不同類型細(xì)胞的培養(yǎng)特點(diǎn)(文件)
【正文】 第六章 個(gè)別細(xì)胞和組織的培養(yǎng)。 第六十六頁(yè)，共七十頁(yè)。 2．生長(zhǎng)因子： ? 應(yīng)用促細(xì)胞生長(zhǎng)因子，向培養(yǎng)液中增加一種或幾種促細(xì)胞生長(zhǎng)因子。最近也有人應(yīng)用特殊化學(xué)物如 SOD 抑制成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)的方法。如成纖維細(xì)胞末被除凈，可再次重復(fù)。用此法處理后， 成纖維細(xì)胞比腫瘤細(xì)胞易先脫落 ，經(jīng)過幾次反復(fù)處理，可能把成纖維細(xì)胞除凈。如操作成功，次日觀察可見 A 瓶主要為成纖維細(xì)胞， B 瓶?jī)深惣?xì)胞相雜， C 瓶可能主要為癌細(xì)胞。 第六十頁(yè)，共七十頁(yè)。因此排除成纖維細(xì)胞成為腫瘤細(xì)胞培養(yǎng)中的關(guān)鍵。 ? 培養(yǎng)腫瘤細(xì)胞仍需加血清和相關(guān)生長(zhǎng)因子培養(yǎng)更易成功。 第五十七頁(yè)，共七十頁(yè)。 初代培養(yǎng)應(yīng)用組織塊和消化培養(yǎng)法均可。 第二節(jié) 腫瘤細(xì)胞培養(yǎng) ?腫瘤細(xì)胞在組織培養(yǎng)中占有核心的位置，首先癌細(xì)胞是比較容易培養(yǎng)的細(xì)胞，當(dāng)前建立的細(xì)胞系中癌細(xì)胞系是最多的。 (3)濾過、計(jì)數(shù)、接種：向末次沉降物中參加適量營(yíng)養(yǎng)液，通過紗網(wǎng)或紗布濾過，計(jì)數(shù)細(xì)胞并調(diào)整好細(xì)胞密度，接種入培養(yǎng)瓶或皿中，置 5％ C02 溫箱中培養(yǎng)； (4)傳代：細(xì)胞生長(zhǎng)集合后，可用 ％胰蛋白酶消化法做傳代處理。 ? (二 ) 傳代培養(yǎng) ? 神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞是神經(jīng)組織中比較容易培養(yǎng)的成分。 人腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞 第四十九頁(yè)，共七十頁(yè)。 第四十七頁(yè)，共七十頁(yè)。 乳鼠心肌細(xì)胞原代培養(yǎng) 第四十五頁(yè)，共七十頁(yè)。 ? [程序 ] ? (1) 選新鮮受精雞卵，置溫箱中孵育 (溫箱中放有水槽，以維持箱內(nèi)濕度 )；每日翻動(dòng)一次 (180 度 )，孵育 9 ~ 12 天； ? (2) 取雞胎； ? (3) 用眼科剪剪開胸腔，剝出心臟，置入皿中用 Hanks 液漂洗1 ~ 2 次； ? (4) 小心剪除大的動(dòng)靜脈，保存心室肌；用組織塊或消化培養(yǎng)法均可。 第四十二頁(yè)，共七十頁(yè)。 明膠制備比較簡(jiǎn)單，常用 Hanks 液配的 ％明膠。 (一 ) 骨骼肌細(xì)胞培養(yǎng) ? 動(dòng)物胚或幼體的 大腿肌組織為最好的培養(yǎng)材料 。 (5) 用針頭輕輕挑起腹壁，使動(dòng)物體微傾向一側(cè)，使腹腔中液體集于針頭下吸取入針管內(nèi)； (6) 小心拔出針頭，把液體注入離心管中， (4℃ )離心 10 分鐘后，去上清，加 10 ml Eagle 培養(yǎng)基； (7) 計(jì)數(shù)細(xì)胞，每只小鼠可產(chǎn)生 20 ~ 30 106 細(xì)胞，其中90％為巨噬細(xì)胞； (8) 為獲取 3 105 個(gè)貼附細(xì)胞／平方厘米，需接種 106／ m1； (9) 為純化培養(yǎng)細(xì)胞，去除其它白細(xì)胞，接種數(shù)小時(shí)后，去除培養(yǎng)液，用 Eagle 液沖洗 1 ~ 2 次后，再加新Eagle 培養(yǎng)液置 37℃ CO2 溫箱中培養(yǎng)。 第三十七頁(yè)，共七十頁(yè)。 第三十六頁(yè)，共七十頁(yè)。 (二 ) 巨噬細(xì)胞培養(yǎng) ? 巨噬細(xì)胞屬免疫細(xì)胞，有多種功能，是研究細(xì)胞吞噬、細(xì)胞免疫和分子免疫學(xué)的重要對(duì)象。 ?在培養(yǎng) ES細(xì)胞時(shí)，應(yīng)選擇第 3~5代的小鼠成纖維細(xì)胞作為飼養(yǎng)層細(xì)胞。 ?用人或動(dòng)物胚體為好；動(dòng)物可用小鼠或雞胚，去頭和內(nèi)臟，剪成小碎塊后，用胰蛋白酶消化法培養(yǎng)；如為人胚，可取皮膚培養(yǎng)。 (3) 用培養(yǎng)液漂洗兩次，以去除漂浮細(xì)胞； (4) 剩余內(nèi)皮細(xì)胞島如小 (5 ~ 20 個(gè)細(xì)胞 ) 而少時(shí)，生長(zhǎng)增殖常變得緩慢或完全不生長(zhǎng)，此時(shí)需參加 3T3等飼細(xì)胞；飼細(xì)胞接種量為 4000 細(xì)胞／ cm2； (5) 當(dāng)內(nèi)皮細(xì)胞充滿所有飼細(xì)胞空間后，用胰蛋白酶消化、離心、參加腫瘤條件培養(yǎng)基； (6) 接種入明膠底物皿中繼續(xù)培養(yǎng) (飼細(xì)胞死亡被淘汰 )，細(xì)胞增殖生長(zhǎng)集合后，按 1:5 傳代。 (5)再離心：沉淀物用培養(yǎng)液重懸并離心，再重懸，再離心，共兩次； (6) 制細(xì)胞懸液：末次沉淀物仍用含 10％小牛血清的 Dulbecco 改進(jìn) Eag1e 氏培養(yǎng)液重懸后，稍吹打； (7)接種：接種入鋪有明膠底層的培養(yǎng)皿中， 37℃ 培養(yǎng)；在培養(yǎng)頭 1 ~ 3 小時(shí)中，毛細(xì)血管小段和內(nèi)皮細(xì)胞最先貼附于底物上，而腎上腺細(xì)胞和成纖維細(xì)胞卻仍在培養(yǎng)液中漂??； (8)換液：吸除培養(yǎng)液，再參加腫瘤條件培養(yǎng)液；每?jī)商鞊Q液一次。 (3) 在細(xì)胞生長(zhǎng)接近完全集合時(shí)，收集培養(yǎng)液制成條件培養(yǎng)基；再用含 10％小牛血清的新培養(yǎng)液后，也每隔兩天收集一次，可獲多量條件培養(yǎng)基； (4) 4000 轉(zhuǎn)／別離心后，再通過 微孔濾膜濾過， 20℃ 凍存?zhèn)溆?(臨用前融解 )。 第二十三頁(yè)，共七十頁(yè)。 第二十一頁(yè)，共七十頁(yè)。 第十九頁(yè)，共七十頁(yè)。 (1) 無(wú)菌解剖動(dòng)物，取出肝臟，先用 BSS 洗除血污； (2) 取 5ml 注射器一支，吸取消化液后，把 注射器頭輕輕插入肝管中 ，用線繩結(jié)扎牢固，以防消化液漏出，輕輕把消化液注入膽管系統(tǒng)，并不時(shí)輕柔壓肝臟，以便消化液進(jìn)入肝小葉中； 消化液在肝內(nèi)停留 20~ 30 分后，在吸出消化液的同時(shí)并輕柔壓肝臟，以使肝細(xì)胞脫落和消化液吸出； 第十七頁(yè)，共七十頁(yè)。肝組織易于貼壁，生
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