實體瘤組織單細(xì)胞懸液制備(文件)
【正文】 絲）、或裹少許脫脂棉制成，裝入試管中高壓滅菌后備用（也可用特制電熱燒灼器刮除）。4) 當(dāng)三個瓶內(nèi)都含有培養(yǎng)液后，均在溫箱中繼續(xù)培養(yǎng)。用此法處理后，成纖維細(xì)胞比腫瘤細(xì)胞易先脫落。如成纖維細(xì)胞未被除凈，可再次重復(fù)。(三) 凡在超凈臺外操作的步驟，各器皿需用蓋子或橡皮塞，以防止細(xì)菌落入。(三) 操作動作要準(zhǔn)確敏捷，但又不能太快，以防空氣流動，增加污染機會。(六) 吸溶液的吸管等不能混用。(五) 瓶子開口后要盡量保持45176。試劑等瓶口也要擦拭。細(xì)胞計數(shù)可在有菌環(huán)境中進行。4. 膠原酶消化法：本法是利用成纖維細(xì)胞對膠原酶較為敏感的特點，通過消化進行選擇。必要時可反復(fù)處理多次，直至癌細(xì)胞純化為止。1) 待細(xì)胞生長達一定數(shù)量后，倒出舊培養(yǎng)液，用胰酶消化后，Hanks /PBS緩沖液沖洗2次，加入不含血清的培養(yǎng)液，吹打制成細(xì)胞懸液；2) 取編號為此A、B、C三個培養(yǎng)瓶；首先把懸液接種入A培養(yǎng)瓶中。而且成纖維細(xì)胞常比腫瘤細(xì)胞生長得快，最終能壓制腫瘤細(xì)胞的生長。三、 腫瘤細(xì)胞培養(yǎng)(一) 腫瘤細(xì)胞培養(yǎng)1. 腫瘤細(xì)胞對培養(yǎng)基的要求不如正常細(xì)胞嚴(yán)格，一般常用的 RPMIl6 DMEM、等培養(yǎng)基等皆可用于腫瘤細(xì)胞培養(yǎng)。二、 實體瘤組織中抗癌藥物含量檢測1. 按上述取材步驟取出合適的腫瘤組織，分成A、B兩份，分別置于含有12 ml PBS緩沖液的無菌離心管中（離心管及PBS液已稱重），準(zhǔn)確稱量腫
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