不同類型細胞的培養(yǎng)特點(文件)
【正文】 第六章 個別細胞和組織的培養(yǎng)。 第六十六頁，共七十頁。 2．生長因子： ? 應用促細胞生長因子，向培養(yǎng)液中增加一種或幾種促細胞生長因子。最近也有人應用特殊化學物如 SOD 抑制成纖維細胞生長的方法。如成纖維細胞末被除凈，可再次重復。用此法處理后， 成纖維細胞比腫瘤細胞易先脫落 ，經(jīng)過幾次反復處理，可能把成纖維細胞除凈。如操作成功，次日觀察可見 A 瓶主要為成纖維細胞， B 瓶兩類細胞相雜， C 瓶可能主要為癌細胞。 第六十頁，共七十頁。因此排除成纖維細胞成為腫瘤細胞培養(yǎng)中的關鍵。 ? 培養(yǎng)腫瘤細胞仍需加血清和相關生長因子培養(yǎng)更易成功。 第五十七頁，共七十頁。 初代培養(yǎng)應用組織塊和消化培養(yǎng)法均可。 第二節(jié) 腫瘤細胞培養(yǎng) ?腫瘤細胞在組織培養(yǎng)中占有核心的位置，首先癌細胞是比較容易培養(yǎng)的細胞，當前建立的細胞系中癌細胞系是最多的。 (3)濾過、計數(shù)、接種：向末次沉降物中參加適量營養(yǎng)液，通過紗網(wǎng)或紗布濾過，計數(shù)細胞并調整好細胞密度，接種入培養(yǎng)瓶或皿中，置 5％ C02 溫箱中培養(yǎng)； (4)傳代：細胞生長集合后，可用 ％胰蛋白酶消化法做傳代處理。 ? (二 ) 傳代培養(yǎng) ? 神經(jīng)膠質細胞是神經(jīng)組織中比較容易培養(yǎng)的成分。 人腦膠質瘤細胞 第四十九頁，共七十頁。 第四十七頁，共七十頁。 乳鼠心肌細胞原代培養(yǎng) 第四十五頁，共七十頁。 ? [程序 ] ? (1) 選新鮮受精雞卵，置溫箱中孵育 (溫箱中放有水槽，以維持箱內(nèi)濕度 )；每日翻動一次 (180 度 )，孵育 9 ~ 12 天； ? (2) 取雞胎； ? (3) 用眼科剪剪開胸腔，剝出心臟，置入皿中用 Hanks 液漂洗1 ~ 2 次； ? (4) 小心剪除大的動靜脈，保存心室肌；用組織塊或消化培養(yǎng)法均可。 第四十二頁，共七十頁。 明膠制備比較簡單，常用 Hanks 液配的 ％明膠。 (一 ) 骨骼肌細胞培養(yǎng) ? 動物胚或幼體的 大腿肌組織為最好的培養(yǎng)材料 。 (5) 用針頭輕輕挑起腹壁，使動物體微傾向一側，使腹腔中液體集于針頭下吸取入針管內(nèi)； (6) 小心拔出針頭，把液體注入離心管中， (4℃ )離心 10 分鐘后，去上清，加 10 ml Eagle 培養(yǎng)基； (7) 計數(shù)細胞，每只小鼠可產(chǎn)生 20 ~ 30 106 細胞，其中90％為巨噬細胞； (8) 為獲取 3 105 個貼附細胞／平方厘米，需接種 106／ m1； (9) 為純化培養(yǎng)細胞，去除其它白細胞，接種數(shù)小時后，去除培養(yǎng)液，用 Eagle 液沖洗 1 ~ 2 次后，再加新Eagle 培養(yǎng)液置 37℃ CO2 溫箱中培養(yǎng)。 第三十七頁，共七十頁。 第三十六頁，共七十頁。 (二 ) 巨噬細胞培養(yǎng) ? 巨噬細胞屬免疫細胞，有多種功能，是研究細胞吞噬、細胞免疫和分子免疫學的重要對象。 ?在培養(yǎng) ES細胞時，應選擇第 3~5代的小鼠成纖維細胞作為飼養(yǎng)層細胞。 ?用人或動物胚體為好；動物可用小鼠或雞胚，去頭和內(nèi)臟，剪成小碎塊后，用胰蛋白酶消化法培養(yǎng)；如為人胚，可取皮膚培養(yǎng)。 (3) 用培養(yǎng)液漂洗兩次，以去除漂浮細胞； (4) 剩余內(nèi)皮細胞島如小 (5 ~ 20 個細胞 ) 而少時，生長增殖常變得緩慢或完全不生長，此時需參加 3T3等飼細胞；飼細胞接種量為 4000 細胞／ cm2； (5) 當內(nèi)皮細胞充滿所有飼細胞空間后，用胰蛋白酶消化、離心、參加腫瘤條件培養(yǎng)基； (6) 接種入明膠底物皿中繼續(xù)培養(yǎng) (飼細胞死亡被淘汰 )，細胞增殖生長集合后，按 1:5 傳代。 (5)再離心：沉淀物用培養(yǎng)液重懸并離心，再重懸，再離心，共兩次； (6) 制細胞懸液：末次沉淀物仍用含 10％小牛血清的 Dulbecco 改進 Eag1e 氏培養(yǎng)液重懸后，稍吹打； (7)接種：接種入鋪有明膠底層的培養(yǎng)皿中， 37℃ 培養(yǎng)；在培養(yǎng)頭 1 ~ 3 小時中，毛細血管小段和內(nèi)皮細胞最先貼附于底物上，而腎上腺細胞和成纖維細胞卻仍在培養(yǎng)液中漂??； (8)換液：吸除培養(yǎng)液，再參加腫瘤條件培養(yǎng)液；每兩天換液一次。 (3) 在細胞生長接近完全集合時，收集培養(yǎng)液制成條件培養(yǎng)基；再用含 10％小牛血清的新培養(yǎng)液后，也每隔兩天收集一次，可獲多量條件培養(yǎng)基； (4) 4000 轉／別離心后，再通過 微孔濾膜濾過， 20℃ 凍存?zhèn)溆?(臨用前融解 )。 第二十三頁，共七十頁。 第二十一頁，共七十頁。 第十九頁，共七十頁。 (1) 無菌解剖動物，取出肝臟，先用 BSS 洗除血污； (2) 取 5ml 注射器一支，吸取消化液后，把 注射器頭輕輕插入肝管中 ，用線繩結扎牢固，以防消化液漏出，輕輕把消化液注入膽管系統(tǒng)，并不時輕柔壓肝臟，以便消化液進入肝小葉中； 消化液在肝內(nèi)停留 20~ 30 分后，在吸出消化液的同時并輕柔壓肝臟，以使肝細胞脫落和消化液吸出； 第十七頁，共七十頁。肝組織易于貼壁，生
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