【正文】 砜霉素 血漿 血漿樣品按 1： 3體積比加乙酸乙酯提取 2次 ， 合并有機相 ，在 60℃ 條件下氮氣吹干 ， 流動相 [乙腈 水 （ 78： 22） ]溶解 。 在水解過程中 ， 可能增加尿中其他干擾成分進入有機相 。而成酯的結合型嗎啡是難以萃取進入有機相的。 在不影響藥物的測定時 ， 可加少量異戊醇 、 二乙胺來降低玻璃容器對藥物的吸附 。 避免過激振蕩 （ 振搖 ） 。 洗滌液的基本組成與試液相同 ， 不含藥物 。 ⑤ 液 — 液萃取的操作步驟 在選好有機相后 ， 可根據(jù)樣品的體積按下列步驟萃?。? 萃?。河?60125ml容積的梨形分液漏斗進行萃取 ， 也可在帶塞的試管中進行 ， 以便振搖 。 表 112 液 液萃取常用有機溶劑 品種 極性 （ ε 176。 溶劑 影響液 液萃取的效率的另一個主要因素就是有機相品種 。 盡可能選擇極性較小的溶劑 。 這 些藥物較難被定量萃取分離出來 。 假設某動物正常血漿的 pH值為 ， 則血漿中解離的藥物濃度 [A]與非解離的藥物濃度 [AH]之比應為 =+lg[A]/[AH] [A]/[AH]= 說明只有 %的藥物是以未解離形式存在。 在實際工作中，主要是根據(jù)藥物的 pKa值來確定水相的 pH值。 就一般血藥濃度分析的基本要求而言 ， 萃取率不應低于 50%。 ③ 萃取率 萃取率表平衡時 ， 藥物在有機相中的量與藥物總量之比 。 實際上 ， 每一種形態(tài)在兩相中都有各自的分配系數(shù) ，不能用單一的分配系數(shù)來表征萃取過程中的平衡問題 。選用與水不相混溶的有機溶劑進行萃取，是利用藥物在水與非水兩個相中分配不均勻的特性為基礎的一種分離提取法。 所謂溶劑解即是指某些藥物和硫酸結合所形成的酯 ， 可以隨加入的萃取溶劑在萃取時發(fā)生分解 。在體內(nèi)許多藥物一般在肝臟與葡萄糖醛酸結合成葡萄糖醛酸甙或與硫酸結合成硫酸酯，有的可與甘氨酸、醋酸等結合。 生物組織中所含的脂類有時對樣品藥物含量測定產(chǎn)生較大影響 。 有些試劑可使血液中蛋白質(zhì)發(fā)生鹽析和脫水作用 ， 使蛋白質(zhì)沉淀出來 。 重金屬離子蛋白質(zhì)沉淀劑包括汞鹽 、銀鹽 、 鋅鹽 、 銅鹽等 。 其中以生成不溶性鹽沉淀法應用較廣 。 （ 2） 干擾組分的消除 血藥濃度的測定中 ， 干擾組分通常包括血漿蛋白質(zhì)及其脂類 。 一般定量分析要求其回收率達到 80%以上 。 其中在藥物分析中樣品的預處理常用的是沉淀法 、 和溶劑萃取法 。通過分離，可以把干擾組分分開，以提高檢測方法的專一性。在測定之前必須將體液中的藥物提取。 不得將解凍樣品再進行冷凍貯存后再解凍測定 。 血樣中的抗凝全血通常只能在 4℃ 冰箱保存 ， 溫度過低自然會引起因解凍而發(fā)生溶血 。 尿液的主要成分是水 、 尿素 （ 禽類為尿酸 ） 及鹽類 ，比較適合于細菌繁殖與生長 ， 所以最好在收集到尿樣后立即進行測定 。同時也可用于藥物乙酰化代謝（如磺胺類藥物）和氧化代謝多態(tài)性（如喹噁啉類藥物）等的研究。 制備血清時 ， 防止過早撥動血塊；寒冷會使紅細胞脆性增大 ，制備血清時 ， 應將血液放入 37℃ 培養(yǎng)箱預熱 30分鐘后 ， 用針頭從管壁剝離 ， 并繼續(xù)保溫使血清析出 。 本品化學結構中含有 N和 Na元素 ， 不適宜于含氮化合物和鈉的測定 。 另外草酸鉀對血液中酶如乳酸脫氫酶 、 酸性磷酸酶 、 淀粉酶有抑制作用 。 每 1ml血液加草酸鉀 2mg。 如確認對待測藥品的測定無影響 ， 也可選用其他抗凝劑 。 樣品得到后應立即處理測定 ， 如不能立即測定 ， 應置于 20℃ 以下冰箱中保存 。否則，應提高檢測方法的靈敏度，以降低采血量。從生理學角度分析，動物血液量占體重平均為 57%左右。每次采血量以能夠滿足 3次重復測定所需量為度。 在很少情況下 ， 未能在預定采樣間隔點采得樣品 ， 可利用線性插入法在相應時間點按下式補上數(shù)據(jù)： （ ） 其中 Cf為插入時間點 tf的相應濃度 ， C1和 C2分別表示插入時間點 tf前面的時間點 （ t1） 和 tf后面的時間點 （ t2） 的濃度 。 在進行生物利用度測定或藥物的生物等效性測定時 ， 如果是以血液為監(jiān)測指標 ， 則要求在最大血藥濃度出現(xiàn)后 ， 繼續(xù)采集 34個半衰期時間的樣品；如果是以尿液為監(jiān)測指標 ， 則要求在最大尿藥濃度出現(xiàn)后繼續(xù)采集 78個半衰期時間內(nèi)的樣品 。并在 2倍峰值左右安排一次采血。 靜注給藥后一般是在 5分鐘 、 10分鐘 、 15分鐘 、 30分鐘 、 1小時 、 2小時 、3小時 、 4小時 、 6小時 、 8小時 、 12小時 、 16小時 、 24小時 、 32小時 …… 時刻點各采血一次 ， 一直采到低于有效血藥濃度以下 ， 再繼續(xù)采集 12個血樣 。 （ 四 ） 樣品采集 藥物動力學收集體液的樣品通常為全血樣品 、 血清樣品 、 或血漿樣品 。 對于不溶性的藥物進行內(nèi)服給藥時 ， 可將藥物加助懸劑 （ 如淀粉 、 醋酸羧甲基纖維素等 ） 制成混懸液投服 。 作肌內(nèi)注射和口服給藥時 ， 配制的藥液濃度盡可能與常規(guī)用藥條件一致 ， 注意減少因濃度過高或濃度過低造成對吸收的影響 。 否則 ， 要重新選用動物再試 。 通常要求快速靜注的藥液體積要小 。 靜脈給藥通常包括快速靜脈注射和靜脈輸液。 如磺胺嘧啶 ， 包括磺胺嘧啶原粉 （ 酸基部分 ） 和磺胺嘧啶鈉 （ 成鹽成分 ） 。 ④ 直接采用重量單位表示 。 目前抗生素制品的劑量表示方式有如下幾種： ① 制劑標簽上的標示量直接以國際單位表示 ， 并加注重量單位 ， 如土霉素 25萬 IU， 相當于純堿 250mg。g = 10IU， 1g = 1000萬 IU。 重量折算單位：即以特定的純抗生素的某一重量為 1個國際單位 （ IU） ，此時 1181。實際取量時 ， 應根據(jù)制劑所標示的效價 ， 將藥品稀釋定容 ， 換算成體積量取 。抗生素劑量總是按其有效部分而標示的單位或重量計量的 。 如果高低兩種劑量的試驗結果所得到的動力學參數(shù)有顯著性差異 ， 則提示該藥物在高劑量時存在非線性藥物動力學特征 。 肌內(nèi)注射劑溶液的 pH值最好控制在 49之間 。 （ 三 ） 試驗藥品與給藥 試驗藥品 ⑴ 試驗藥品要選擇正規(guī)產(chǎn)品 ， 制劑的批號要在法定的有效期限內(nèi) 。 在一個試驗中 ， 各個試驗動物的禁食時間必須一致 。 飼料標準：藥物在動物體內(nèi)的過程受著各種因素的影響 。 冬天時注意給動物保暖 ， 夏天注意給動物降溫 。在獸醫(yī)藥物動力學研究中，要探討某種藥物某一途徑給藥后的藥物動力學特征，一般要求樣本數(shù)為，大動物（馬、牛、水牛、駱駝、鹿等） 57頭，中等動物（豬、綿羊、山羊等） 68頭；小動物（犬、貓、禽類、兔等） 812頭 (只 )。 如建立豬胸膜性肺炎病理模型 ， 要求對動物的年齡 ， 發(fā)病環(huán)境 ， 接種菌量作嚴格的限制 ， 甚至對某些生理生化指標也要求作定量和定性標準判定 。為了驗證動物是否屬臨床健康 ， 必要時可進行肝腎功能的化驗 。 即牛用藥物直接用牛作試驗 ， 雞用藥物直接用雞作試驗 ， 用于兩種或兩種以上的動物的藥物 ， 應分別在各種動物身上進行試驗 。 （ 一 ） 實驗動物 藥物在動物體內(nèi)的處置狀態(tài)表現(xiàn)有明顯的種屬 、 生理病理和年齡差異性等 ， 因此在選擇動物時應注意如下幾點： 所選擇的動物品種應該是某一藥品對該動物某種疾病有使用意義 。第九章 藥物動力學試驗設計與統(tǒng)計分析 藥物動力學屬于自然科學的范疇 ， 是一門理論與實驗性極強的科學 。 第一節(jié) 藥物動力學試驗設計 一 、 藥物動力學試驗專業(yè)設計 專業(yè)試驗設計通常包括實驗動物的選擇 、 實驗環(huán)境因素的確定 、 試驗藥品 、 給藥 、 采樣與血藥濃度的分析測定 。 獸醫(yī)藥物動力學試驗一般是直接選擇靶動物進行實驗 。 過幼 、 過老 、 瘦弱或過肥的動物盡量不用 。 其病理指標要盡可能做到一致性 。 試驗動物的數(shù)量：從統(tǒng)計學角度分析，當然動物的數(shù)量越多越好，因為 n越大，試驗的隨機誤差就越小。 禁止在過熱或過冷的溫度條件下進行動力學試驗 。 因此 ， 在以水生動物作試驗對象時 ， 應注意確定試驗的環(huán)境溫度及其水溫 ， 在試驗報告中應注明所進行實驗的溫度條件 。 在進行內(nèi)服給藥試驗時 ， 或進行藥物的生物利用度試驗時 ， 通常在給藥前給動物禁食 812小時 。 整個試驗期間 ， 應充分保證動物的飲水條件 ， 即做到飲水自由 。 包括附加劑的選擇如pH調(diào)節(jié)劑 ， 滲透壓調(diào)節(jié)劑 ， 抗氧劑 ， 金屬離子結合劑 。 高劑量應為動物的最大耐受量 ， 低劑量應為臨床使用的中等劑量或常用劑量 。 抗生素的效價換算必須清楚 。g） 相當于 1000國際單位 。g=1IU。 又如純多粘菌素B堿 1181。 制霉菌素等的單位也屬于特定單位 ， 以 1963年制定的第一個國際標準品 （ 本身并非純品 ）作為基準 ， 每稱重 1mg定為 3000IU。 如制霉菌素 。 問應稱取原料多少毫克 ？ 稱重 = 抗生素總單位數(shù) /效價 = 1000000IU/653IU/mg = 在劑量的確定時 ， 還應注明是藥物的堿基或酸基成分還是成鹽成分 。 給藥： 獸醫(yī)藥物動力學試驗研究中 ， 其給藥途徑通常包括靜脈給藥 ， 內(nèi)服給藥 、 肌內(nèi)注射 ， 皮下注射 ， 腹腔注射 ， 栓劑直腸給藥以及皮膚給藥 （ 透皮劑 ） 等 。容易理解，要將液體藥物注射到血液中形成 “ 液丸 ” ，其注射速度越快越好。 所以要求快速靜注動力學實驗時 ， 給藥注射時間至多在 1分鐘之內(nèi)注射完畢 。 并作恒速靜脈輸注 ， 中間的輸液速度不能改變 ， 以便于模型的建立與確定 。 對于家禽內(nèi)服給藥 ， 通常是通過導管將藥物投入嗉囊中 。 盡可能不使用麻醉藥品或其他藥物用于動物的保定 ， 以免干擾試藥的體內(nèi)過程 。一般說來靜脈給藥無吸收過程，在開始時，采血間隔時間要短，采血次數(shù)較多，這樣才能將藥物在體內(nèi)的變化過程基本反映出來。為了模型的擬合方便，在峰值血藥濃度前至少采血三次，為了反映藥物吸收達到的最大血藥濃度，盡可能在峰時左右多采集 12點的血樣。同樣，采血時間應一直延續(xù)到有效血藥濃度以下，然后再繼續(xù)采 12個血樣。 30秒。實際中，可根據(jù)檢測方法的靈敏度確定所需樣品的量。但對于小動物來說，采血量的多少就必須嚴格控制。 因此對于禽類的采血量每次應控制在 。 無論是全血 、 血漿和血清樣品在制取時均應避免溶血反應 。 抗凝劑通常有肝素 ， 草酸鹽 、 枸櫞酸鈉等 ， 但最好選用肝素 ， 因為肝素本身是血液中的成分 ， 其抗凝效果好 ， 用量低 ， 不會干擾血藥濃度的測定 。 為體外生化檢驗的抗凝劑 。 值得注意的是草酸根具有較強的還原性 ， 易受氧化還原影響的藥物不得用本品抗凝 。 乙二胺四乙酸 （ EDTA） ：常用其二鈉鹽 （ EDTANa2） ：每 ml血液加本品 。 在實踐中防止溶血應該做到：采血針頭與試管必須干燥潔凈；抗凝劑應按量添加到采血管中，并在干燥后使用；采血時注意輕輕轉(zhuǎn)動試管讓血液與抗凝劑混合，不得用力振搖；分離血漿或血清時，離心速度不得過快，以 1500r/min轉(zhuǎn)速即可。 尿藥的測定可用于藥物劑量的回收、藥物腎清除率及代謝物類型的研究。因此，實驗時，既要測定尿液的體積（排尿量），又要測定其中藥物或代謝物的含量。 放置時間較長則需要冷凍貯存 。 常用冷凍劑的配方有 : ⑴ NaCl: 冰塊 （ 33:100） ， 最低冷凍溫度為 21℃ ； ⑵ NH4Cl：冰塊 （ 25:100） ， 最低冷凍溫度為 15℃ ； ⑶ CaCl 6H2O：冰塊 （ 20:100） ， 最低冷凍溫度為 4℃ ；