沙門菌檢驗(yàn)技術(shù)和方法-全文預(yù)覽
【正文】 、乳糖、蔗糖 )、甘露醇、山梨醇、衛(wèi)茅醇、水楊苷、ONPG。試驗(yàn)失敗的主要原因是封口不嚴(yán)，氰化鉀逐漸分解，生成氫氰酸氣體逸出，以致藥物濃度降低細(xì)菌生長，呈假陽性反應(yīng)。本試驗(yàn)常用于沙門菌與檸檬酸桿菌的鑒定。 ? 沙門菌的反應(yīng)：陰性。 ? 原理：細(xì)菌分解蛋白胨中色氨酸，生成靛基質(zhì)，與對二氨基苯甲醛作用，形成玫瑰吲哚而呈紅色。 注：本試驗(yàn)的陽性反應(yīng)為培養(yǎng)基不改變顏色 ,而培養(yǎng)基變黃色者為陰性反應(yīng)。 沙門菌在 TSI瓊脂上的反應(yīng) 斜面 底層 產(chǎn)氣 H2S 可能的菌屬和種 – + +/– + 沙門菌屬、弗勞地氏檸檬酸桿菌、變形桿菌屬、緩慢愛德華氏菌 + + +/– + 沙門菌、弗勞地氏檸檬酸桿菌、普通變形桿菌 – + – – 傷寒沙門菌、雞沙門菌、志賀菌屬、大腸埃希氏菌、蜂窩哈夫尼亞菌、摩根氏菌、普羅菲登斯菌屬 – + + – 沙門菌屬、大腸埃希氏菌、蜂窩哈夫尼亞菌、摩根氏菌、普羅菲登斯菌屬 + – + – +/– – – – 非沙門菌 賴氨酸脫羧酶試驗(yàn) ? 賴氨酸脫羧酶試驗(yàn)培養(yǎng)基：蛋白胨、酵母浸膏、葡萄糖、溴麝香草酚藍(lán)（紫）。 ? TSI的主要成分：蛋白胨、乳糖、蔗糖、葡萄糖、硫酸亞鐵銨、硫代硫酸鈉、酚紅、瓊脂。 沙門菌顯色培養(yǎng)基 ? 沙門菌顯色培養(yǎng)基主要用于快速篩選、分離沙門菌。 2小時(shí)后，沒有出現(xiàn)典型菌落，則不挑取任何菌落，讓平板繼續(xù)培養(yǎng) 24177。 HE和 XLD平板經(jīng) 24177。因這些培養(yǎng)基尚有抑制志賀菌屬生長的潛在因素，故本培養(yǎng)基是分離鑒定沙門菌及志賀菌屬的可靠培養(yǎng)基。 沙門菌的分離培養(yǎng)基 ? HE瓊脂：在保證細(xì)菌所需營養(yǎng)的基礎(chǔ)上，加入了一些抑制劑，如：膽鹽、檸檬酸鹽、去氧膽酸鈉等，可抑制某些腸道致病菌和革蘭氏陽性菌的生長，但對革蘭氏陰性的腸道致病菌則無抑制作用。該培養(yǎng)基制備過程不宜過分加熱，以免降低其選擇性，應(yīng)在臨用時(shí)配制，超過 48h不宜使用。 沙門菌的增菌液 ? 四硫磺酸鈉煌綠增菌液 (TTB)：含有膽鹽，抑制革蘭氏陽性球菌和部分大腸埃希氏菌的生長，而傷寒與付傷寒沙門菌仍能生長。 －表示陰性。 如有 2項(xiàng)異常為非沙門氏菌。其他反應(yīng)結(jié)果均有沙門菌屬的可能，同時(shí)也均有不是沙門菌的可能。 ? 接種針在接種 TSI后 不要滅菌 ，直接接種賴氨酸脫羧酶試驗(yàn)培養(yǎng)基和營養(yǎng)瓊脂平板，于 36 ℃ 177。于 36 ℃ 177。 ? 分別用接種環(huán)取增菌液 1環(huán) , 劃線接種于一個(gè) BS瓊脂平板和一個(gè) XLD瓊脂平板（或 HE瓊脂平板或顯色培養(yǎng)基平板）。 前增菌 ? 輕輕搖動(dòng)培養(yǎng)過的樣品混合物，移取 1 mL, 轉(zhuǎn)種于 10 mL TTB 內(nèi) , 于 42 ℃ 177。若樣品為液態(tài)，不需要均質(zhì)，振蕩混勻。 1℃ 40~48h 36177。 ? 血清學(xué)鑒定中的菌體分群改為選擇性試驗(yàn)項(xiàng)目。 ? 生化鑒定： API 20E或 Vitek GNI為傳統(tǒng)生化鑒定方法的選擇性替代方法。 ? 樣品液增加調(diào)整 pH值。 修訂內(nèi)容 ? 前增菌 :取消樣品分類，前增菌液統(tǒng)一為“緩沖蛋白胨水”。 沙門菌的分布 ? 沙門菌廣泛存在于自然環(huán)境中。菌落中等大小，半透明，表面光滑，邊緣整齊或呈鋸齒狀。 ? 大?。?1~3um ~1um。 ? 非傷寒沙門菌 食品衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)的檢測的主要對象。我國自 1911年至90年代初已有 255個(gè)血清型。沙門菌檢驗(yàn) 沙門菌 概況 ? 沙門菌是 1885年由 Salmon氏等在豬霍亂流行時(shí)，分離出的豬霍亂沙門菌，由于 Salmon氏對本屬細(xì)菌的發(fā)現(xiàn)貢獻(xiàn)卓越，故定名為沙門菌屬。血清型繁多，目前已發(fā)現(xiàn)的沙氏菌有 2500多個(gè)血清型和變種。 分類： ? 傷寒沙門菌 (傷寒、副傷寒 )傳染病防治法中規(guī)定報(bào)告的乙類傳染病。為周身鞭毛，并多數(shù)有菌毛。 ? 在普通腸道選擇性平板上基本上形成無色菌落。 ? 耐受膽鹽，在糞便、土壤、食品、水中可生存 5個(gè)月至二年之久。 ? 沙門菌在肉類中不分解蛋白質(zhì)，不產(chǎn)生靛基質(zhì)，所以當(dāng)食品污染了沙門菌后，通常沒有感官性狀的改變。 ? 修改了樣品的處理方式： 增加拍擊式均質(zhì)器，均質(zhì)袋可直接培養(yǎng)。取消 DHL、 SS。本部分還增加了對疑似菌落進(jìn)行留樣確認(rèn)的部分，以備必要時(shí)復(fù)查，這對生化鑒定不確定的菌落進(jìn)行進(jìn)一步驗(yàn)證是非常必要的 。 1℃ 1mL檢樣＋ TTB10mL 1mL檢樣＋ SC10mL BS XLD(或 HE、顯色培養(yǎng)基 ) 36177。 1℃ ， 18~24h 沙門菌的檢驗(yàn)程序 可疑菌落 TSI（斜面、底層、產(chǎn)氣、 H2S），蛋白胨水（靛基質(zhì)），尿素（ )， KCN，賴氨酸、營養(yǎng)瓊脂 (NA) H2S＋， 靛基質(zhì)－ 尿素－，KCN－ 賴氨酸＋ H2S＋，靛基質(zhì) ＋ 尿素－， KCN－ 賴氨酸＋ H2S－，靛基質(zhì)－ 尿素－， KCN－ 賴氨酸＋ /－ 非如左述的各種反應(yīng)結(jié)果 甘露醇 +，山梨醇 + ONPG＋ 非沙門菌 血清學(xué)鑒定 報(bào)告 商品化生化鑒定系統(tǒng) ? 稱取 25 g（ mL）樣品放入盛有 225 mL BPW的無菌均質(zhì)杯中，以 8 000 r/min～ 10 000 r/min均質(zhì) 1 min～ 2 min，或置于盛有 225 mL BPW的無菌均質(zhì)袋中，用拍擊式均質(zhì)器拍打 1 min～ 2 min。 ? 如為冷凍產(chǎn)品 ,應(yīng)在 45 ℃ 以下不超過 15 min,或 2 ℃ ～ 5 ℃ 不超過 18 h解凍。 1 ℃ 培養(yǎng) 18 h～ 24 h。 增菌與分離 沙門氏菌屬在不同選擇性瓊脂平板上的菌落特征 選擇性瓊脂平板 沙門氏菌 BS瓊脂 菌落為黑色有金屬光澤、棕褐色或灰色 , 菌落周圍培養(yǎng)基可呈黑色或棕色；有些菌株形成灰綠色的菌落 , 周圍培養(yǎng)基不變 HE瓊脂 藍(lán)綠色或藍(lán)色 , 多數(shù)菌落中心黑色或幾乎全黑色；有些菌株為黃色 , 中心黑色或幾乎全黑色； XLD瓊脂 菌落呈粉紅
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