植物組織培養(yǎng)基本操作-全文預(yù)覽
【正文】 530分鐘 易 很好 次氯酸鈉 2％ 530分鐘 易 很好 氯化汞 ％ 510分鐘 較難 最好 抗菌素 450mg／ L 3060分鐘 中 較好 酒精 7075% 易 好 過氧化氫 1012% 515分鐘 最易 好 三、外植體的接種 — 無菌接種 外植體的接種是把經(jīng)過表面滅菌后的植物材料切碎或分離出器官、組織、細(xì)胞、轉(zhuǎn)放到無菌培養(yǎng)基上的全部操作過程。 （ 3）接種用工具（解剖刀、剪刀、鑷子）可放入 7075%酒精中，使用時需火焰灼燒滅菌，冷卻后使用。 表面滅菌 （ 1） 操作人員穿戴滅菌過的工作服 、 口罩 。 ⑵ 采收 從生長健壯的無病蟲害的植株上選取發(fā)育正常的器官和組織 。 快速繁殖時應(yīng)在植株生長的最適時期取材 ， 花藥培養(yǎng)應(yīng)在花粉發(fā)育到單核期取材 。 植株管理中應(yīng)注意： ⑴ 避免昆蟲危害 許多昆蟲如蚜蟲 、 螨類和飛虱是許多植物病蟲害的傳播媒介 ， 會引起植物組織的潛在感染 。同時，生長在控制條件下的植物可以保持培養(yǎng)料間的一致性，提高實(shí)驗(yàn)的可重復(fù)性，也便于培養(yǎng)技術(shù)的規(guī)范。 一 、 植物材料的培養(yǎng)與取材 外植體 — 是指用于離體培養(yǎng)的活的植物組織、器官等材料，是植物離體培養(yǎng)的基礎(chǔ)材料。 貯存室要保持無菌 、 干燥 、 以免造成培養(yǎng)基的二次污染 。 取出培養(yǎng)基和器械冷卻 ， 貯存于 30℃ 以下室內(nèi) 。 封閉高壓滅菌鍋各出氣口 。 液態(tài)培養(yǎng)基不使用凝固劑，但需要在容器中置入適當(dāng)?shù)闹挝?，試管為培養(yǎng)容器的支撐物可用濾紙橋，底面積較大的培養(yǎng)容器，支撐物可選用脫脂棉等。 測試培養(yǎng)基溶液的 PH值 ()， 過高滴加 ， 過低滴加 NaOH調(diào)整 。 向加熱容器中加入稱量好的 瓊脂 （%） ， 攪拌加熱 ， 至完全溶化 。 KT和 BA等 細(xì)胞分裂素類： 先用少量 ， 再用蒸餾水定容至需要的體積 。 有機(jī)化合物 維生素 、 肌醇 、 氨基酸等一起配成 100或 200倍液 ，也可分別配制 。 制作培養(yǎng)基時根據(jù)需求制培養(yǎng)基數(shù)量取用母液 。 N6培養(yǎng)基為水稻等禾谷類花藥培養(yǎng)設(shè)計(jì)，KNO3和（ NH4） 2SO4含量高 ,不含鉬。 （ 二 ） 幾種常用培養(yǎng)基 細(xì)胞工程常用的基本培養(yǎng)基有： MS、 MT、 White、 Nitsch、 Blaydes、 N B NT、 SH、 Miller、 Heller等 。 繼代培養(yǎng)基 接種初代培養(yǎng)之后培養(yǎng)物的 培養(yǎng)基 。大部分抗生素需要過濾除菌。 ⑵活性炭 功能 常用的吸附劑，某些培養(yǎng)類型中，可以吸附培養(yǎng)過程中產(chǎn)生的一些有毒物質(zhì)（酚類物質(zhì)），有利于培養(yǎng)物的生長。 原生質(zhì)體培養(yǎng)、細(xì)胞培養(yǎng)及分生組織培養(yǎng)一般應(yīng)用雙蒸水或超純水 大批量快速繁殖培養(yǎng)，可用一般蒸餾水或純凈水。 植株的形態(tài)建成是 CTK和 IAA的比值調(diào)控的 CTK/IAA高，誘導(dǎo)愈傷組織形成芽 CTK/IAA低，誘導(dǎo)愈傷組織形成根 煙草在不同細(xì)胞分裂素與生長素濃度下的生理效應(yīng) ⑶赤霉素類 功能 促進(jìn)細(xì)胞伸長生長、誘導(dǎo)花芽形成、打破種子休眠以及誘導(dǎo)單性結(jié)實(shí)等。 常用 IAA、 IBA、 NAA、 2,4D。 ⑸ 氨基酸 蛋白質(zhì)的成分 ， 是有機(jī)氮化合物 ， 常用甘氨酸和多種氨基酸混合物如水解酪蛋白 、 水解乳蛋白 。 鹽酸硫胺素 VB 鹽酸吡哆醇 VB 煙酸 Vpp、生物素 VH、 維生素 CVc。 ⑴糖類 功能 離體培養(yǎng)物生長與發(fā)育不可缺少的有機(jī)成分，即作為碳源，又維持培養(yǎng)基的滲透壓在 。 一 、 培養(yǎng)基的成分 培養(yǎng)基一般包括無機(jī)鹽 、 有機(jī)化合物和生長調(diào)節(jié)劑三大基本組成成分 。當(dāng)苗完全成活后，再移向大田。 當(dāng)芽苗繁殖到一定數(shù)量后，再將一部分用于壯苗生根，另一部分保存或繼續(xù)擴(kuò)繁。 將消毒后的外植體在無菌條件下切割成一定大小的小塊，或剝離出莖尖、挑出花藥，接種到啟動培養(yǎng)基上。能夠識別各類培養(yǎng)基特點(diǎn)，熟悉 MS培養(yǎng)基成分；具有制作培養(yǎng)基能力，具有選擇外植體、表面滅菌、無菌接種等基本能力；具有植物組織培養(yǎng)條件控制基本能力；有進(jìn)行組培苗馴化練苗的基本能力。 具有植物組織培養(yǎng)基本操作程序的認(rèn)知。 （ 2）外植體的選擇與消毒 選擇合適的部位作為外植體，采回后經(jīng)過處理，然后進(jìn)行消毒處理。 （ 4）增殖培養(yǎng) 分化形成的芽、原球莖數(shù)量有限，采用適當(dāng)?shù)脑鲋撑囵B(yǎng)基經(jīng)反復(fù)多次切割轉(zhuǎn)接。 （ 6）煉苗移栽 選擇生長健壯，有 3～ 5條根的生根苗進(jìn)行煉苗，移栽到疏松透氣的基質(zhì)中，注意保溫、保濕、遮蔭。 培養(yǎng)基是根據(jù)植物生長所需營養(yǎng)成分 ， 配制成的供植物生長的人工制作的營養(yǎng)物質(zhì) 。 除 C、 H、 O外，其它礦質(zhì)元素通常以離子態(tài)吸收 N硝態(tài)氮和銨態(tài)氮 有機(jī)化合物 培養(yǎng)基中只有無機(jī)鹽叫做 基
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