高產(chǎn)γ-氨基丁酸乳酸菌的等離子誘變選育畢業(yè)論文-全文預覽
【正文】 。本次實驗是通過新型誘變方法 —— 常壓室溫等離子體（ ARTP）誘變育種系統(tǒng)。 本實驗為獲得生長較快且 GABA 產(chǎn)量高的菌株，但對突變菌株 OD 值進行測定與 GABA 的產(chǎn)量相關性表現(xiàn)不明顯，即 GABA 的產(chǎn)量較高的并沒有表現(xiàn)出較 高的 OD 值，因此，有待于進一步的誘變篩選。 L1201致死率測定 安徽工程大學畢業(yè)論文 徽工程大學畢業(yè) 設計（論文） 圖 45 L1201 的誘變致死率曲線 由圖 45 可以看出： L1201 乳酸菌經(jīng)過 ARTP 誘變處理后，乳酸菌誘變致死率隨著菌株誘變時間的增長而增大。乳酸菌 L1201 由于是乳酸菌 HX36 誘變選育后的穩(wěn)定高產(chǎn)菌株，L1201 乳酸菌的基因較 HX36 乳酸菌的基因可能發(fā)生改變，所以 L1201 乳酸菌生長曲線與 HX36 乳酸菌的生長曲線有所差別。 HX36 誘變后 GABA 含量的測定 安徽工程大學畢業(yè)論文 徽工程大學畢業(yè) 設計（論文） 圖 43 HX36 誘變后 GABA的產(chǎn)量 由圖 43 可以看出，經(jīng)過第一次誘變之后發(fā)現(xiàn)，與對照組相比大部分經(jīng)過誘變的菌株產(chǎn) GABA 的產(chǎn)量有所提高；其中 1201 GABA 的產(chǎn)量為 ；GABA 產(chǎn)量最高的突變菌株 l1201 較誘變前產(chǎn)量提高 %。 第 4 章 結(jié)果與討論 乳酸菌 HX36 ARTP 誘變結(jié)果 安徽工程大學畢業(yè)論文 徽工程大學畢業(yè) 設計（論文） HX36 生長曲線的測定 圖 41 HX36 的生長曲線 圖表分析： 乳酸菌 HX36 乳酸菌經(jīng)過活化處理后，使用分光光度計在 A600 條件下制成 HX36 乳酸菌生長曲線如圖 41 所示， 由圖可以看出，菌體在接種培養(yǎng)后經(jīng)過短暫的適應期進入對數(shù)生長期，約在 18h 左右進入對數(shù)后期，此期間菌體生長代謝旺盛且穩(wěn)定是誘變的最佳時機。再依次分別加入 1mol/L 的碳酸鈉溶液， ， 6%的重蒸苯酚 ，混勻后加入次氯酸鈉 (NaClO)溶液 2mL，混勻后放置 4～ 8 分鐘，然后沸水浴 10min，立即冰浴 20min，待溶液出現(xiàn)藍綠色后，加入 4mL 60%的乙醇溶液，混勻后室溫 3 放置 20min，待上述溶液制作好后，從每組溶液中吸取 200μL 加入到酶標板上，用酶標儀在 640nm 條件下對每組溶液進行 GABA 的含量測定；用酶標儀測定 GABA 的標準。 （ 3）突變菌株的復篩 ：對突變菌株利用發(fā)酵培養(yǎng)基進行復篩，發(fā)酵條件為裝液量 50mL 的 250mL 的三角瓶。 （ 3） ARTP 致死率的計算：培養(yǎng) 72h 后對平板上的菌落進行計數(shù)，并與相對應濃度的對照組菌落數(shù)目進行對照，按照公式：致死率 =（對照組 誘變菌落數(shù)） /對照菌落數(shù)，計算致死率。 用鑷子將待處理樣品載片放置到旋轉(zhuǎn)定位臺上方菌片固定圓形凹槽內(nèi)，之后調(diào)節(jié)旋轉(zhuǎn)定位臺高度，使待處理樣品距離等離子體發(fā)生器出口為 3 mm，樣品放置完畢后，關閉操作室門，選擇照射時間。 同時用 pH 計對乳酸菌菌懸液的 pH 值進行測定。 （ 6）硼酸緩沖液 硼砂和 硼酸溶解后定容至 100mL。l精密微量移液器 1000181。 本課題主要研究的內(nèi)容 （ 1)本實驗對實驗室已篩選出的產(chǎn) γ 氨基丁酸的乳酸菌進行常溫室壓等離子體誘變，并使用梯度平板對誘變株進行初步篩選。 隨著 GABA 的生理功能特性逐漸被人類認識，利用 GABA 的富集技術(shù)開發(fā)富含GABA 的保健食品必將是一個很有潛力的研究領域，化學合成 GABA 安全性較差，植物富集 GABA 含量不高，利用生物合成法中的微生物 (乳酸菌 )發(fā)酵生產(chǎn) GABA 顯示了廣闊的開發(fā)前景 [15]。 清華大學等離子體健康科技研究組（工程物理系）、環(huán)境生物技術(shù)實驗室（化學工程系）聯(lián)合北京思清源生物科技有限公司，采用國際先進的常壓低溫等離子體產(chǎn)生技術(shù)，結(jié)合近幾年的最新研究成果與自動控制方法，聯(lián)合研制出第二代 ARTP生物育種機。基礎實驗研究表明，常壓低溫等離子體中的高濃度活性粒子能夠作用于微生物的遺傳物質(zhì)，使其在短時間內(nèi)產(chǎn)生致畸突變，是一種效果良好的誘變源 [12]。 最近，日本科學家利用米胚芽等原料開發(fā)制造的富含 GABA 的 功能食品配料 ，已經(jīng)廣泛地應用于飲料、果醬、糕點、餅干、調(diào)味料等制品中。用 Gabaron 茶飲料飼喂患 原發(fā)性高血壓 的小白鼠，數(shù)周內(nèi)發(fā)現(xiàn)其血壓由 175180mmHg 降低至 150mmHg，同時并未發(fā)現(xiàn)小白鼠的其它任何生理異?，F(xiàn)象 [9]。 ARTP 是近幾年來發(fā)展起來的一種等離子體源，能夠在大氣壓下產(chǎn)生溫度在 2540℃ 之間的、具有高活性粒子濃度的等離子體射流 ，等離子體具有氣溫低、電子溫度高的非平衡特性以及活性離子濃度高的特點。但是紫外誘變育具有育種過程繁重，誘變 效果差等問題。因此對其作用機理、制備研究己經(jīng)成為一個熱點。Ferment 。 最終得到穩(wěn)定高產(chǎn) GABA 的乳酸菌突變菌株 90s高 2 產(chǎn) GABA比誘變前的 HX36菌株產(chǎn)量提高 %。 高產(chǎn) γ 氨基丁酸乳酸菌的等離子誘變選育 葉楊 （安徽工程大學生物化學工程學院，蕪湖 241000） 摘 要 γ 氨基丁酸（ γ amino butyric acid，簡稱 GABA )是廣泛分布于自然界的一種非蛋白質(zhì)氨基酸，具有鎮(zhèn)痛、促進生長激素分泌及預防老年癡呆等生理功能。以突變株 L1201為出發(fā)菌株進行 ARTP 誘變，得的穩(wěn)定突變株 90s高 2產(chǎn)量達到，較誘變前產(chǎn)量 ()提高 %。GABA 。在動物中， GABA 作為哺乳動物中樞神經(jīng)系統(tǒng)一種主要的抑制性神經(jīng)遞質(zhì)，參與腦循環(huán)生理活動，具有降低血壓、治療癲病、鎮(zhèn)靜安神、促進睡眠、增強記憶力、控制哮喘、調(diào)節(jié)激素分泌、促進生殖、腎肝功能活化等功能，被廣泛的應用于食品、醫(yī)藥等工業(yè)。 在食品和醫(yī)藥工業(yè)中，利用公認的安全性益生菌 —— 乳酸菌進行發(fā)酵生產(chǎn)GABA 具有更廣泛的前景，目前工業(yè)生產(chǎn)的 GABA 產(chǎn)量較低 [4， 5]，故為提高 GABA產(chǎn)量本實驗采用等離子誘變?nèi)樗峋N選育 紫外線是一種最常用有效的物理誘變因素，其誘變效應主要是由于它引起 DNA結(jié)構(gòu)的改變而形成突變型 [6]。 本實驗采用一種新型微生物誘變育種方法 常壓室溫等離子體（ ARTP)誘變育種系統(tǒng)。 第一章 緒論 γ 氨基丁酸的研究現(xiàn)狀 GABA 在食品中的研究和應用始于上世紀八十年代中期，應用產(chǎn)品以日本茶飲料 Gabaron 為代表。神經(jīng)生理及神經(jīng)醫(yī)學的研究表明 GABA是一種重要的活性物質(zhì)，在人腦中，雖然 GABA 可由腦部的谷氨酸在專一性較強的谷氨酸脫羧酶 作用下轉(zhuǎn)化而成，但是年齡的增長和精神壓力的加大使 GABA 的積累異常困難，而通過日常飲食補充可有效改善這種狀況，從而促進人體健康 [11]。 常壓室溫等離子誘變系統(tǒng) ARTP 生物育種基本原理 常壓低溫等離子體是近幾年才開 始研究的一種新型等離子體源，具有氣體溫度低、活性粒子濃度高、能量高、操作簡便等優(yōu)點。 微生物的
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