)系統(tǒng)免疫反應(yīng)產(chǎn)生許多的 IgG 類。干擾病原微生物對黏膜的粘附，抑制黏膜對細(xì)菌毒素和其它有害分子的攝取， slgA在保護(hù)機(jī)體免受寄生蟲感染中起著重要的作用，是黏膜免疫中的主要抗蟲物質(zhì) [81]。在反芻動物中， IgA 是黏膜免疫反應(yīng)的主要免疫球蛋白，起著分泌型免疫球蛋白的作用。 IgA 的合成速率高，又能透過黏膜上皮，鼻腔 鼻黏膜 固有層內(nèi)的淋巴細(xì)胞主要為 B淋巴 細(xì)胞，大部分都有合成 IgA 的潛能，是 slgA產(chǎn)生的主要部位。另一小部分歸巢至系統(tǒng)淋巴結(jié)，致敏淋巴細(xì)胞可以激發(fā) B 淋巴細(xì)胞分泌IgG，發(fā)生系統(tǒng)免疫 [74～ 75]。 NALT 的作用機(jī)制與腸 黏膜 相關(guān)淋巴組織（ GALT）相似 ,它可有效激發(fā)黏膜和系統(tǒng)的免疫應(yīng)答。在 NALT表面的淋巴上皮中，纖毛細(xì)胞和 杯狀細(xì)胞的數(shù)量減少，而有大量的上皮間 T 淋巴、 B 淋巴細(xì)胞和 抗原遞成細(xì)胞（ APC） 。 B 淋巴細(xì)胞和 T 淋巴細(xì)胞在經(jīng)過誘導(dǎo)位點抗原預(yù)處理后活化，重 新分布在效應(yīng)位點發(fā)揮免疫功能。 抗原誘導(dǎo)免疫 應(yīng)答 閾值 低 [65～ 66]，加上鼻腔含有豐富的 NALT， NALT 位于整個呼吸道免疫系統(tǒng)起始部分 ，在呼吸道局部免疫以及全身免疫防御中發(fā)揮著重要的作用。于 NALT上皮下固有層或黏膜下分布有數(shù)量不等的成群淋巴濾泡，這些濾泡主要由 B 淋巴細(xì)胞和濾泡樹突狀細(xì)胞 (dendriticcells， DC)組成 ， 每個濾泡 間被濾泡間區(qū)所分隔。 也 是首先接觸吸入和咽入微生物的部位，由 BALT誘發(fā)的 機(jī)體 體液免疫應(yīng)答主要是局部分泌 lgA，同時將 BALT衍生的 B淋巴 細(xì)胞轉(zhuǎn)運到遠(yuǎn)處 黏膜 位點。鼻黏膜有防御能力，鼻黏膜分泌物內(nèi)含溶菌酶、干擾素 （ IFN） 、分泌性 IgA、 IgG和IgE。 鼻黏膜 上皮細(xì)胞表面豐富的微絨毛以及上皮下有大量毛細(xì)血管和毛細(xì)淋巴管網(wǎng)等，共同構(gòu)成鼻黏膜 排泄和 吸收 特殊 物質(zhì)的解剖生理學(xué)基礎(chǔ)。鼻黏膜呼吸部和嗅部黏膜固有層淺層還有管徑較小的毛細(xì) 淋巴管，而在其深層，存在較粗大的淋巴管。對動物和人體的研究表明，當(dāng)病原體刺激鼻腔時， 可激發(fā)鼻內(nèi)免疫 產(chǎn)生有效的抗多種病原體的免疫保護(hù) [58] 鼻腔組織學(xué)特點 鼻腔內(nèi)面襯以黏膜，稱 鼻黏膜 。 鼻腔免疫部分 鼻 腔 是上呼吸道的主要門戶， 鼻腔 黏膜結(jié)構(gòu)和免疫功能同整個呼吸道以及全身免疫 保 護(hù)密切相關(guān)。他發(fā)現(xiàn)有些真菌的孢子懸液對羊狂蠅成蠅的致死率可達(dá) 100%，這無疑提示人們用微生物對 羊鼻蠅 進(jìn)行生物防治可能是一條新的防制途徑。 我國許多地區(qū)在成 蠅 侵襲高峰期通過使用有機(jī)磷類藥物來 醫(yī)治 病羊， 收到一定 效果， 但安全系數(shù) 不高 ， 用 藥繁瑣，熏蒸時藥物不能有效 迅速 到達(dá)鼻腔以及額竇、角竇等部位而使 蟲體得以逃生是這類藥物的不足之處[53]。 對羊 狂 蠅蛆病的防治有一定難度，目前既無有效地免疫制劑，也不可能人為驅(qū)趕，唯一可行的方法是定期進(jìn)行藥物驅(qū)蟲，以防患于未然 [48]。 對成蟲的防治要 遵循 ， 炎熱的夏季堅持早晚放牧， 夏季成蟲飛翔產(chǎn)幼蟲時要避免中午放牧， 中午應(yīng)將羊留在舍內(nèi) 盡 可能避開成蟲的侵襲 [12]。多發(fā)生在牧區(qū) 6～ 9月份 ,男性和女性相比是 2: 1,年齡分布在 5～ 44歲之間 ,職業(yè)一般是農(nóng)民、學(xué)生、戰(zhàn)士。 羊狂蠅幼蟲偶爾侵害人體或其他動物，以眼部多為見，雌蠅有在陽光較強(qiáng)的白天急速而突然飛向人或其他哺乳動物的眼角、口部等處 ,產(chǎn)下幼蟲并隨即迅速飛走的習(xí)性?；佳虮憩F(xiàn)為打噴嚏，甩鼻子，搖頭，磨牙，磨鼻，流淚，眼瞼浮腫，食欲減退，日 漸消瘦 [1]。 導(dǎo)致其頻頻甩頭或 鼻孔緊帖 于 地面 ，嚴(yán)重影響羊只的采食及休息，也容易對羊只造成外在傷害。 病理學(xué) 羊 狂 蠅是一種重要的寄生性蠅類， 其最主要宿主 是 綿羊 ， 寄生部位通常 為 羊的鼻腔、額竇等部位 [2]，偶而 也可 移 行 侵入氣管和肺 [8]，甚至 達(dá) 腦 [22]。 Duranton等 [37]通過比較 得出 斑點酶聯(lián) (DotELISA)快速診斷羊 狂 蠅蛆病的效果 沒有酶聯(lián)免疫吸附試驗準(zhǔn)確率高 。對冬季幼蟲滯育的解釋， Rogers]等 [35]人認(rèn)為， 12℃ 的氣溫不會 影響鼻腔內(nèi)的溫度而使 羊鼻蠅 幼蟲滯育，以 I 期 幼蟲為越冬蟲態(tài)的現(xiàn)象可能是由于溫度或 (和 )光周期對蛹期的幼稚成蟲或羽化出的成蟲的影響，誘使這些成蟲產(chǎn)生能夠停止或延遲發(fā)育的幼蟲。因此，一年中分為雨季與旱季的國家和地區(qū)，旱季往往是羊 狂 蠅成蟲出現(xiàn)的季節(jié) [2]。 Knapp[33]和 Rogers[31]則認(rèn)為 32℃ 以上時蛹不能 存活 。 由于蛹和成蟲是羊 狂 蠅整個生活史 過程 中生存于外界的蟲態(tài)，因而受外界環(huán)境因素影響較大。 因此，本蟲在北方 寒冷地區(qū) 每年僅繁殖一代，而在溫暖地區(qū)則可每年兩代。隨后他們 捕獲 到雌蠅，擠出其腹部的 Ⅰ 期 幼蟲，然后 人工感染羔羊，隔期剖殺 檢查 ，結(jié)果發(fā)現(xiàn)， Ⅰ期 幼蟲發(fā)育為成熟的 Ⅲ 期 幼蟲，在夏季僅需 25～ 35天的時間，而在寒冷的季節(jié)里，幼蟲則 以 Ⅰ 期 幼蟲的蟲態(tài)滯育達(dá) 9 個月之久。印度的 Jagannath[25]經(jīng)實驗 研究 認(rèn)為化蛹需13～ 24h，羽化期 17～ 37 天，成蟲的壽命 為 3～ 25 天 [26]。其發(fā)病情況通常在夏秋季成蟲大批出 現(xiàn) 時以表現(xiàn)卡他性鼻炎為主要癥狀，采 食羊只為躲避成蟲侵襲常將鼻孔緊帖 于 地面，或?qū)㈩^藏于其他羊只兩后肢中間；冬季無明顯癥狀，春季則多 搖頭、 打噴嚏 [16]。如美國西南部羊 狂 蠅 蛆 感染率為 %，平均感染強(qiáng)度 [13]；法國西南部 感染率為 %，強(qiáng)度 為 [11]； 烏克蘭 感染率為 58%～ 90%，強(qiáng)度 為 14[14]； 非洲各養(yǎng)羊 區(qū) 普遍流行；南非 感染率 %[21]。 流行病學(xué) 自 上個 世紀(jì) 30 年代以來，人們開始研究羊 狂 蠅蛆流行病學(xué)。 蟲體背面無刺，成熟后各節(jié)上具有 顏色深淺不一的 帶斑 (隨成熟程度不同顏色深淺不同 )。 Ⅱ 期 幼齡蟲 體 長 9～ 20mm。即 Ⅰ 期 幼 為淺黃白色 ， 體 長約 1mm， 前方有兩個黑色強(qiáng)大的口鉤向后彎曲，口鉤高度角質(zhì)化 。 病原體及 形態(tài)學(xué) 羊 狂 蠅成蟲的形態(tài)學(xué)特征的 描述開始 由 Linne在分類時即進(jìn)行了 論述 ， 將 成蟲翅脈的特征 用來 種的鑒定 [6]。羊狂蠅宿主呈 世界各地養(yǎng)羊區(qū)廣泛分布 ，感染率高，成蠅飛行距離長 [3]。Epidemiology。 檢 出蟲體的羊與未檢出蟲體羊比較，咽后淋巴結(jié) IgA分泌細(xì)胞和 IgG分泌細(xì)胞呈增高趨勢，尤其是淋巴結(jié)髓質(zhì)中 IgA 分泌細(xì)胞和 IgG 分泌細(xì)胞明顯增多 ； 感 染綿羊鼻腔分泌物中 IgA、 IgG 水平顯著高于 未感染綿羊， 咽 后淋巴結(jié)、鼻黏膜 CD4+水平顯著性高于未感染綿羊， 鼻 黏膜CD8+水平較高于未感染綿羊，而咽后淋巴結(jié)中 CD8+水平二者無明顯差異， 咽 后淋巴結(jié)、鼻黏膜 CD4+/CD8+的比率顯著高于未感染綿羊。分類號 S828 學(xué)校代碼 10129 U D C 學(xué) 號 08202251 羊鼻蠅蛆病病理學(xué)及 鼻黏膜 免疫學(xué)研究 Research of Pathological and Immunology of Nasal mucosa on Oestrus ovis 申 請 人： 杜長春 學(xué)科門類： 農(nóng) 學(xué) 學(xué)科專業(yè)： 基礎(chǔ)獸醫(yī)學(xué) 研究方向 ： 動物傳染病與免疫病理學(xué) 指導(dǎo)教師： 王鳳龍 教授 論文提交日期：二〇 一一 年四 月 摘 要 通過對山西黃土高原區(qū)域羊鼻蠅蛆感染情況調(diào)查、病理學(xué)及鼻黏膜免疫學(xué)的研究，以明確該地區(qū)羊鼻蠅蛆的感染率、該病的病理學(xué)及 鼻 黏膜免疫學(xué)變化。 鼻蠅蛆感染綿羊鼻 黏膜出現(xiàn)不同損傷和增生性炎，咽后淋巴結(jié)炎性細(xì)胞浸潤，有的病例出現(xiàn)肺氣腫，腦組織水腫。 the average infection rate was 34%. nasal mucosa appeared different injury and proliferative inflammation, retropharyngeal lymphadenitis cells were infiltrated, others appeared emphysema , brain tissue edema. Compared with no parasite detected cases, the quantity of IgA secretory cells and IgG secretory cells in parasites detected cases increased significantly,especially in lymph n