xxxx年 分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)(1)(文件)
【正文】 會(huì)使細(xì)胞破裂、死亡，影響轉(zhuǎn)化效率。 ② 轉(zhuǎn)化連接產(chǎn)物的受體菌 在含抗菌素的培養(yǎng)皿中也長(zhǎng)出了菌落，這不是受體菌的抗藥性的自發(fā)突變株，肯定是質(zhì)粒 DNA轉(zhuǎn)入細(xì)菌后的轉(zhuǎn)化體，這是因?yàn)閹Э顾幮缘馁|(zhì)粒 DNA轉(zhuǎn)入細(xì)菌后，使轉(zhuǎn)化體產(chǎn)生抗藥性這一遺傳特性的結(jié)果。 ，除考慮成本外，酶液中的微量雜質(zhì)可能干擾隨后的反應(yīng)，如果底物 DNA較多可以延長(zhǎng)酶反應(yīng)時(shí)間。如： DNA溶液體積不能太大，否則 DNA溶液中其他成分會(huì)干擾酶反應(yīng)。 五、注意事項(xiàng) 試驗(yàn)設(shè)定二組， 宿主菌涂布； 轉(zhuǎn)化連接產(chǎn)物的受體菌涂布。 5. 離心操作一定要在低溫下進(jìn)行，所用的水、 Eppendorf管都要在冰上預(yù)冷，不能離開冰浴，否則細(xì)胞轉(zhuǎn)化率將會(huì)降低。 2. 吸頭、離心管應(yīng)高壓滅菌，每次吸頭用畢應(yīng)更換，不要互相污染試劑。 c. （期間應(yīng)注意觀察，當(dāng)菌落生長(zhǎng)良好，而相鄰菌落尚未相互重疊時(shí)，即停止培養(yǎng)?；靹蚝?，于 37?C（ 100～ 150rpm）溫和搖振培養(yǎng) 60min，使細(xì)胞恢復(fù)正常生長(zhǎng)狀態(tài)，并表達(dá)質(zhì)粒編碼的抗生素抗性基因（ kanar）。 三、實(shí)驗(yàn)材料與試劑 凝乳酶 四、實(shí)驗(yàn)步驟 1．載體 pET28aegfp和外源 DNA片段的限制性酶切：（ 50μl 反應(yīng)體系，用 tube，冰上操作） 試劑 加樣量 DNA 5μl EcoRI 1μl XhoI 1μl 10 buffer 5μl ddH2O 38μl 37℃
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