沙門(mén)菌檢驗(yàn)技術(shù)和方法(已修改)
2025-08-31 11:46 本頁(yè)面
【正文】 沙門(mén)菌檢驗(yàn) 沙門(mén)菌 概況 ? 沙門(mén)菌是 1885年由 Salmon氏等在豬霍亂流行時(shí)，分離出的豬霍亂沙門(mén)菌，由于 Salmon氏對(duì)本屬細(xì)菌的發(fā)現(xiàn)貢獻(xiàn)卓越，故定名為沙門(mén)菌屬。 ? 沙門(mén)菌屬是腸桿菌科中最重要的病原菌。它是一群抗原結(jié)構(gòu)、生化特性相似的革蘭氏陰性桿菌。血清型繁多，目前已發(fā)現(xiàn)的沙氏菌有 2500多個(gè)血清型和變種。我國(guó)自 1911年至90年代初已有 255個(gè)血清型。 ? 雖然沙門(mén)菌的血清型很多，但多數(shù)國(guó)家從人體、動(dòng)物和食品中分離出沙門(mén)菌僅約 40~50個(gè)血清型。而在一個(gè)國(guó)家中的一定時(shí)期只約有 10個(gè)血清型是比較常見(jiàn)的。 分類(lèi)： ? 傷寒沙門(mén)菌 (傷寒、副傷寒 )傳染病防治法中規(guī)定報(bào)告的乙類(lèi)傳染病。 ? 非傷寒沙門(mén)菌 食品衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)的檢測(cè)的主要對(duì)象。 沙門(mén)菌的生物學(xué)特性 形態(tài)與染色性： ? 革蘭氏陰性桿菌，無(wú)芽胞 ,一般無(wú)莢膜。 ? 除雞瘟沙門(mén)菌（ )和雞沙門(mén)菌()外均有動(dòng)力。為周身鞭毛，并多數(shù)有菌毛。 ? 大?。?1~3um ~1um。 ? 營(yíng)養(yǎng)需求不高，需氧或兼性厭氧。普通營(yíng)養(yǎng)培養(yǎng)基上均能生長(zhǎng)，能夠利用檸檬酸鹽作為碳源。 ? 在普通腸道選擇性平板上基本上形成無(wú)色菌落。菌落中等大小，半透明，表面光滑，邊緣整齊或呈鋸齒狀。 ? 不分解乳糖，大部分菌株產(chǎn) H2S，發(fā)酵葡萄糖產(chǎn)酸不產(chǎn)氣。 培養(yǎng)與生化特性 ? 最適培養(yǎng)溫度為 37℃ ，最適 pH ～ 。 ? 耐受膽鹽，在糞便、土壤、食品、水中可生存 5個(gè)月至二年之久。 沙門(mén)菌的分布 ? 沙門(mén)菌廣泛存在于自然環(huán)境中。 ? 通過(guò)沙門(mén)菌病患者或健康帶菌的人和動(dòng)物的排泄物污染環(huán)境和食品。 ? 易于污染的高危食物：畜禽肉類(lèi)、蛋、奶及其制品。 ? 沙門(mén)菌在肉類(lèi)中不分解蛋白質(zhì)，不產(chǎn)生靛基質(zhì)，所以當(dāng)食品污染了沙門(mén)菌后，通常沒(méi)有感官性狀的改變。 修訂內(nèi)容 ? 前增菌 :取消樣品分類(lèi)，前增菌液統(tǒng)一為“緩沖蛋白胨水”。 ? 對(duì)所有樣品均進(jìn)行 8~18h前增菌。原標(biāo)準(zhǔn)只對(duì)凍肉、蛋品、乳品等加工食品進(jìn)行前增菌。 ? 修改了樣品的處理方式： 增加拍擊式均質(zhì)器，均質(zhì)袋可直接培養(yǎng)。 ? 樣品液增加調(diào)整 pH值。 ? 選擇性增菌：使用“ TTB、 SC”，取消“ MM”。 ? 分離培養(yǎng)基：使用 BS、 XLD、 HE、科瑪嘉顯色培養(yǎng)基。取消 DHL、 SS。 ? 生化鑒定： API 20E或 Vitek GNI為傳統(tǒng)生化鑒定方法的選擇性替代方法。 ： ? 原國(guó)標(biāo)中生化鑒定是將可疑菌落同時(shí)接種于三糖鐵（ TSI）瓊脂、蛋白胨水 (供做靛基質(zhì)試驗(yàn) )、尿素瓊脂 ()、氰化鉀 (KCN) 培養(yǎng)基和賴(lài)氨酸脫羧酶試驗(yàn)培養(yǎng)基； ? 現(xiàn)修改為：在接種 TSI瓊脂和賴(lài)氨酸脫羧酶試驗(yàn)培養(yǎng)基的同時(shí)增加一項(xiàng)營(yíng)養(yǎng)瓊脂（ NA），經(jīng) TSI瓊脂和賴(lài)氨酸脫羧酶試驗(yàn)培養(yǎng)基的選擇后，可篩掉大部分非沙門(mén)氏菌株，大大減少了工作量，同時(shí)也滿(mǎn)足了 API 20E或 Vitek GNI鑒定的需要。 ? 為保持與原標(biāo)準(zhǔn)的一致性，新標(biāo)準(zhǔn)也保留了可以同時(shí)直接接種蛋白胨水 (供做靛基質(zhì)試驗(yàn) )、尿素瓊脂 ()、 KCN 培養(yǎng)基的內(nèi)容。本部分還增加了對(duì)疑似菌落進(jìn)行留樣確認(rèn)的部分，以備必要時(shí)復(fù)查，這對(duì)生化鑒定不確定的菌落進(jìn)行進(jìn)一步驗(yàn)證是非常必要的 。 ? 血清學(xué)鑒定中的菌體分群改為選擇性試驗(yàn)項(xiàng)目。 ? 報(bào)告：綜合以上生化試驗(yàn)和血清學(xué)鑒定的結(jié)果 ,報(bào)告 25g樣品中檢出或未檢出沙門(mén)菌。 培養(yǎng)基的改變 舊標(biāo)準(zhǔn) 前增菌： BPW 增菌： MM(或 TTB)、SC 分離培養(yǎng)： BS、DHL(或 HE、 WS、SS) 生化鑒定：生化管 新標(biāo)準(zhǔn) 前增菌： BPW 增菌： TTB、 SC 分離培養(yǎng)： BS、 XLD、顯色培養(yǎng)基 生化鑒定：生化管、API 20 E生化鑒定試劑盒、 VITEK GNI＋ 生化鑒定卡 沙門(mén)菌的檢驗(yàn)程序 檢樣 前增菌法 25g樣品＋ BPW225mL 8~18h 36177。 1℃ 1mL檢樣＋ TTB10mL 1mL檢樣＋ SC10mL BS XLD(或 HE、顯色培養(yǎng)基 ) 36177。 1℃ 40~48h 36177。 1℃ 18~24h 挑取可疑菌落 42177。 1℃ ， 18~24h 36177。 1℃ ， 18~24h 沙門(mén)菌的檢驗(yàn)程序 可疑菌落 TSI（斜面、底層、產(chǎn)氣、 H2S），蛋白胨水（靛基質(zhì)），尿素（ )， KCN，賴(lài)氨酸、營(yíng)養(yǎng)瓊脂 (NA) H2S＋， 靛基質(zhì)－ 尿素－，KCN－ 賴(lài)氨酸＋ H2S＋，靛基質(zhì) ＋ 尿素－， KCN－ 賴(lài)氨酸＋ H2S－，靛基質(zhì)－ 尿素－， KCN－ 賴(lài)氨酸＋ /－ 非如左述的各種反應(yīng)結(jié)果 甘露醇 +，山梨醇 + ONPG＋ 非沙門(mén)菌 血清學(xué)鑒定 報(bào)告 商品化生化鑒定系統(tǒng) ? 稱(chēng)取 25 g（ mL）樣品放入盛有 225 mL BPW的無(wú)菌均質(zhì)杯中，以 8 000 r/min～ 10 000 r/min均質(zhì) 1 min～ 2 min，或置于盛有 225 mL BPW的無(wú)菌均質(zhì)袋中，用拍擊式均質(zhì)器拍打 1 min～ 2 min。若樣品為液態(tài)，不需要均質(zhì)，振蕩混勻。無(wú)菌操作將樣品轉(zhuǎn)至 500 mL錐形瓶中，如使用均質(zhì)袋，可直接進(jìn)行培養(yǎng)，于 36 ℃ 177。 1 ℃ 培養(yǎng) 8 h～ 18h。 ? 如為冷凍產(chǎn)品 ,應(yīng)在 45 ℃ 以下不超過(guò) 15 min,或 2 ℃ ～ 5 ℃ 不超過(guò) 18 h解凍。 前增菌 ? 輕輕搖動(dòng)培養(yǎng)過(guò)的樣品混合物，移取 1 mL, 轉(zhuǎn)種于 10 mL TTB 內(nèi) , 于 42 ℃ 177。 1 ℃ 培養(yǎng) 18 h～ 24 h。同時(shí) , 另取 1 mL, 轉(zhuǎn)種于 10 mL SC內(nèi) , 于 36 ℃ 177。 1 ℃ 培養(yǎng) 18 h～ 24 h。 ? 分別用接種環(huán)取增菌液 1環(huán) , 劃線(xiàn)接種于一個(gè) BS瓊脂平板和一個(gè) XLD瓊脂平板（或 HE瓊脂平板或顯色培養(yǎng)基平板）。于 36 ℃ 177。 1 ℃ 分別培養(yǎng) 18 h～ 24 h (XLD瓊脂平板、 HE瓊脂平板、顯色培養(yǎng)基平板 ) 或 40 h～ 48 h (
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